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柔嫩艾美耳球虫保守蛋白CHP559基因克隆与真核表达
被引量:
4
1
作者
翟颀
黄兵
+6 位作者
董辉
赵其平
朱顺海
梁思婷
李莎
杨斯涵
韩红玉
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期161-168,共8页
为构建柔嫩艾美耳球虫保守蛋白Et CHP559基因的真核表达重组质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559,并转染DF-1细胞进行表达。利用5'RACE技术克隆获得了柔嫩艾美耳球虫Et CHP559基因全长c DNA序列,该基因全长为1 746 bp,ORF为104-1 327 bp,...
为构建柔嫩艾美耳球虫保守蛋白Et CHP559基因的真核表达重组质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559,并转染DF-1细胞进行表达。利用5'RACE技术克隆获得了柔嫩艾美耳球虫Et CHP559基因全长c DNA序列,该基因全长为1 746 bp,ORF为104-1 327 bp,编码407个氨基酸,编码蛋白的分子量约为46 k D,并利用生物信息学分析该基因编码蛋白的性质、结构等特征,发现该蛋白含有跨膜结构和信号肽。通过RT-PCR扩增得到含完整开放阅读框的基因片段,并将其与真核表达载体pc DNA3.1-flag连接,构建了真核重组表达质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559,所构建的真核重组表达质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559经过PCR和双酶切鉴定,可见一条大小约为1 224 bp的目的条带;重组质粒转染DF-1细胞后,免疫印迹检测可见大小约为47 k D的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验显示在DF-1细胞中检测到绿色荧光。这些研究结果表明已成功获得了Et CHP559的全长序列,并成功构建了Et CHP559的真核重组表达质粒,在真核细胞DF-1中获得表达,为深入研究Et CHP559的功能奠定了基础。
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关键词
柔嫩艾美耳球虫
chp559基因
DF-1细胞
真核表达
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职称材料
题名
柔嫩艾美耳球虫保守蛋白CHP559基因克隆与真核表达
被引量:
4
1
作者
翟颀
黄兵
董辉
赵其平
朱顺海
梁思婷
李莎
杨斯涵
韩红玉
机构
中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期161-168,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31201699)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(2014JB03)
文摘
为构建柔嫩艾美耳球虫保守蛋白Et CHP559基因的真核表达重组质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559,并转染DF-1细胞进行表达。利用5'RACE技术克隆获得了柔嫩艾美耳球虫Et CHP559基因全长c DNA序列,该基因全长为1 746 bp,ORF为104-1 327 bp,编码407个氨基酸,编码蛋白的分子量约为46 k D,并利用生物信息学分析该基因编码蛋白的性质、结构等特征,发现该蛋白含有跨膜结构和信号肽。通过RT-PCR扩增得到含完整开放阅读框的基因片段,并将其与真核表达载体pc DNA3.1-flag连接,构建了真核重组表达质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559,所构建的真核重组表达质粒pc DNA3.1-flag-Et CHP559经过PCR和双酶切鉴定,可见一条大小约为1 224 bp的目的条带;重组质粒转染DF-1细胞后,免疫印迹检测可见大小约为47 k D的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验显示在DF-1细胞中检测到绿色荧光。这些研究结果表明已成功获得了Et CHP559的全长序列,并成功构建了Et CHP559的真核重组表达质粒,在真核细胞DF-1中获得表达,为深入研究Et CHP559的功能奠定了基础。
关键词
柔嫩艾美耳球虫
chp559基因
DF-1细胞
真核表达
Keywords
Eimeria tenella
chp
559
gene
DF-1 cell
eukaryotic expression
分类号
S852.7 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
柔嫩艾美耳球虫保守蛋白CHP559基因克隆与真核表达
翟颀
黄兵
董辉
赵其平
朱顺海
梁思婷
李莎
杨斯涵
韩红玉
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
4
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