诃子水提物通过上调PD-1/PD-L1表达调节胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠脾脏中细胞的细胞免疫减轻关节炎症

目的研究诃子水提取物(TCWE)对胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠细胞免疫及程序性死亡蛋白1/程序性死亡蛋白1配体1(PD-1/PD-L1)通路的影响。方法SD大鼠随机分为对照组、CIA组、TCWE处理组、甲氨蝶呤(MTX)处理组,每组15只。除对照组外,其余各组SD大鼠皮下注射Ⅱ型胶原蛋白制备胶原蛋白诱发关节炎(CIA)模型,TCWE组大鼠采用[20 mg/(kg·d)]TCWE处理,MTX组大鼠采用[1.67 mg/(kg·d)]MTX处理。处理14 d后,通过HE染色检查软骨形态,流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞凋亡和调节性T细胞(Treg)/Th17细胞比率,反转录PCR检测脾脏中的维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和叉头盒转录因子P3(FOXP3)、PD-1和PD-L1的mRNA表达,免疫组织化学染色检测RORγt、FOXP3的表达和定位。Western blot法检测脾脏淋巴细胞的PD-1和PD-L1的蛋白表达,ELISA检测大鼠血清白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β(TGF-β)水平。结果与CIA组相比,TCWE组和MTX组的软骨和滑膜病变明显减轻,脾脏中的T淋巴细胞凋亡率增加,Treg/Th17细胞比率上调,RORγt的表达降低,FOXP3、PD-1和PD-L1的表达增加。血清IL-17水平降低,血清TGF-β水平升高。结论TCWE处理可能激活脾脏细胞的PD-1/PD-L1通路调节CIA大鼠脾脏中细胞的细胞免疫,减轻软骨损伤。

程氏蠲痹汤通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路激活减轻胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠炎症

目的探索程氏蠲痹汤(JBT)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠治疗的可能机制。方法将雌性SD大鼠分为正常组、CIA模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、不同剂量JBT组、LY294002(PI3K阻断剂)组。评估JBT对实验大鼠治疗前后足趾肿胀度、关节炎指数测定的影响,HE染色检测滑膜组织病变情况,ELISA检测大鼠滑膜组织匀浆中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。实时定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、beclin-1、P62的mRNA表达水平,Western blot法检测AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)、mTOR、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、PI3K、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、P62、beclin-1、微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)蛋白表达。结果与正常组相比,给药前1 h,其余各组大鼠足趾明显肿胀。与给药前1 h相比,高剂量JBT组、MTX组、LY294002组给药30 d后,采血前2 h足趾肿胀明显缓解。JBT能显著减轻大鼠足趾肿胀度、关节炎指数评分、滑膜组织的破坏。高剂量JBT组大鼠滑膜样本IL-1β、TNF-α水平以及PI3K、AKT、mTOR、P62的mRNA表达水平降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白水平明显降低,beclin-1 mRNA和蛋白表达、LC3B蛋白水平明显升高。结论JBT可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活减轻关节炎症,高剂量JBT的治疗效果与MTX、LY294002的治疗效果相当。

干酪乳杆菌ATCC334抑制胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠炎性因子的分泌及关节病变

目的研究干酪乳杆菌ATCC334对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠炎性因子分泌及关节破坏的影响并探讨其可能机制。方法雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、CIA组、ATCC334组,每组7只。CIA组和ATCC334组大鼠尾根部皮内注射牛2型胶原蛋白建立CIA模型,对照组和CIA组大鼠每日500μL生理盐水灌胃,ATCC334组大鼠造模同时每日500μL干酪乳杆菌ATCC334溶液[2×10^8集落形成单位(CFU)/mL]灌胃,连续28 d。采用关节炎指数及后足爪增长容积评价关节炎严重程度、HE染色观察关节病变情况,ELISA检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-17水平。结果与CIA组相比,ATCC334组关节炎指数、后足爪增长容积显著降低,关节病变明显减轻,血清TNF-α、IL-6、IL-17水平明显降低。结论干酪乳杆菌ATCC334能够显著降低CIA大鼠炎性因子的分泌,减轻关节骨质破坏。

