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甲状旁腺素非PLC依赖PKC通路激活增强成骨细胞CITED1表达 被引量:5
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作者 郝松 孟越 +2 位作者 李威 胡少宇 杨德鸿 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期486-491,共6页
目的:通过相关信号通路屏蔽和基因表达分析,探讨甲状旁腺素(PTH)非PLC依赖PKC信号转导途径(PTH/nonPLC/PKC)的功能,分析其对骨代谢的影响。方法取2-3 d C57BL乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,取贴壁生长的第1代细胞,随机分为4组:1... 目的:通过相关信号通路屏蔽和基因表达分析,探讨甲状旁腺素(PTH)非PLC依赖PKC信号转导途径(PTH/nonPLC/PKC)的功能,分析其对骨代谢的影响。方法取2-3 d C57BL乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,取贴壁生长的第1代细胞,随机分为4组:100 nmol/L[Gly1, Arg19]hPTH(1-28)(简称GR(1-28))+10 nmol/L RP-cAMP;10 nmol/L[Gly1, Arg19]hPTH(1-34)(简称GR(1-34))+10 nmol/L RP-cAMP;10 nmol/L PTH(1-34)及空白对照组加入等体积的0.1%三氟乙酸(trifluoroacetic acid, TFA),作用4 h后,提取各组总RNA,行小鼠全基因组表达谱芯片分析,筛选出可能与nonPLC/PKC信号转导通路相关的差异表达基因,并进行相关通路分析。RT-PCR筛选及验证上述差异表达基因。培养MC3T3-E1细胞,分为4组:GR(1-28)+RP-cAMP;GR(1-34)+RP-cAMP;GR(1-34)+RP-cAMP+100 nmol/L Go6983及空白对照组,RT-PCR法验证比较GR(1-28)和GR(1-34)引起的基因表达变化情况。结果倒置相差显微镜观察示,培养7 d见细胞排列紧密,为三角形或多边形,呈铺路石样;细胞培养14 d ALP染色可见胞质中出现蓝染颗粒,成骨诱导培养28 d茜素红染色可见红色矿化结节形成。基因芯片分析结果中筛选出与PTH的nonPLC/PKC信号转导通路相关性最大的56个基因,进行RT-PCR验证后发现CITED1的表达量在GR(1-34)+RP-cAMP组显著高于GR(1-28)+RP-cAMP组及空白对照组,但小于PTH(1-34)组(P〈0.05)。MC3T3-E1细胞RT-PCR验证的结果与其一致,在阻断cAMP/PKA信号通路后,仅CITED1基因表达量在GR(1-28)和GR(1-34)刺激时存在显著不同,且加入PKC抑制剂(Go6983)后,表达差异消失。结论 PTH的nonPLC/PKC信号转导通路的激活能够使得成骨细胞CITED1的表达量明显升高,介导PTH对成骨代谢的作用。该途径不依赖PLC和PKA信号的激活。 展开更多
关键词 甲状旁腺素 信号转导通路 成骨细胞 基因芯片 cited1
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CITED1 63-84氨基酸片段是影响其细胞定位与成骨作用的关键区域 被引量:1
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作者 林振 袁亮 +3 位作者 孟越 冯瑞强 付兆宗 杨德鸿 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期326-331,共6页
目的生物信息学分析发现CITED1 63-84氨基酸片段为其重要的功能片段,进一步研究CITED1 63-84氨基酸片段突变(丝氨酸突变为丙氨酸)是否影响其进核及成骨分化,探讨其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法 CITED1 63-84突变质粒(9S>A... 目的生物信息学分析发现CITED1 63-84氨基酸片段为其重要的功能片段,进一步研究CITED1 63-84氨基酸片段突变(丝氨酸突变为丙氨酸)是否影响其进核及成骨分化,探讨其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法 CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒分别转染MC3T3-E1细胞,培养2 d,用100 nmol/L PTH(1-34)刺激细胞,行细胞免疫荧光实验,共聚焦镜下观察细胞内CITED1位置变化。将CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒按相应体系转染MC3T3-E1细胞,分为两组,一组成骨诱导4周,另一组成骨诱导基础上进行10 nmol/L PTH(1-34)间歇刺激(每48 h刺激4 h)4周,测ALP酶活性及Ca离子浓度并进行ALP及茜素红染色。行RT-PCR实验分析成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC的表达量。结果 PTH(1-34)可促进CITED1进核,将CITED1氨基酸63-84片段突变后,可明显抑制该反应。4周成骨诱导后,CITED1过表达明显抑制成骨细胞分化,ALP及Ca离子浓度明显低于对照组,而CITED1突变质粒(9S>A)过表达ALP及Ca离子浓度明显高于CITED1组,与对照组基本相同。进一步研究表明,CITED1过表达抑制PTH(1-34)诱导的成骨细胞分化,而CITED1突变质粒(9S>A)可逆转该反应。ALP染色及茜素红染色也验证了以上结论。RT-PCR结果提示:CITED1突变质粒(9S>A)过表达成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC明显高于CITED1质粒过表达。结论 CITED1 63-84片段丝氨酸为其重要的功能位点,可影响其细胞进核及成骨分化。 展开更多
关键词 PTH 成骨分化 基因突变 细胞核移位 cited1
