Chn1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株的构建和鉴定

目的通过慢病毒介导的RNA干扰技术,构建趋化素基因Chn1的小分子干扰RNA慢病毒表达载体,建立Chn1基因缺陷性小鼠血管平滑肌细胞株,为下一步采用该细胞株研究趋化素与冠状动脉介入治疗后再狭窄的关系奠定实验基础。方法以小鼠Chn1基因mRNA序列作为干扰靶点,设计3组靶向Chn1的shRNA序列,构建慢病毒载体,并筛选出干扰最佳的shRNA,在293T细胞对慢病毒进行包装和滴度测定。体外培养小鼠血管平滑肌细胞,转染慢病毒形成Chn1基因缺陷性血管平滑肌细胞株,用实时定量荧光(real time)PCR检测感染慢病毒后细胞中Chn1 mRNA水平。结果基因测序结果表明慢病毒载体构建成功,慢病毒的滴度约为7.4×106TU/m L。3个p LVX-shRNA均能下调Chn1 mRNA,其中p LVX-shRNA3的沉默效果最明显(P<0.01)。将干扰效果最佳的慢病毒载体p LVX-shRNA3包装慢病毒并转染至血管平滑肌细胞中形成基因缺陷细胞株,用real time PCR血管平滑肌细胞中Chn1 mRNA水平,该细胞株中Chn1 mRNA水平显著下降(P<0.01)。结论慢病毒介导的siRNA可有效沉默血管平滑肌细胞中Chn1基因的表达。

嵌合蛋白1基因启动子两多态位点与阿尔茨海默病的相关性研究

目的探讨嵌合蛋白1(chimerin1,CHN1)基因启动子区多态性、载脂蛋白E(apolipoprotein,APOE)基因多态性和阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的相关性。方法通过使用TaqMan-PCR法检测单核苷酸多态性方法,观察380例日本AD患者(包括327例迟发型AD与53例早发型AD)和380例非痴呆对照组CHN1基因启动子(rs3732315与rs1320875)及APOE基因的多态性分布,并分析与AD的相关性。结果CHN1基因启动子rs3732315上A/T多态位点与rs1320875上A/G多态位点分别与AD无明显相关性(P值分别为0.094,0.17)。进一步在LOAD,EOAD与对照组的比较中发现rs3732315AA基因型与rs1320875GG基因型与EOAD无明显相关(P值分别为0·055,0·065)。结论CHN1基因启动子区rs3732315与rs1320875多态位点与AD无明显相关性,但不能排除rs3732315AA基因型与rs1320875GG基因型微弱增加了EOAD的发病风险,其真正意义有待在大样本、多中心人群中进一步阐明。