耐受性树突状细胞通过降低Th1细胞和Th17细胞比例减轻CIA大鼠的关节炎症和病变

目的初步探讨核因子κB寡脱氧核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN decoy)诱导建立的耐受性树突状细胞(tolDC)对胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)大鼠1型辅助T(Th1)细胞、Th2细胞、Th17细胞、调节性T细胞(Treg)的影响及干预效果。方法取SD雌性大鼠建立CIA大鼠模型,设CIA模型组、牛Ⅱ型胶原蛋白-诱骗剂-树突状细胞(Col2-decoy DC)处理组、空白对照组、Col2-decoy DC对照组。于初次免疫的第20天尾静脉注射tolDC进行处理,造模第7周处死大鼠。流式细胞术检测大鼠脾脏Th1细胞、Th2细胞、Th17细胞、Treg比例,HE染色检测踝关节病变情况,并对关节炎指数(AI)进行评分。结果与CIA模型组相比,Col2-decoy DC组AI降低且踝关节病变减轻,脾脏CD4+T细胞中Th1细胞、Th17细胞百分率降低而Th2细胞、Treg百分率升高。结论tolDC通过降低CD4+T细胞中Th1细胞和Th17细胞比率减轻CIA大鼠炎症和关节病变。

胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)大鼠耐受性树突状细胞制备技术的优化

目的改良胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)大鼠脾脏来源耐受性树突状细胞(DC)的制备技术,以获取高质量的实验细胞。方法在提取脾脏单个核细胞过程中,对制备单细胞悬液流程以及单个核细胞铺板后孵育时间进行改进,培养初期加入核因子κB(NF-κB)寡核苷酸诱骗剂诱导为耐受性DC。显微镜观察细胞形态,台盼蓝染色观察细胞活力,流式细胞术检测细胞CD103(OX62)、CD80和CD86表达,噻唑蓝(MTT)法检测该DC刺激淋巴细胞的增殖能力。结果DC的细胞活力>90%,OX62表达率>87.4%;共刺激分子低表达,DC刺激淋巴细胞增殖能力低。结论将CIA大鼠脾脏单个核细胞的制备方法进行改良,经NF-κB寡核苷酸诱骗剂诱导可获得高活力、高稳定性的耐受性DC,且细胞纯度明显提高。

黑骨藤追风活络胶囊抑制CIA大鼠滑膜组织NF-κB表达并减轻关节炎症反应

目的探讨黑骨藤追风活络胶囊对胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠核因子κB(NF-κB)相关蛋白的影响。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、黑骨藤追风活络胶囊0.315 g/kg组、 0.315 g/kg黑骨藤追风活络胶囊联合0.01 g/kg NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(PDTC)处理组。除对照组外,其余各组建立CIA模型。给药5周后,厚度测量仪测量大鼠足跖厚度,计算脾脏指数(脾脏质量/体质量),免疫组织化学染色法检测脾脏转化生长因子活化激酶1(TAK1)、转化生长因子β活化激酶结合蛋白1(TAB1)的表达, Western blot法检测关节滑膜组织NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、核因子κBp65亚基(NF-κBp65)、磷酸化核因子κBp65亚基(p-NF-κBp65)、 NF-κB受体激活蛋白配体(RANKL)蛋白水平, ELISA检测血浆单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、 CXC趋化因子配体1(CXCL1)、巨噬细胞炎性蛋白1(MIP-1)水平。结果与对照组相比,模型组大鼠足跖肿胀度、脾脏指数明显增加;与模型组相比,黑骨藤追风活络胶囊组和联合给药组大鼠足跖肿胀度和脾脏指数明显降低; TAK1和TAB1蛋白表达下调,滑膜组织IκBα蛋白水平增加, NF-κBp65、 p-NF-κBp65、 RANKL蛋白水平降低;血浆MCP-1、 CXCL1、 MIP-1水平下降。结论黑骨藤追风活络胶囊抑制NF-κB通路相关蛋白活性减轻CIA大鼠炎症反应。

lncRNA-H19通过促进成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)活性参与胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠滑膜炎症进展

