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miR-28-5p靶向BECN1对OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的调控作用
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作者 康天 李杨 +4 位作者 路晓飞 张文婷 朱秀丽 刁玉巧 江莲 《河北医药》 CAS 2024年第6期805-810,共6页
目的探讨miR-28-5p靶向BECN1在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程中的作用及机制。方法通过TUNEL荧光染色、Western blot实验明确miR-28-5p及姜黄素在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的作用,经在线预测并进一步通过双荧光素酶报告基因检测明确miR-28... 目的探讨miR-28-5p靶向BECN1在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程中的作用及机制。方法通过TUNEL荧光染色、Western blot实验明确miR-28-5p及姜黄素在OCI-LY7细胞凋亡及自噬过程的作用,经在线预测并进一步通过双荧光素酶报告基因检测明确miR-28-5p和BECN1的靶向关系。结果TUNEL染色和caspase-3蛋白水平检测:与对照组比较,姜黄素明显增加凋亡细胞百分比并表达裂解蛋白caspase-3(P<0.05)。相比姜黄素单独作用,细胞凋亡被miR-28-5p显著减弱抑制(P<0.05)。与对照组比较,姜黄素组beclin1和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值显著降低、P62蛋白表达明显升高(P<0.05);与姜黄素组比较,姜黄素+miR-28-5p抑制剂组beclin1表达和LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ比值明显升高、P62蛋白表达明显降低(P<0.05)。通过在线数据库预测:miR-28-5p与BECN1存在靶向的关系;双荧光素酶报告基因实验显示:与阴性对照组比较,miR-28-5p模拟物显著降低BECN1-wt组的荧光素酶活性,但miR-28-5p模拟物不影响BECN1-mut组的荧光素酶活性。结论miR-28-5p介导姜黄素促OCI-LY7细胞凋亡作用。BECN1是miR-28-5p的靶基因,姜黄素诱导miR-28-5p过表达可直接靶向BECN1抑制自噬过程。 展开更多
关键词 miR-28-5p BECN1 人淋巴瘤细胞系OCI-LY7细胞 细胞自噬 细胞凋亡
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国产和进口DMEM培养基培养CHO-C_(28)工程细胞的质量评价
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作者 艾智武 吕东升 +1 位作者 陈文庆 孙燮钧 《细胞生物学杂志》 CSCD 1999年第4期203-207,共5页
我们用10L转瓶培养能高效表达HBsAg的重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO-C_(28)细胞株),在相同的培养条件下比较国产和进口DMEM培养基的质量。结果表明,两种DMEM培养的细胞之生长及分泌的HBsAg之滴度没有显著改变,国产DMEM培养的细胞收液的沉淀... 我们用10L转瓶培养能高效表达HBsAg的重组中国仓鼠卵巢细胞(CHO-C_(28)细胞株),在相同的培养条件下比较国产和进口DMEM培养基的质量。结果表明,两种DMEM培养的细胞之生长及分泌的HBsAg之滴度没有显著改变,国产DMEM培养的细胞收液的沉淀收率略高于进口DMEM的,前者的最后收率也不低于后者。两种DMEM培养的细胞收液经纯化后,HBsAg的各项指标都符合基因工程乙肝疫苗制造及检定规程的标准,从试验结果可以看出,用国产DMEM培养基替代进口DMEM培养基是完全有可能的。 展开更多
关键词 DMEM培养基 cho-c28细胞株 HBSAG 纯化 乙肝疫苗
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生物反应器规模化培养重组CHO-C28细胞表达HBsAg的研究
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作者 张英 徐枫 +1 位作者 张平 宋涛 《微生物学免疫学进展》 2007年第1期22-25,共4页
应用新型聚酯纤维盘片,采用连续灌注培养方式,分别试验了细胞接种量、pH、DO、罐流速度等因素对CHO-C28细胞生长分泌HBsAg的影响,初步建立了5L生物反应器生产重组乙型肝炎疫苗的生产工艺。经3次试验培养,每次培养60d,较适宜的培养条件... 应用新型聚酯纤维盘片,采用连续灌注培养方式,分别试验了细胞接种量、pH、DO、罐流速度等因素对CHO-C28细胞生长分泌HBsAg的影响,初步建立了5L生物反应器生产重组乙型肝炎疫苗的生产工艺。经3次试验培养,每次培养60d,较适宜的培养条件确定为:pH6.80-7.10,DO 20%-30%,温度36-37℃,灌流速度138ml/h,接种浓度1.9×106cell/ml。收获液的HBsAg平均滴度是1∶256,最高滴度可达1∶512,纯化后的HBsAg产率为0.912mg/L。最后对反应器培养工艺与现行的转瓶培养工艺进行了比较,生物反应器培养具有可控制培养条件、不易污染和可使HBsAg产率提高等优点。 展开更多
关键词 cho-c28细胞 乙型肝炎表面抗原 生物反应器 聚酯纤维盘片(NWFP)
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蛋白酶激活受体激活对A549细胞IL-28和IL-29 mRNA表达的影响 被引量:2
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作者 张慧云 王海燕 +1 位作者 马文静 何韶衡 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期833-837,841,共6页
