α-、β-雌二醇和中药有效成分ZDY101对CHOm_2转基因细胞M_2受体的影响

本文用细胞培养技术 ,对比观察了α -雌二醇 (α -E2 )、β -雌二醇 (β -E2 )和滋阴药有效成分ZDY10 1对转染M2 受体基因的CHO细胞M2 受体密度的影响。在CHOm2 转基因细胞培养 2 4h后 ,加入不同浓度的α -E2 、β -E2 或ZDY10 1。继续培养 4 8h后收集细胞 ,用3 H -QNB单点法测定M2 受体密度。发现α-E2 及 β -E2 在浓度为 1× 10 -5mol/L时 ,M2 受体密度明显高于对照组 ,与相同浓度的ZDY10 1作用相仿。以上结果提示 :由于α -E2 及β-E2 对M2 受体密度的作用相似 ,所以E2 对M2 受体的调整作用 ,其受体后的信息传递机制很可能与对雌性器官的调整作用是不同的 ;由于ZDY10 1与E2 结构上和调节M2 受体的作用有类似处 ,它和E2 及E2

CHOM-CT-SiO_2亲和介质的制备及胰蛋白酶的纯化

目的为提高胰蛋白酶的纯度、收率,尝试制备一种新的亲和介质用于其分离纯化。方法用壳聚糖包裹硅胶制得CTS-SiO2基质,再与从鸡蛋中分离出的鸡卵黏蛋白(CHOM)偶联成CHOM-CT-SiO2亲和介质;运用介质吸附,一步洗脱后得到胰蛋白酶纯品。结果与结论鸡卵黏蛋白能高效地与CTS-SiO2基质偶联,亲和介质选择性好、非特异吸附小,该介质可有效特异地亲和吸附胰蛋白酶,比活性5.1×103U.mg-1,收率94%。

地黄活性成分梓醇对转基因CHO细胞M_2受体的调节作用

目的探讨地黄活性成分梓醇对转染M2受体亚型基因的CHO细胞系(CHOm2细胞)M2受体密度作用。方法采用衰老CHOm2细胞,常规培养后加入不同浓度梓醇及对照生理盐水,放射配基结合分析测定M2受体密度,Lowry法测定蛋白含量;同时观察了梓醇与M受体结合位点的关系及对乙酰胆碱酯酶的作用。结果梓醇在终浓度10-5、10-4mol.L-1明显升高衰老CHOm2细胞M2受体密度(P<0.01),但不占领M受体结合位点,也不抑制乙酰胆碱酯酶活性(P>0.05)。结论梓醇能上调衰老CHOm2细胞M2受体密度,可能是地黄治疗AD的主要有效成分。

知母活性成分ZDY101调节M2受体mRNA稳定性的研究

目的探讨知母活性成分ZDY101对M2受体mRNA稳定性的调节。方法转基因细胞CHOm2在含ZDY101或溶媒的培养基中培养不同时间后,实时荧光定量PCR检测M2受体的mRNA水平;用放线菌素D抑制基因转录,测定M2受体mRNA的时相变化,求出其mRNA的半衰期,比较ZDY101组和溶媒组的差别。结果ZDY101作用一定时间后M2受体的mRNA水平高于对照组;ZDY101作用24h以上,ZDY101组M2受体的mRNA半衰期明显高于对照组。结论ZDY101能提高M2受体mRNA的稳定性,使细胞M2受体的mRNA含量升高,是ZDY101提高M2受体密度的重要机制之一。

用转染m2胆碱受体基因的CHO细胞观察知母皂甙元的作用

目的观察知母甾体皂甙元 (sarsasapogenin ,SAR)对M2 受体亚型的调节作用。 方法采用转染了m2胆碱受体基因的CHO细胞为模型 ,以非选择性的3H -QNB作单点放射配基结合分析。 结果CHOm2细胞受体密度在培养 48h达顶峰 ,以后呈进行性下降。SAR对下降的CHOm2细胞M2 受体密度有明显的上调作用 ,这一作用有一定浓度依赖性。 结论SAR对下降的M2 受体密度具有上调作用。

中药活性成分对M_1受体及其偶联G_(q/11α)的影响

目的 :观察 ZMA ,QST,QT对 M1 受体及其偶联 G-蛋白结合功能的影响。方法 :以 CH Om 1细胞为模型在使用不同药时 ,用放射配基结合分析法检测 M1 受体密度 ,以非 GTP ase水解的 [35 S] GTPγS与 G-蛋白的不可逆结合检测 G-蛋白的结合活性 ,并计算偶联比率 ;以 Western blot方法检测 Gq/1 1α的量。结果 :ZMA10 - 5 m ol/L 及 QST10 - 5 m ol/L 能够提高M1 受体、M1 受体偶联的 G-蛋白的活性。并改善其偶联比率。Q ST10 - 5 m ol/L 还能够提高 Gq/1 1α的量。结论 :ZMA和 QST作用机理可能不同 :ZMA促进偶联的机理很可能主要是提高 M1 受体后 G -蛋白的结合活性提高 ,并且改善 M1 受体和Gq/1 1α的偶联。Q ST可能还与促进 Gq/1 1α合成有关。