目的探讨长链非编码RNA H19(lncRNA-H19)对成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)功能及对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠模型的影响。方法分离并培养类风湿性关节炎(RA)患者FLS,利用过表达腺病毒和小干扰RNA(siRNA),分别上调和下调RA FLS的H19表达水平,通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)检测RA FLS增殖、Transwell^(TM)实验检测细胞侵袭、细胞划痕实验检测RA FLS迁移能力;建立小鼠CIA模型,关节局部注射H19短发夹RNA慢病毒(LV-sh-H19),通过测量足厚度、关节炎指数和HE染色评价疾病进展。结果H19促进FLS的增殖、侵袭和迁移能力;注射LV-sh-H19的模型小鼠踝关节结构良好,关节局部有较少免疫细胞浸润和滑膜增生,敲低H19能够缓解CIA小鼠的关节炎症。结论H19通过促进FLS活化参与CIA小鼠滑膜炎症和疾病进展。

缺氧预处理的PMN-MDSC来源外泌体减轻胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)小鼠关节病变

目的研究缺氧条件下多形核髓源性抑制细胞来源外泌体(PMN-MDSC-EX)对胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)的治疗作用。方法通过牛2型胶原蛋白(Col2)和佐剂构建CIA小鼠模型,并从小鼠脾脏中磁珠分选PMN-MDSC,提取常氧(210 mL/L O_(2))和缺氧(10 mL/L O_(2))条件下培养的PMN-MDSC上清中的外泌体。通过透射电镜观察其超微结构、流式粒径分析测定其粒径、 Westernblot法检测CD9、 CD63、热休克蛋白70(HSP70)、钙连蛋白(calnexin)的蛋白表达鉴定PMN-MDSC-EX。将PMN-MDSC-EX加入体外CD4^(+) T细胞的增殖体系中观察其免疫抑制能力。CIA小鼠尾静脉注射PMN-MDSC-EX,每3 d对小鼠进行关节评分,HE染色检测小鼠关节病变情况,ELISA测定小鼠血清中总IgG、 Col2抗体、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素17(IL-17)水平。实时定量PCR检测正常和缺氧条件下PMN-MDSC-EX中miR-29a-3p和miR-93-5p的含量。结果成功分选出CIA小鼠脾脏中的PMN-MDSC,并制备了正常和缺氧条件下PMN-MDSC-EX。与正常氧含量PMN-MDSC-EX相比,缺氧条件下PMN-MDSC-EX可更强的抑制CD4^(+) T细胞的增殖。缺氧PMN-MDSC-EX处理组CIA小鼠足趾红肿程度,临床评分,关节破坏程度都明显减低,血清中总IgG、 Col2抗体、 IFN-γ、 IL-17水平也明显降低。与正常氧含量PMN-MDSC-EX相比,缺氧条件下PMN-MDSC-EX中miR-29a-3p和miR-93-5p的含量更高。结论缺氧条件下PMN-MDSC-EX免疫抑制能力更强,可以更有效地缓解CIA小鼠的发病。

补肾通络方抑制NF-κB/RANK/RANKL通路减轻胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠骨破坏

