目的:研究CHRNA5亚基突变对尼古丁受体功能的影响。方法:通过RT-PCR克隆CHRNA5基因片段,并通过重叠延伸PCR方法对CHRNA5亚基基因定点突变,从而构建CHRNA5突变型及野生型表达载体,然后转染至HEK293T细胞中,检测其基因表达。并将其分别与C...目的:研究CHRNA5亚基突变对尼古丁受体功能的影响。方法:通过RT-PCR克隆CHRNA5基因片段,并通过重叠延伸PCR方法对CHRNA5亚基基因定点突变,从而构建CHRNA5突变型及野生型表达载体,然后转染至HEK293T细胞中,检测其基因表达。并将其分别与CHRNA3和CHRNB4共转至HEK293T细胞中,检测三质粒共转后的基因表达;通过采用尼古丁持续灌流细胞10 min,然后检测细胞内钙离子内流峰值的变化情况,接下来检测突变对转染后细胞活力的影响。结果:构建的CHRNA5表达载体在转染HEK293T细胞48 h后,能够检测到绿色荧光蛋白的表达,这证明重组载体已成功转染进HEK293T细胞;通过RT-PCR检测出转染细胞CHRNA5 m RNA表达,这证明CHRNA5突变型和野生型均在HEK293T细胞中成功进行了表达。通过尼古丁灌流细胞实验显示突变组和野生型组F340/F380峰值变化均值分别为0.865±0.048和0.447±0.127,突变体组峰值显著高于野生型组(P<0.05)。细胞活力检测实验发现0.01 m M和0.1 m M尼古丁刺激下突变组的细胞活力峰值分别为139%和137%,显著高于野生组的124%和126%,有显著差异(P<0.05)。结论:本研究成功构建了CHRNA5突变及野生型真核表达载体,发现CHRNA5的突变会导致其受体功能性改变,并影响细胞活力。展开更多
目的本研究系统评价CHRNA5基因rs16969968位点与吸烟行的相关性。方法通过检索中国知网(CNKI)、万方数据库及PubMed数据库,检索时间为建库至2021年2月。按照拟定的纳入排除标准筛选文献,提取相关信息,评价数据质量,采用RevMa n 5.0、Sta...目的本研究系统评价CHRNA5基因rs16969968位点与吸烟行的相关性。方法通过检索中国知网(CNKI)、万方数据库及PubMed数据库,检索时间为建库至2021年2月。按照拟定的纳入排除标准筛选文献,提取相关信息,评价数据质量,采用RevMa n 5.0、Stata12.0软件进行Meta分析,计算合并OR值及其95%CI,并进行敏感性分析及发表偏倚评估。结果共纳入7篇文献。在等位基因模型(G vs A:OR=0.90,95%CI:0.70~1.16,P=0.42)、相加模型(GG vs AA:OR=0.83,95%CI:0.62~1.22,P=0.22)和显性模型(GG+GA vs AA:OR=0.90,95%CI:0.71~1.15,P=0.41)中,rs16969968位点与吸烟行为无相关性;在隐性模型中(GG vs GA+AA),rs16969968位点与吸烟行为具有相关性,基因型为GG的人群发生吸烟行的风险高于基因型为GA+AA的人群,差异具有统计学意义(OR=0.84,95%CI:0.72~0.89,P=0.03);在共显性模型(GG vs GA)中,rs16969968位点与吸烟行为具有相关性,基因型为GG的人群发生吸烟行为风险高于基因型为GA的人群,差异具有统计学意义(OR=0.92,95%CI:0.85~0.99,P=0.02)。结论CHRNA5基因rs16969968与吸烟行为具有相关性,携带A等位基因人群与吸烟行为具有更强的相关性。展开更多
文摘目的:研究CHRNA5亚基突变对尼古丁受体功能的影响。方法:通过RT-PCR克隆CHRNA5基因片段,并通过重叠延伸PCR方法对CHRNA5亚基基因定点突变,从而构建CHRNA5突变型及野生型表达载体,然后转染至HEK293T细胞中,检测其基因表达。并将其分别与CHRNA3和CHRNB4共转至HEK293T细胞中,检测三质粒共转后的基因表达;通过采用尼古丁持续灌流细胞10 min,然后检测细胞内钙离子内流峰值的变化情况,接下来检测突变对转染后细胞活力的影响。结果:构建的CHRNA5表达载体在转染HEK293T细胞48 h后,能够检测到绿色荧光蛋白的表达,这证明重组载体已成功转染进HEK293T细胞;通过RT-PCR检测出转染细胞CHRNA5 m RNA表达,这证明CHRNA5突变型和野生型均在HEK293T细胞中成功进行了表达。通过尼古丁灌流细胞实验显示突变组和野生型组F340/F380峰值变化均值分别为0.865±0.048和0.447±0.127,突变体组峰值显著高于野生型组(P<0.05)。细胞活力检测实验发现0.01 m M和0.1 m M尼古丁刺激下突变组的细胞活力峰值分别为139%和137%,显著高于野生组的124%和126%,有显著差异(P<0.05)。结论:本研究成功构建了CHRNA5突变及野生型真核表达载体,发现CHRNA5的突变会导致其受体功能性改变,并影响细胞活力。
文摘目的本研究系统评价CHRNA5基因rs16969968位点与吸烟行的相关性。方法通过检索中国知网(CNKI)、万方数据库及PubMed数据库,检索时间为建库至2021年2月。按照拟定的纳入排除标准筛选文献,提取相关信息,评价数据质量,采用RevMa n 5.0、Stata12.0软件进行Meta分析,计算合并OR值及其95%CI,并进行敏感性分析及发表偏倚评估。结果共纳入7篇文献。在等位基因模型(G vs A:OR=0.90,95%CI:0.70~1.16,P=0.42)、相加模型(GG vs AA:OR=0.83,95%CI:0.62~1.22,P=0.22)和显性模型(GG+GA vs AA:OR=0.90,95%CI:0.71~1.15,P=0.41)中,rs16969968位点与吸烟行为无相关性;在隐性模型中(GG vs GA+AA),rs16969968位点与吸烟行为具有相关性,基因型为GG的人群发生吸烟行的风险高于基因型为GA+AA的人群,差异具有统计学意义(OR=0.84,95%CI:0.72~0.89,P=0.03);在共显性模型(GG vs GA)中,rs16969968位点与吸烟行为具有相关性,基因型为GG的人群发生吸烟行为风险高于基因型为GA的人群,差异具有统计学意义(OR=0.92,95%CI:0.85~0.99,P=0.02)。结论CHRNA5基因rs16969968与吸烟行为具有相关性,携带A等位基因人群与吸烟行为具有更强的相关性。
