衣原体噬菌体Chp3衣壳蛋白Vp1二级结构及B细胞抗原表位预测

目的:预测衣原体噬菌体Chp3Vp1蛋白的二级结构和B细胞表位。方法:以Chp3Vp1氨基酸序列为基础,采用Gamier-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测蛋白二级结构;按Kyte-Doolittle法、Hopp-Woods法、Emini法和Jameson-Wolf法预测蛋白的抗原表位。结果:Chp3Vp1蛋白含多个抗原位点,预测其N端1-10,101-112,159-166,174-184,189-195,288-299,323-333,419-435,477-490为优势表位。结论:Chp3Vp1蛋白有较强的免疫原性,预测的抗原位点为之后蛋白相互作用研究和单抗制备提供了理论依据。

节瓜CqCHP1的低温响应分析及互作蛋白的筛选与验证

以‘粤广节瓜’为材料,克隆得到基因CqCHP1(编码富含半胱氨酸和组氨酸C1结构域)。CqCHP1的开放阅读框为816 bp,编码271个氨基酸残基,蛋白二级结构主要由无规则卷曲构成,含23个丝氨酸磷酸化位点。进化树与氨基酸序列比对分析发现CqCHP1和黄瓜Csa_4G297435同源性最高。qRT-PCR分析表明,CqCHP1在节瓜不同组织中均有表达,并受低温显著诱导;苗期和结果期时,CqCHP1在耐冷材料AW66中的表达量显著高于冷敏材料AW9,但在营养生长期和开花期冷敏材料AW9的表达显著高于耐冷材料AW66。亚细胞定位结果显示该蛋白定位于细胞核中。利用酵母文库进行互作蛋白筛选发现CqCHP1可以与bHLH92在细胞核中互作,且双分子荧光互补实验和荧光素酶互补实验验证了其互作的准确性。