目的探讨补肾通络方(BSTL)对胶原蛋白诱导关节炎(CIA)大鼠模型骨破坏的改善作用以及对核因子κB/核因子κB受体激活蛋白/核因子κB受体激活蛋白配体(NF-κB/RANK/RANKL)信号通路的影响。方法将SD大鼠随机分为空白对照组、CIA模型组、1 mg/kg甲氨喋呤(MTX)处理组、(0.5、2)g/kgBSTL处理组,每组10只。除空白对照组外,其余大鼠采用含有卡介苗的完全Freund佐剂和牛Ⅱ型胶原蛋白(Col2)混合乳液免疫刺激,建立CIA模型。建模15 d后(第0天)根据关节炎指数(AI)评价造模是否成功。自第0天起,连续给予MTX或BSTL处理28 d,免疫组织化学染色法检测滑膜组织NF-κB p65的表达,ELISA检测大鼠血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、抗总Col2抗体及亚型(Col2-IgG、Col2-IgG1、Col2-IgG2a)水平,Western blot法检测滑膜组织RANKL、RANK、护骨因子(OPG)蛋白表达。结果与CIA模型组相比,2 g/kg BSTL处理28 d的大鼠足容积、AI值降低,血清IL-1β、IL-18、TNF-α、Col2-IgG、Col2-IgG2a以及RANK和RANKL水平均降低,OPG水平升高;大鼠滑膜组织中NF-κB p65、RANK和RANKL蛋白表达均降低,OPG蛋白表达增加。结论BSTL可通过抑制全身炎症反应,降低滑膜组织中NF-κB p65、RANK、RANKL蛋白的表达,上调OPG蛋白表达,缓解CIA模型大鼠关节炎症和肿胀。

氢气抑制白细胞介素22(IL-22)反应缓解胶原蛋白诱导关节炎(CIA)小鼠症状

目的探讨氢气(H2)对胶原诱导关节炎(CIA)小鼠的治疗作用及相关机制。方法18只DBA/1小鼠随机分为正常对照组、CIA组和H2治疗组,每组6只。CIA组和H_(2)治疗组小鼠采用牛Ⅱ型胶原蛋白诱导CIA模型,H2治疗组小鼠在第15~60天进行H_(2)吸入治疗(300 mL/L,3 h/d)。比较各组小鼠关节炎症状评分;HE染色进行关节病理评分;流式细胞术、免疫组织化学染色检测脾和关节中白细胞介素22(IL-22)阳性细胞变化;ELISA检测血清及关节软骨中IL-22水平;Western blot法检测关节软骨中磷酸化的信号转导子和转录激活子3(p-STAT3)和磷酸化的核因子κB(p-NF-κB)蛋白表达。结果与正常对照组相比,CIA组关节炎症状评分和病理评分显著升高、脾细胞和关节软骨中IL-22+细胞比例升高、血清和关节软骨中IL-22含量增加,关节软骨中p-STAT3和p-NF-κB蛋白表达增高,H_(2)治疗后均显著降低。结论H2可能通过抑制STAT3/NF-κB通路抑制IL-22炎症反应,缓解CIA小鼠症状。

类风湿关节炎小鼠模型中Bregs细胞、IL-10和TGF-β的变化及其内在关系

目的:探讨Bregs细胞、血清中IL-10和TGF-β与类风湿关节炎(RA)活动的相关性。方法:建立小鼠Ⅱ型胶原诱导类风湿关节炎(CIA)模型;采用HE染色观察对照组和CIA组小鼠关节滑膜和周围细胞的变化,并提取滑膜组织中的mRNA检测其中IL-10和TGF-β的变化。采用CBA法测定CIA组与对照组血清中IL-10、TGF-β的含量。采用流式细胞术检测CIA组与对照组中Breg细胞(CD1dhighCD5+CD19high)比例的变化。结果:对照组小鼠足爪关节无红肿;CIA组小鼠足跖部出现肿胀,关节明显红肿增粗。CIA组与对照组关节炎评分差异显著(P<0.05)。对照组小鼠滑膜细胞排列整齐,无增生,无炎症细胞浸润;CIA组滑膜细胞水肿,排列不整齐,有3~5层明显增生,有大量的炎症细胞浸润,并出现新生血管。与对照组相比,CIA组滑膜细胞中IL-10和TGF-β的mRNA表达水平差异显著(P<0.05)。同时,CIA组血清中IL-10和TGF-β的含量较对照组显著升高(P<0.05)。与对照组相比,CIA组小鼠脾脏中Breg细胞(CD1dhighCD5+CD19high)比例明显增多(P<0.05)。结论:与对照组相比,在CIA组小鼠血清和滑膜组织中IL-10和TGF-β表达水平、脾脏中Breg细胞比例均显著升高,Breg细胞在RA发病进程中起重要作用。

Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型IL-25表达水平的变化及意义

目的以Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎模型为研究对象,动态观察其IL-25的表达水平,探讨IL-25与关节炎发生发展的关系及其可能的机制,为寻找新的类风湿性关节炎免疫干预新途径积累实验数据。方法采用RT-PCR法扩增目的基因,构建mIL-25标准质粒,QRT-PCR检测模型鼠脾脏及其关节病变局部IL-25的表达水平;应用ELISA技术检测模型鼠血清和脾细胞培养上清IL-25蛋白的含量。结果在Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的发病过程中,模型鼠脾细胞和关节滑膜组织IL-25的mRNA表达水平、均呈持续上升趋势,与对照小鼠相比差异显著(P<0.05)。这种IL-25蛋白和转录水平的表达,随着关节炎症程度的增加而升高。此外,模型鼠脾细胞对ConA的刺激表现出强IL-25表达性应答。结论 IL-25的表达水平与Ⅱ型胶原诱导的关节炎的发生发展密切相关。

日龄对Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型成功率的影响

为了研究大鼠日龄对Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型(CIA模型)成功率的影响,试验利用鸡Ⅱ型胶原与弗氏完全佐剂制成的乳剂,皮内免疫不同日龄Wistar大鼠,建立类风湿关节炎的大鼠模型,2周后开始测量四肢的足趾部厚度,每周测量1次,根据肿胀程度进行评分。结果表明:31日龄大鼠CIA造模成功率为50%,37日龄大鼠CIA造模成功率为58%,42日龄大鼠CIA造模成功率为92%,49日龄大鼠CIA造模成功率为83%。说明日龄对CIA模型的构建起到关键作用。

Notch信号通路相关微小RNA在胶原蛋白诱导的关节炎小鼠免疫细胞中的表达

目的研究胶原蛋白诱发关节炎(CIA)小鼠T细胞中Notch信号通路相关微小RNA(miRNA)的表达情况。方法用牛Ⅱ型胶原蛋白和佐剂免疫DBA/1J小鼠建立CIA小鼠模型,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞术分选CIA小鼠和正常对照小鼠外周血、脾脏、淋巴结CD4^+T细胞和CD8^+T细胞。实时荧光定量PCR检测PBMC及T细胞中Notch信号通路相关miRNA分子的表达水平。结果与正常对照相比,CIA小鼠PBMC中miR-200b-3p、miR-30c-5p、miR-30b-5p及miR-23b-3p的表达水平均明显降低,miR-200b-3p、miR-30c-5p及miR-30b-5p在CIA小鼠外周血、脾脏、淋巴结CD4^+T细胞和CD8^+T细胞中的表达与正常对照相比未见明显差异,而CIA小鼠外周血、脾脏CD4^+T细胞中miR-23b-3p的表达水平显著低于正常对照小鼠,外周血CD4^+T细胞中的miR-23b-3p来源于脾脏。结论 miR-23b-3p可能参与Notch信号对CIA小鼠T细胞的免疫调控。

无尾果醇提物对类风湿性关节炎大鼠的影响

目的研究无尾果乙醇提取物对类风湿性关节炎大鼠的影响。方法建立Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型,观察醇提物对大鼠体质量、关节炎指数、足肿胀程度、关节病理改变及TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-2、p65、IκBα磷酸化水平的影响。结果乙醇提取物可明显改善大鼠症状,显著降低TNF-α、IL-1β、IL-6、p65、IκBα磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),显著升高IL-2水平(P<0.01)。结论无尾果乙醇提取物具有良好的抗类风湿性关节炎作用,其机制可能与NF-κB信号通路有关。

