地黄活性成分梓醇对转基因CHO细胞M_2受体的调节作用

目的探讨地黄活性成分梓醇对转染M2受体亚型基因的CHO细胞系(CHOm2细胞)M2受体密度作用。方法采用衰老CHOm2细胞,常规培养后加入不同浓度梓醇及对照生理盐水,放射配基结合分析测定M2受体密度,Lowry法测定蛋白含量;同时观察了梓醇与M受体结合位点的关系及对乙酰胆碱酯酶的作用。结果梓醇在终浓度10-5、10-4mol.L-1明显升高衰老CHOm2细胞M2受体密度(P<0.01),但不占领M受体结合位点,也不抑制乙酰胆碱酯酶活性(P>0.05)。结论梓醇能上调衰老CHOm2细胞M2受体密度,可能是地黄治疗AD的主要有效成分。

知母活性成分ZDY101调节M2受体mRNA稳定性的研究

目的探讨知母活性成分ZDY101对M2受体mRNA稳定性的调节。方法转基因细胞CHOm2在含ZDY101或溶媒的培养基中培养不同时间后,实时荧光定量PCR检测M2受体的mRNA水平;用放线菌素D抑制基因转录,测定M2受体mRNA的时相变化,求出其mRNA的半衰期,比较ZDY101组和溶媒组的差别。结果ZDY101作用一定时间后M2受体的mRNA水平高于对照组;ZDY101作用24h以上,ZDY101组M2受体的mRNA半衰期明显高于对照组。结论ZDY101能提高M2受体mRNA的稳定性,使细胞M2受体的mRNA含量升高,是ZDY101提高M2受体密度的重要机制之一。

新蛋白质合成介导知母活性成分对M_2受体稳定性的调节作用

目的探讨知母活性成分ZMS提高CHOm2细胞毒蕈碱样乙酰胆碱2型受体(M2受体)mRNA表达的机制。方法体外培养至80%～90%融合的CHOm2细胞分为ZMS1组(单纯添加1×10-5mol/LZMS作用24h)、ZMS2组(添加1×10-5mol/LZMS作用24h后加入1μg/mL环己酰亚胺作用12h)、ZMS3组(加入1μg/mL环己酰亚胺预处理4h后加入1×10-5mol/LZMS作用24h),以上各组分别设立对照组(以等体积DMSO替代ZMS,其他处理与相应ZMS组相同)。各组细胞培养基中均加入放线菌素D抑制mRNA合成,于不同时间点收集CHOm2细胞,Real-time PCR检测M2受体mRNA相对表达量并计算半衰期。结果与相应对照组比较,ZMS1组和ZMS2组CHOm2细胞M2受体mRNA的半衰期明显延长,分别为(4.75±0.54)hvs(2.13±0.23)h和(5.43±1.13)hvs(2.46±0.09)h(均P<0.05);添加1μg/mL环己酰亚胺预处理的ZMS3组CHOm2细胞M2受体mRNA半衰期的(3.06±0.23)h与其相应对照组的(3.00±0.20)h比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论ZMS提高M2受体mRNA的稳定性需要有新蛋白质合成的参与。