目的用蛋白酶和蛋白酶激活受体激动肽(PAR-AP)刺激A549细胞后检测细胞中白细胞介素IL-28和IL-29 mRNA表达情况以分析蛋白酶激活受体激活对人肺上皮细胞IL-28和IL-29基因表达的影响。方法用最佳工作浓度的凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶... 目的用蛋白酶和蛋白酶激活受体激动肽(PAR-AP)刺激A549细胞后检测细胞中白细胞介素IL-28和IL-29 mRNA表达情况以分析蛋白酶激活受体激活对人肺上皮细胞IL-28和IL-29基因表达的影响。方法用最佳工作浓度的凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶及蛋白酶激活受体-1,2,3,4的激动肽刺激A549细胞后,分别在第2、8、16h收集细胞,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)方法分析A549细胞内IL-28和IL-29 mRNA表达。结果凝血酶作用A549后,细胞内IL-29 mRNA表达增强,高达对照组9.6倍;而细胞内IL-28 mRNA表达无明显变化。胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强,分别为对照组6.1倍和4.4倍。类胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强分别高达对照组的3.1倍和2.1倍。弹性蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29 mRNA表达增强高达对照组5.1倍而IL-28 mR-NA无明显变化。PAR-1AP(SFLLR)作用后,A549细胞内IL-29 mRNA表达增强为对照组1.7倍而IL-28 mRNA表达无明显变化。PAR-2AP(SLIGKV及tc-LIGRLO)作用后,A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强分别为对照组4.9倍和2.4倍。PAR-3AP(TFRGAP)作用后,A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达无明显变化。PAR-4AP(GYPGQV)作用后A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强高达对照组4.1倍和5.5倍。结论 A549细胞蛋白酶激活受体的激活可以上调细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达。 展开更多
关键词 人肺上皮细胞癌A549 白细胞介素-29 白细胞介素-28 蛋白酶 蛋白酶激活受体
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PICE抑制STAT3的激活增强IFN-α对SK-MEL-28细胞系的抗肿瘤作用
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作者 林能兴 黄长征 +4 位作者 刘志香 刘厚君 占部和敬 古江增隆 涂亚庭 《中国麻风皮肤病杂志》 2007年第11期953-955,共3页
目的:评价用3,5,3’,4’盐酸四氢唑啉反1-2二苯乙烯(piceatannol,PICE)抑制细胞信号传导与转录活化因子3(STAT3)的激活,对IFN-α在SK-MEL-28细胞系的抗肿瘤作用的影响。方法:用细胞内染色法检测PICE预处理对IFN-α刺激后SK-MEL-28细胞... 目的:评价用3,5,3’,4’盐酸四氢唑啉反1-2二苯乙烯(piceatannol,PICE)抑制细胞信号传导与转录活化因子3(STAT3)的激活,对IFN-α在SK-MEL-28细胞系的抗肿瘤作用的影响。方法:用细胞内染色法检测PICE预处理对IFN-α刺激后SK-MEL-28细胞系内磷酸化STAT1(p-STAT1)和磷酸化STAT3(p-STAT3)表达的变化,MTT比色法检测细胞增殖活性,用ELISA法检测细胞培养上清中的血管内皮细胞生长因子(VEGF)。结果:IFN-α刺激细胞后,细胞内的p-STAT1,p-STAT3的表达均有不同程度的升高,且升高比例与IFN-α浓度成正比;PICE很好地抑制了IFN-α诱导p-STAT3的表达,但对IFN-α诱导的p-STAT1的表达没有影响,并且PICE和IFN-α与肿瘤细胞共培养时,比单用IFN-α能更好地抑制肿瘤细胞生长和抑制STAT3诱导的VEGF的分泌。结论:PICE抑制STAT3的激活,能明显增强SK-MEL-28细胞系的抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 干扰素-Α PICE SK—MEL-28细胞系
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虫草素抑制人胃癌细胞MKN-28运动侵袭能力研究 被引量:4
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作者 孙光斌 兰岚 +2 位作者 唐红梅 李宁 王悦 《天津中医药大学学报》 CAS 2014年第3期152-156,共5页
[目的]探讨虫草素对人胃癌细胞MKN-28体外迁移、侵袭能力的影响及其可能作用的分子机制。[方法]CCK8法检测虫草素对MKN-28细胞的增殖抑制作用,体外迁移、侵袭实验观察虫草素对人胃癌细胞MKN-28迁移、侵袭能力的影响,反转录聚合酶链反应(... [目的]探讨虫草素对人胃癌细胞MKN-28体外迁移、侵袭能力的影响及其可能作用的分子机制。[方法]CCK8法检测虫草素对MKN-28细胞的增殖抑制作用,体外迁移、侵袭实验观察虫草素对人胃癌细胞MKN-28迁移、侵袭能力的影响,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测虫草素作用24 h后MKN-28细胞Ezrin蛋白,基质金属蛋白9(MMP9)信使核糖核酸(mRNA)表达变化。[结果]200~800μg/mL虫草素可明显抑制MKN-28胃癌细胞增殖,体外迁移实验显示虫草素组细胞划痕闭合约18%,对照组细胞划痕闭合约25%,而表皮生长因子(EGF)组闭合约48%。虫草素组显著低于另两组(P<0.05)。体外侵袭实验结果表明虫草素组穿过人工基底膜的细胞数明显减少(P<0.05);虫草素组Ezrin和MMP9的表达明显下调(P<0.05)。[结论]虫草素可能通过下调Ezrin及MMP9表达抑制人胃癌细胞MKN-28细胞的迁移与侵袭能力,从而发挥其抑制肿瘤生长的作用。 展开更多