抗类风湿关节炎天然产物研究进展

类风湿关节炎是一种以关节炎和滑膜组织增生为主要特征的慢性自身免疫性疾病,会引起大量的细胞浸润和炎性介质的过度产生,最终导致软骨和骨的破坏。非甾体类抗炎药物、糖皮质激素类药物、改善病情的抗风湿药物和多种生物制剂在临床上常被用于治疗类风湿关节炎,虽然这些药物都能减轻患者的急性炎症和疼痛,但都不能阻止类风湿关节炎的病程并且都有严重的不良反应。天然产物研究一直是人类从自然界获取新药的重要途径,胶原诱导的关节炎(CIA)模型是研究类风湿关节炎最常用的自身免疫模型。因此,本文从化合物结构类型、植物来源和作用机制方面综述基于CIA模型的抗类风湿关节炎天然产物,以期为抗类风湿关节炎实验方案设计、药物设计和新药发现提供思路和依据。

温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎大鼠VEGF表达的影响

目的:研究中药温化蠲痹方对胶原诱导性关节炎血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨温化蠲痹方治疗胶原诱导性关节炎(CIA)的作用机制。方法:健康雄性大鼠随机分为造模组(60只)、正常对照组(简称正常组,10只),造模组采用牛Ⅱ型胶原(BCⅡ)乳剂于大鼠尾根部及颈背部多点注射,建立CIA模型。造模成功后,选取30只造模成功大鼠随机分为模型组(10只)、甲氨喋呤(MTX)组(10只)、温化蠲痹方组(简称中药组,10只)。给药30天后,运用免疫组化法检测大鼠滑膜VEGF水平,观察各组大鼠足趾肿胀度。结果:与正常组比较,模型组、中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显,差异均有非常显著性意义(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异均有显著性意义(P<0.01);中药组与MTX组比较,差异无显著性意义(P>0.05);与治疗前比较,中药组和MTX组大鼠足趾肿胀明显减轻,差异有非常显著性意义(P<0.01)。与正常组比较,模型组大鼠滑膜VEGF表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,中药组和MTX组大鼠滑膜VEGF表达水平明显降低(P<0.01),中药组与MTX组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:降低CIA大鼠滑膜VEGF水平可能是中药温化蠲痹方治疗CIA的作用机制之一。

铁死亡诱导剂咪唑酮埃拉斯汀(IKE)通过抑制IL-6、CCL5及CXCL9分泌缓解CIA小鼠的肺纤维化

目的 探索铁死亡诱导剂咪唑酮埃拉斯汀(IKE)对胶原蛋白诱发关节炎(CIA)小鼠肺纤维化的作用及潜在机制。方法 选取8周龄~10周龄DBA/1小鼠,按照完全Freund佐剂(CFA)与鸡Ⅱ型胶原蛋白混合乳化方法建立CIA小鼠模型,设置对照组、 CIA组、 CIA联合IKE组。每2 d进行关节评分与爪垫厚度测量,39 d后收集小鼠各脏器组织。HE染色、番红-固绿染色、甲苯胺蓝染色评价关节处组织病理改变;Masson染色评价肺部组织病理改变。免疫组织化学染色法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、成纤维细胞活化蛋白α(FAPα)、转化生长因子β(TGF-β)及Ⅰ型胶原蛋白(Col1)、白细胞介素1(IL-1)、 IL-6、 IL-17及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平;Olink mouse exploratory panel检测小鼠血清细胞因子IL-17α、 IL-17F、 TGF-β1、整合素亚基β6(ITG-β6)、 TNF受体超家族成员11B(TNFRSF11b)、 TNF受体超家族成员12A (TNFRSF12a)、 IL-6、 IL-1α、 IL-1β、 IL-10、 TNF-α、 CC趋化因子配体5(CCL5)、 CCL2、 CXC趋化因子配体9(CXCL9)、 CXCL1、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(NADK)、促红细胞生成素(EPO)、集落刺激因子2(CSF2)、 TGF-α、 CCL20、 CCL3水平。结果 与CIA组相比,CIA联合IKE组治疗后关节炎症及关节损伤明显缓解;肺组织α-SMA、 FAPα、 TGF-β和Col1表达水平均呈下降趋势,表明CIA小鼠肺部胶原蛋白聚集减少,组织病变明显缓解;IL-6、 CCL5、 CXCL9、 IL-6水平显著下降表明CIA小鼠肺部炎症显著缓解。结论 IKE除缓解CIA小鼠关节炎症及关节损伤外,还可通过抑制IL-6、 CCL5及CXCL9表达缓解CIA伴发的肺纤维化。