新蛋白质合成介导知母活性成分对M_2受体稳定性的调节作用

目的探讨知母活性成分ZMS提高CHOm2细胞毒蕈碱样乙酰胆碱2型受体(M2受体)mRNA表达的机制。方法体外培养至80%～90%融合的CHOm2细胞分为ZMS1组(单纯添加1×10-5mol/LZMS作用24h)、ZMS2组(添加1×10-5mol/LZMS作用24h后加入1μg/mL环己酰亚胺作用12h)、ZMS3组(加入1μg/mL环己酰亚胺预处理4h后加入1×10-5mol/LZMS作用24h),以上各组分别设立对照组(以等体积DMSO替代ZMS,其他处理与相应ZMS组相同)。各组细胞培养基中均加入放线菌素D抑制mRNA合成,于不同时间点收集CHOm2细胞,Real-time PCR检测M2受体mRNA相对表达量并计算半衰期。结果与相应对照组比较,ZMS1组和ZMS2组CHOm2细胞M2受体mRNA的半衰期明显延长,分别为(4.75±0.54)hvs(2.13±0.23)h和(5.43±1.13)hvs(2.46±0.09)h(均P<0.05);添加1μg/mL环己酰亚胺预处理的ZMS3组CHOm2细胞M2受体mRNA半衰期的(3.06±0.23)h与其相应对照组的(3.00±0.20)h比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ZMS提高M2受体mRNA的稳定性需要有新蛋白质合成的参与。

表演理论

表演理论(Performance Theory),或称"美国表演学派"(American Performance-school),是当代美国民俗学界乃至世界民俗学领域最富影响和活力的理论与方法之一。它兴起于20世纪60年代末70年代初,是在存在主义哲学、人类学、乔姆斯基(Noam Chomsky)语言学理论等的影响下,随着民俗学自身从单纯关注文本到注重语境的方法论的转向而逐渐发展起来的。80至90年代上半期,其影响臻至顶峰。今天,它不仅仍然具有强大生命力,而且已广泛影响到民俗学以外的诸多学科领域,如人类学、语言学、文学批评、宗教研究、音乐、戏剧、话语研究、区域研究、讲演与大众传媒等等。

亲和层析纯化猪胰蛋白酶的研究

采用猪胰蛋白酶的天然抑制剂-鸡卵类粘蛋白(CHOM)作为配基合成亲和吸附剂,从猪胰脏的粗提液中,通过亲和层析直接获得高纯度的胰蛋白酶.此法具有操作简便、产品纯度、比活力和获得率高等优点.

“史”的意识与语言研究

凡治语言学之学者,都有深切的体会:最重要的方法论,是"史"的意识。思考问题,首先是置于"史"的位置上来思考。从学术史入手,展开对学问的追求,是最基本的治学理路。在理论研究中,对任何材料的观察、分析以及解释,都是在特定方法论的主导下展开,研究者都带着特定的方法论原则进入课题,尽管有自觉与不自觉之分。然而当代学术思潮的时尚化和逐俗化,人们不仅"史"的观念淡漠,至于方法论则更是渐疏而远之。语言研究应以自觉的"史"的意识为先导,在"语言观与方法论"、"语言研究中的同质观与异质观"、"语言学的领先地位"等问题上导本源流。

小学音乐合唱教学现状问卷调查与分析

郎荣荣优秀教学能手工作站开展课题研究中,对陕西省西安市五所小学2360名学生进行了合唱教学问卷调查活动,通过对问卷的分析与数据结果的统计分析,课题组提出,一方面要充分发挥教学能手工作站的师资优势,另一方面深入研究童声特点,培养学生养成良好的歌唱习惯,掌握科学的发声方法,同时注重多渠道搭建音乐平台,开展多样合唱教学实践活动,培养学生团结协作精神,让校园合唱深入人心。

锌粉及锌合金中铝的测定

采用铬天青S分光光度法测定锌粉及锌合金中的铝。用六次甲基四胺作缓冲液,酸度控制在pH4.9～5.5之间,EDTA-Zn作掩蔽剂,氟化铵络合铝作褪色空白,掩蔽铟、铋、铅、铁、铜、镍、汞的干扰,采用基体匹配法和褪色空白加以消除基体锌、镉、钙、镁干扰。此方法不需分离锌粉及锌合金中的干扰元素,分析手续简单经济,稳定性好,掩蔽能力强,易操作,精密度高。