关键词 虫草素 胃癌 MKN-28细胞 EZRIN蛋白 基质金属蛋白9
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TGF-β对C-28/I2人软骨细胞聚集蛋白聚糖硫酸化修饰的影响 被引量:3
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作者 罗明秀 马海江 +4 位作者 张甜 田嫁 李正正 陈静宏 曹峻岭 《宁夏医学杂志》 CAS 2021年第6期481-484,共4页
目的观察TGF-β降低对C-28/I2人软骨细胞外基质聚集蛋白聚糖(aggrecan)硫酸化修饰的影响。方法设计构建3个不同靶点人源TGF-β1干扰慢病毒载体,荧光鉴定病毒包装成功后将其感染C-28/I2人软骨细胞系,感染72 h后提取细胞总蛋白,用Western-... 目的观察TGF-β降低对C-28/I2人软骨细胞外基质聚集蛋白聚糖(aggrecan)硫酸化修饰的影响。方法设计构建3个不同靶点人源TGF-β1干扰慢病毒载体,荧光鉴定病毒包装成功后将其感染C-28/I2人软骨细胞系,感染72 h后提取细胞总蛋白,用Western-Blot法分别检测TGF-β1以及aggrecan硫酸化修饰相关酶蛋白因子PAPSS2、PAPST1、CHST15蛋白的相对表达量。结果荧光检测结果表明,TGF-β1干扰慢病毒载体构建成功。TGF-β1慢病毒感染C-28/I2人软骨细胞后与阴性对照病毒组相比,TGF-β1、PAPSS2、PAPST1和CHST15的蛋白表达均有明显降低,其中TGF-β1和PAPSS2的蛋白表达降低为最显著,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论TGF-β信号可能是通过调控下游相关酶蛋白因子的表达来对软骨细胞aggrecan硫酸化的修饰产生一定的影响。 展开更多
关键词 TGF-Β 聚集蛋白聚糖 C-28/I2人软骨细胞系 硫酸化修饰
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Expression of matrix metallo-proteinase-28 in human normal cytotrophoblast cells and a choriocarcinoma cell line,JEG-3 被引量:4
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作者 Zhang, J Cao, YJ +3 位作者 Liu, WM Zhao, BS Zeng, GQ Duan, EK 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2002年第9期732-736,共5页
There are striking similiarities present between the behavior of invasive placentaL cells and that of invasive cancer cells. Matrix metalloproteinases (MMPs) are one of the most important mediators. MMP-28, the new me... There are striking similiarities present between the behavior of invasive placentaL cells and that of invasive cancer cells. Matrix metalloproteinases (MMPs) are one of the most important mediators. MMP-28, the new member of MMPs, was sequenced and identified recently. Expression of MMP-28 mRNA and protein in the cytotrophoblast cells and a choriocarcinoma cell line, JEG-3 cell, was conducted by zymography, RT-PCR and Northern blot. There is MMP-28 mRNA expression in both the cytotrophoblast cells and JEG-3 cells by RT-PCR. The activity of MMP-28 in cytotrophoblast cells was significantly weaker than that in JEG-3 (P 【 0.01) by zymography. Furthermore, mRNA expression of MMP-28 was significantly stronger (P 【 0.001) in JEG-3 than in human cytotrophoblast cells in a time-dependent way by Northern Blot. Our results suggest that MMP-28 may play a role in some of the tissue-remodeling events associated with normal pregnancy and tumor progression. 展开更多
关键词 CYTOTROPHOBLAST cell CHORIOCARCINOMA cell line JEG-3 MATRIX metalloproteinases MMP-28.
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