CPI-203通过抑制p38 MAPK/AKT通路改善类风湿关节炎

目的探讨CPI-203对类风湿关节炎影响及作用机制。方法将生长至5~7代的RA滑膜成纤维细胞(RASF)分为正常对照组,白介素1β(IL-1β,10 ng/ml)诱导组,CPI-203(1μmol/L)用药组,CPI-203+IL-1β组。采用Transwell和划痕实验评估RASF侵袭和迁移能力,血管形成实验检测血管形成能力,qRT-PCR和ELISA测定表型相关分子表达水平。Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和蛋白激酶B(AKT)通路相关蛋白表达。使用II型胶原及佐剂混合而成的乳浊液构建胶原诱导关节炎(CIA)模型。实验组CIA模型诱导成功后腹腔注射CPI-203,200 mg/kg,每两天注射1次;阴性对照组不进行任何处理;阳性对照组构建CIA模型后腹腔注射等量DMSO,每两天注射1次。CPI-203治疗30 d后,观察鼠爪临床病理特征变化,ELISA检测各组小鼠血清中炎性因子表达水平,Mircro-CT分析鼠爪骨侵蚀变化,苏木精-伊红(HE)染色评估滑膜增生和软骨降解情况。结果CPI-203显著抑制了IL-1β诱导的RASF侵袭和迁移,并降低血管形成数(P<0.05)。与阳性对照组相比,实验组小鼠关节临床指标得分、滑膜增生、软骨降解及骨损伤减少,血清中炎性因子IL-6、IL-8水平降低(P<0.033)。结论CPI-203可抑制RASF中炎性因子的表达,减弱RASF的侵袭、迁移及血管形成能力,缓解CIA模型小鼠关节炎症,对类风湿关节炎具备一定治疗潜力。

耐受性树突状细胞在胶原蛋白诱导性关节炎大鼠体内形成微嵌合体

目的 寻找耐受性树突状细胞(tDC)输注到胶原蛋白诱导关节炎(CIA)模型大鼠后形成微嵌合体的证据。方法 骨髓来源的DC前体细胞经粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素4(IL-4)及核因子κB寡核苷酸诱骗剂(NF-κB ODN decoy)诱导成tDC,再用1,1′-十八烷基-3,3,3′,3′-四甲基三碳氰基碘化物(DiR)标记后输注到CIA大鼠体内。在细胞输注的第4 h、 24 h、 5 d、 10 d、 15 d,用小动物活体成像系统观察荧光强度和分布,第15天处死大鼠,检测主要脏器荧光信号。结果 tDC高表达OX62,低表达CD80和CD86。荧光信号主要集中在胸腹部和左后关节,胸腹部荧光信号在24 h最强,左后关节荧光信号在5 d最强。在细胞输注的15 d仍能检测到荧光,并且病足左后关节始终保持较强荧光信号。离体器官肺、肝、脾、肠系膜淋巴结中荧光信号较强,肾荧光信号较弱,心脏几乎没有荧光。结论 tDC在病足关节、肺、肝、脾、肠系膜淋巴结形成微嵌合体。