云南番木瓜环斑病毒部分ci基因的克隆及序列分析

对云南昆明、楚雄、保山、德宏、临沧、玉溪、红河等地番木瓜、南瓜和罗汉果上获得的番木瓜环斑病毒（Papayaringspotvirus，PRSV）不同分离物进行了部分ci基因的克隆和序列分析，获得的部分ci基因长666nt，编码221个氨基酸。关于13个PRSV云南分离物部分ci基因核苷酸序列的同源性为80％。98％，氨基酸同源性为92％-100％。选取本文具有代表性的9个PRSV分离物与国内外12个PRSV分离物相比，核苷酸序列的同源性为79％-93％，氨基酸序列同源性为92％-99％。运用MEGA软件绘制的基于部分ci基因核苷酸序列的系统进化树表明，这些PRSV病毒可以分为两个大组，本文获得的9个云南分离物中的8个分离物与印度分离物（India—W—EU475877）聚为第1组，第Ⅱ组成员比较复杂，包括大部分的亚洲分离物及全部美洲分离物。

三七Y病毒部分ci基因和cp基因的克隆及序列分析

对云南文山地区三七上获得的三七Y病毒（Panax virus Y,PnVY）不同分离物进行了部分ci基因和cp基因的克隆及序列分析,获得的部分ci基因长657 nt,编码219个氨基酸;获得的部分cp基因长834 nt,编码278个氨基酸。所获得的11个PnVY分离物的ci基因之间核苷酸和氨基酸的同源性分别为80.8%～99.8%和91.3%～100%,与其他PnVY分离物的同源性分别为80.8%～98.8%和92.7%～99.5%。所获得的18个PnVY分离物的cp基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为91.8%～99.9%和93.9%～100%,与其他PnVY分离物的同源性分别为92.0%～100%和95.7%～100%。系统进化树分析表明,基于ci基因可以将PnVY分为2个大组,第Ⅱ组分离物之间的差异相比第Ⅰ组的复杂;基于cp基因可以将PnVY分为3个大组,第Ⅲ组分离物之间差异最大。基于ci基因和cp基因的分析结果均表明,PnVY不同种群间存在较为丰富的遗传多样性,但尚不清楚PnVY的分子变异是否与PnVY引起的多种症状类型有关。

GH调控鸡原代肝细胞中GH/IGF-Ⅰ信号通路相关基因mRNA表达的研究

为研究离体条件下鸡肝脏中表达的GH/IGF-Ⅰ信号通路相关基因受生长激素(GH)调控的mRNA表达情况,以4～5周龄雌性商品代AA肉鸡为试验材料,采用改良的半原位两步灌流法并结合消化法分离肝细胞,进行原代培养;采用SYBR green荧光定量PCR方法,检测GH处理后鸡肝细胞中GH/IGF-Ⅰ信号通路中相关基因IGF-Ⅰ、HNF-1α、HNF-1β、HNF-3β、CIS、SOCS-1、SOCS-2和SOCS-3的表达情况。结果表明:胶原酶消化法获得的肝细胞分离良好,形态完整,铺板4h后完全贴壁,继续培养24h即可用于GH处理试验;GH能引起鸡肝细胞中IGF-Ⅰ、SOCS-2、SOCS-3和CIS基因mRNA表达上调,而对HNF-1α、HNF-1β、HNF-3β、SOCS-1基因mRNA的表达无影响。

cⅠ857基因的体外定位同义突变

ｃⅠ８５７基因的体外定位同义突变陈南春，高辉，陈苏民，杨萍，刘新平（西安第四军医大学分子生物学研究所，西安７１００３２）外源基因要在大肠杆菌中获得高表达，需要合适的ＳＤ序列和可调控的强启动子［１］。ＰＬ启动子在原核启动子中属强启动子，它受ｃⅠ基因产物...

3个基因共调控下莱茵衣藻的转录组分析

为研究多基因调控下微藻油脂合成调控的分子机制,对acs2-cis1-dof基因共调控的莱茵衣藻藻株DLC进行转录组测序及分析,获得749个差异表达基因.通过京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)聚类分析发现,有51个差异表达基因参与碳水化合物代谢,15个差异表达基因参与脂质代谢,差异基因主要富集在甘油酯代谢、脂肪酸降解、糖酵解及糖异生、淀粉和蔗糖代谢等通路中.采用BODIPY 505/515荧光染色法检测发现,热激后莱茵衣藻藻株DLC细胞内的甘油三酯质量较野生型提高了193%,通过检测吸光度发现藻细胞的淀粉质量降低了45%,说明基因共调控不仅增强了脂质合成代谢,还使得糖代谢中的碳流重新定向.研究工作为探究基因共调控下脂质合成代谢的分子机理以及微藻产油基因工程提供理论参考.

甘蔗花叶病毒CI蛋白在玉米韧皮部细胞中的免疫定位

为探讨甘蔗花叶病毒(Sugarcane mosaic virus,SCMV)CI基因的功能,对CI蛋白进行了免疫定位。利用RT-PCR方法,扩增甘蔗花叶病毒北京株系(SCMV Beijing isolate,SCMV-BJ)CI基因部分片段,将其连接到表达载体pET-28a上,重组质粒pETCIF1导入大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中。SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CI基因获得了高效表达。将融合蛋白纯化后免疫兔子获得特异性较高的抗血清,利用该抗血清,对健康玉米和受病毒侵染的玉米茎、叶脉和叶片进行免疫金标记,在茎和叶脉韧皮部筛管的细胞壁处有金颗粒。