替普瑞酮通过E3泛素连接酶CHIP减轻LPS引起的心肌炎症反应和心功能障碍

目的:探究替普瑞酮又称香叶基香叶基丙酮,GGA)对脂多糖(LPS)诱导的心功能障碍的治疗作用及机制。方法:(1)取8周龄C57BL/6雄性野生型小鼠和热休克蛋白70(HSP70)羧基末端相互作用蛋白(CHIP)基因敲除小鼠,随机分为对照组、LPS组、LPS+GGA组和GGA组,每组8只。用腹腔注射LPS(25 mg/kg)的方法建立模型,于LPS刺激后1 h给予小鼠腹腔注射GGA(100 mg/kg)。利用小动物超声系统评估小鼠心脏功能;采集各组小鼠血清,检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;HE染色观察病理学改变;ELISA检测心脏组织中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平;Western blot检测各组心脏组织HSP70、CHIP、核转运蛋白α2(KPNA2)、髓过氧化物酶(MPO)、血管细胞黏附分子(VCAM)和细胞间黏附分子(ICAM)的蛋白表达以及细胞核NF-κB的水平。(2)利用小鼠心肌细胞HL-1,建立LPS刺激的离体细胞炎症模型。ELISA检测细胞上清中TNF-α和IL-6的水平;Western blot检测心肌细胞中HSP70、CHIP和KPNA2蛋白表达;免疫荧光染色观察细胞核NF-κB的表达。结果:(1)GGA有效改善LPS刺激小鼠的心脏功能,显著提高射血分数和左室短轴缩短率(P<0.01),减少血清CK-MB和LDH含量(P<0.01),减轻心肌损伤。(2)GGA显著减少LPS引起的TNF-α和IL-6炎症因子的释放(P<0.01),以及NF-κB的入核,降低心肌组织中KPNA2、MPO、VCAM和ICAM蛋白表达,增加心肌组织和细胞HSP70的水平(P<0.01)。(3)在CHIP基因敲除的心肌细胞和小鼠中,GGA不能抑制LPS引起的炎症反应,失去了改善LPS刺激小鼠心脏功能的作用。结论:GGA能够减轻LPS引起的心功能障碍,其作用机制与升高HSP70的表达,促进CHIP的活化,减少NF-κB的入核,抑制炎症因子的释放有关。CHIP的敲除使GGA丧失了减轻LPS诱导的炎症反应和心肌损伤的作用。

CHIP介导的OGG1在老年性白内障发展过程中作用

目的探讨热休克蛋白70羧基末端反应蛋白(CHIP)介导的8-氧代鸟嘌呤-DNA糖基化酶(OGG)1在老年性白内障发展过程中的作用。方法培养SRA01/04永生化人晶状体上皮细胞,分为空白对照组、空载体质粒转染组、CHIP过表达质粒转染组、细胞氧化损伤模型组。免疫沉淀实验检测OGG1蛋白的泛素化修饰及与E3泛素连接酶CHIP的结合能力。使用手持中波紫外线检测灯照射建立细胞氧化损伤模型,通过转染CHIP质粒提升其表达,Western印迹检测细胞中OGG1蛋白表达变化。结果免疫沉淀实验结果显示,晶状体上皮细胞中存在OGG1蛋白的泛素化修饰;UbiBrowser软件预测CHIP可能是引发OGG1泛素化修饰的E3泛素连接酶。Western印迹检测结果显示,CHIP能够与OGG1相互结合,提示OGG1可能参与了OGG1蛋白的泛素化修饰过程。在中波紫外线照射10 min时,晶状体上皮细胞中CHIP蛋白相对表达量明显低于其他中波紫外线照射时间;在中波紫外线照射20~40 min时,随着照射时间的增加,晶状体上皮细胞中CHIP蛋白相对表达量逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05)。根据后续实验建立的细胞氧化损伤模型均选用中波紫外线照射10 min后,再孵育24 h。CHIP过表达质粒转染组晶状体上皮细胞中CHIP蛋白相对表达量明显高于空载体质粒转染组和空白对照组(P<0.05);细胞氧化损伤模型组晶状体上皮细胞中OGG1蛋白相对表达量明显高于空白对照组(P<0.01);CHIP过表达质粒转染组上述指标明显低于细胞氧化损伤模型组、空载体质粒转染组(P<0.05)。结论E3泛素连接酶CHIP可诱发OGG1泛素化降解,造成晶状体上皮细胞中损伤性DNA聚集,导致老年性白内障的发生与发展。

E3泛素连接酶CHIP与上皮性癌关系研究

泛素化修饰是机体一种非常重要的蛋白质翻译后修饰方式,其广泛参与细胞周期、DNA修复、信号转导、转录调控等生物学过程。近些年,蛋白质泛素化修饰在恶性肿瘤发生和发展中的作用,受到国内外广泛关注。尤其是E3泛素连接酶,它能特异性识别作用底物,泛素化修饰的特异性就取决于该连接酶。研究表明,E3泛素连接酶功能异常与恶性肿瘤等多种疾病的病理过程密切相关,因此分析特定的E3连接酶在恶性肿瘤中的作用和机制,有助于加深对恶性肿瘤发生、发展过程中分子机制的认识,为恶性肿瘤相关分子分类和治疗靶点提供实验基础。本文对E3泛素连接酶CHIP的功能,尤其与上皮性癌关系的研究进展进行综述。

过表达E3泛素连接酶CHIP对脑胶质瘤细胞U251周期及凋亡的影响

目的观察E3泛素连接酶CHIP(Hsc70羧基末端相互作用蛋白)过表达质粒对脑胶质瘤细胞系U251周期及凋亡的影响。方法用pcDNA3.1空载质粒、pcDNA3.1-CHIP质粒转染脑胶质瘤细系U251,Western blot检测CHIP蛋白的表达,流式细胞仪检测CHIP蛋白过表达对U251细胞系周期及凋亡的影响。结果与对照组相比,CHIP组U251细胞CHIP蛋白表达量增加;与对照组相比,CHIP组U251细胞G0/G1期所占比例增加(P<0.01),S期(P<0.001)、G2/M期所占比例减少(P<0.05),与对照组相比,CHIP组U251细胞凋亡率增加(P<0.001)。结论 CHIP质粒的过表达可干扰CHIP蛋白的表达,CHIP作为肿瘤抑癌因子抑制胶质瘤细胞U251 G0/G1期进展,促进胶质瘤细胞U251凋亡。

制麦参数对过滤后啤酒形成浑浊的影响

制麦改变了大麦的化学和酶的成分。制麦期间合成酶、细胞壁（戊聚糖，蛋白质等）降解和淀粉分解。发芽程度决定最终啤酒以下几方面的质量：口感，泡沫和浑浊趋势（不同蛋白质），加工性能（如β-葡聚糖引起的粘度），发酵程度（FAN、糖含量）等。本文主要研究不同溶解度的麦芽对过滤后啤酒浊度的影响。通过分析不同发芽阶段的麦芽指标及其对最终啤酒成分的影响，主要是蛋白质含量和种类。运用Lab—on—a—Chip技术分析蛋白质部分，毛细管电泳测定分子量。使用双向凝胶电泳（2D—PAGE）来进一步支持Lab—on—a—Chip技术分析。此外，完成普通麦芽和啤酒分析、浊度和过滤性能的测定，跟踪测定麦芽到啤酒过程中蛋白质的组成。发现啤酒中的最终蛋白质组成未发生变化，高含量的25～28kDa蛋白质部分能增加啤酒的浊度。