谷氨酰胺对鲑鱼胚胎(CHSE)细胞生长和代谢的影响

鉴于鱼类和哺乳动物的谷氨酰胺代谢途径有所不同 ,为了优化CHSE细胞的培养基和大量培养的过程控制 ,考察了谷氨酰胺对CHSE细胞生长和代谢的影响 .在CHSE细胞批培养中 ,无谷氨酰胺的M199培养基可以支持CHSE细胞的生长 ,当初始谷氨酰胺浓度c =0 .5 4mmolL-1时 ,细胞可达到最高密度nmax/ 10 5mL-1=16 .19;而更高浓度的谷氨酰胺 (c =1.76～ 5 .6 2mmolL-1)对细胞生长有抑制作用 .在c=0～ 5 .6 2mmolL-1初始谷氨酰胺浓度的批培养中 ,葡萄糖的利用和乳酸的生成基本一致 ,随谷氨酰胺浓度的升高 ,Qglc和Qlac增加 ,Yn/ glc降低 .另外 ,随着初始谷氨酰胺浓度的增加 (c=0～ 3.33mmolL-1) ,谷氨酰胺的消耗增加 ,Yn/ gln和Yammo/ gln分别下降 5 8%和 5 0 % ;当初始谷氨酰胺浓度继续增加时 ,谷氨酰胺的消耗、Yn/gln和Yammo/gln基本不变 .此外 ,当初始谷氨酰胺浓度为 0时 ,丙氨酸成为消耗性的氨基酸 ;Yala/gln先随初始谷氨酰胺浓度的增加 (c=0 .5 4～ 1.76mmolL-1)而增加 ,而后又随初始谷氨酰胺浓度的增加 (c=1.76～ 3.33mmolL-1)而降低 ,最后维持不变 .图 4表 3参

乳酸对海水鱼类细胞系CHSE生长和代谢的影响

在鲑鱼胚胎细胞(CHSE)培养中,低乳酸浓度(1.1～6.14mmol/L,相应渗透压为644～673kPa)对细胞生长无明显影响,主要的代谢特征基本不变;在高乳酸浓度(13.1～41.58mmol/L,相应渗透压为701～944kPa)下培养,细胞生长受到抑制,代谢发生明显变化。乳酸对CHSE细胞生长的抑制作用主要由乳酸导致培养基pH下降和渗透压增加引起。在CHSE细胞批培养中,维持正常的pH,7mmol/L的乳酸浓度,不会明显抑制CHSE细胞的生长。

乙醇对CHSE-1细胞中细胞色素P450 2E1的诱导研究

以乙醇为细胞色素P450 2E1的诱导剂,在CHSE-1细胞中研究了该诱导剂与酶活性之间的时间效应关系和剂量效应关系。细胞传代后培养48 h,加入含有不同浓度乙醇的新鲜培养基,孵育诱导24 h,之后加入底物苯胺反应30 min。以苯胺的代谢产物4-氨基酚的生成量来反映CYP2E1活性。苯胺浓度为10～16 mmol/L时CYP2E1活性最大,可达(0.152±0.095)nmol.min-1.mg-1,该浓度范围的苯胺适合用于指示CYP2E1的活性。以Gentox模型对诱导的剂量效应进行拟合,得到一个先升高后降低的曲线,说明乙醇对CHSE-1细胞中CYP2E1有先诱导后抑制作用。拟合方程F(x)=(p0+kx)/(1+〔x/EC50〕nH)参数P0为0.140,nH为2.456,k为0.024,EC50为34.938。CYP2E1酶活性随着诱导时间的增加逐渐增强,24 h内酶活性随时间的增加而增强,可达(0.446±0.092)nmol/(min.mg),呈典型的酶诱导现象,建立了乙醇对CHSE-1中CYP2E1的诱导模型。

传染性胰脏坏死病毒敏感细胞系比较及其在CHSE-214细胞上的增殖特性

大鳞大麻哈鱼胚胎细胞(Chinook salmon embryo cells,CHSE-214)和虹鳟性腺细胞(Rainbow trout gonad cells,RTG-2)是传染性胰脏坏死病毒(Infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)检测的国家标准所推荐使用的鲑鳟鱼源细胞系。本研究选用24株IPNV毒株,以1000倍半数组织培养物死亡剂量(50%tissue culture infective dose,TCID_(50))分别接种于CHSE-214和RTG-2细胞,以细胞病变情况比较这两种细胞对IPNV的敏感性。将IPNV以10 TCID_(50)和100 TCID_(50)接种在筛选出的最敏感细胞系上,每天观察细胞的病变及变化,收获病毒培养物。利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)及病毒滴度测定法分析IPNV在敏感细胞上的增殖状况。结果显示,接毒后7 d时,全部毒株均能在CHSE-214细胞上增殖,并导致细胞病变,而仅有8株IPNV能在RTG-2细胞上增殖,导致细胞病变,表明CHSE-214细胞对IPNV的敏感性高于RTG-2细胞。利用RT-q PCR和TCID_(50)法分析IPNV在CHSE-214上的增殖情况发现,随着接毒时间的增加,病毒量整体呈现先升高后降低的趋势,接毒后3 d时达到最大值。该增殖趋势均出现在不同接毒剂量组,除接毒后1 d时,其余各时间点10 TCID_(50)剂量组的病毒量均显著高于100 TCID_(50)剂量组(P<0.05)。本研究结果表明,CHSE-214细胞比RTG-2更适合用于IPNV的体外分离培养,且在多数细胞出现典型细胞病变而尚未完全脱落时病毒含量最高,此时适合收集病毒培养物进行病毒检测。本研究可为IPNV的检测提供科学指导。