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177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA的制备、鉴定及其对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖能力的影响 被引量:1
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作者 李佳 王政杰 +4 位作者 张磊 王英 黄欢 曹熠熠 庞华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第20期1954-1960,共7页
目的研究放射性镥核素(^177Lu)标记的结合转化激活因子(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 1,CITED1)mRNA反义肽核酸(antisense peptide nucleic acid,asPNA)即^177Lu-DOTA-anti-CITED1-... 目的研究放射性镥核素(^177Lu)标记的结合转化激活因子(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 1,CITED1)mRNA反义肽核酸(antisense peptide nucleic acid,asPNA)即^177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA的制备,鉴定标记物的理化性质并探讨其在人甲状腺乳头状癌K1细胞系中的摄取能力及细胞毒性作用。方法实时荧光定量PCR(RT-PCR)鉴定肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)的靶向特异性。通过间接标记法得到反义探针^177Lu-DOTA-anti-CITED1-PNA并测定其标记率,检测其体内外的稳定性。体外细胞实验测定反义探针的摄取能力及对K1细胞增殖能力影响。结果 RT-PCR显示反义肽核酸作用于K1细胞后能明显降低CITED1的表达;反义探针的放射化学纯度为(94.5±0.12)%,比活度为(8.7±0.53)MBq/μg,48 h的放射化学纯度仍大于90%;体外细胞摄取、滞留以及细胞增殖实验显示反义探针能被人K1细胞特异性摄取,且相较于未偶联的^177Lu和asPNA,^177Lu和asPNA偶联后联用具有显著的抗肿瘤细胞作用。结论成功制备了^177Lu标记的CITED1mRNA反义肽核酸探针,证实反义探针对K1细胞具有特异性、靶向性且反义探针的联合作用能有效降低细胞活力及增殖能力。 展开更多
关键词 甲状腺乳头状癌 cited1 放射性核素镥 反义肽核酸
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共转录因子CITED1在小鼠骨代谢中的调控作用
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作者 邱奕雁 郑羽晨 +3 位作者 郭伟壮 周文钰 颜滨 杨欣建 《基础医学与临床》 CSCD 2020年第3期294-298,共5页
目的在体研究CITED1在骨代谢即成骨/破骨平衡中的调节作用,为骨质疏松的治疗提供相应的理论基础。方法利用野生型小鼠(WT小鼠)和构建的CITED1基因敲除小鼠(KO小鼠),显微电子计算机断层扫描(CT)定量测量WT小鼠和KO小鼠股骨长度、骨量和... 目的在体研究CITED1在骨代谢即成骨/破骨平衡中的调节作用,为骨质疏松的治疗提供相应的理论基础。方法利用野生型小鼠(WT小鼠)和构建的CITED1基因敲除小鼠(KO小鼠),显微电子计算机断层扫描(CT)定量测量WT小鼠和KO小鼠股骨长度、骨量和骨皮质以及骨松质厚度等骨骼表型。用ELISA检测骨代谢的血液学相关指标。用RT-qPCR检测骨标志基因的表达,从分子水平探究骨代谢改变的原因。结果 KO小鼠颅骨成骨细胞中CITED1表达极少,表明敲除成功。KO小鼠股骨长度、骨量和骨皮质以及骨松质厚度显著高于WT小鼠。KO小鼠外周血血清中I型原胶原肽(P1NP)、骨钙素(OC)和骨碱性磷酸酶(BALP)浓度均显著高于WT小鼠,而抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的浓度显著低于WT小鼠。RT-qPCR结果显示,KO小鼠颅骨成骨细胞中OC和BALP基因表达较WT小鼠显著增加(P<0. 001);同时,KO小鼠颅骨成骨细胞中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的表达较WT小鼠显著降低(P<0. 05)。结论小鼠CITED1敲除后可以通过上调OC和BALP基因表达,下调TRAP基因的表达,促进骨形成,抑制骨吸收。 展开更多
关键词 共转录因子cited1 骨质疏松症 甲状旁腺激素 骨代谢
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甲状腺乳头状癌合并桥本甲状腺炎的临床特征及Galectin-3、HBME-1、CITED1、CK19蛋白表达的临床意义 被引量:1
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作者 高丹 吴影 +4 位作者 李丽娟 李化敏 付雪莲 郭素芬 展涛 《慢性病学杂志》 2022年第10期1504-1507,共4页
目的研究甲状腺乳头状癌合并桥本甲状腺炎的临床特征及半乳糖凝集素-3(galactose-specific lectin 3,Galectin-3)、人骨髓内皮细胞-1(human bone marrow endothelial cell-1,HBME-1)、共转录因子(CBP/P300-interacting transactivator w... 目的研究甲状腺乳头状癌合并桥本甲状腺炎的临床特征及半乳糖凝集素-3(galactose-specific lectin 3,Galectin-3)、人骨髓内皮细胞-1(human bone marrow endothelial cell-1,HBME-1)、共转录因子(CBP/P300-interacting transactivator with glutamic acid/aspartic acid-rich C terminal domain-1,CITED1)和细胞角蛋白19(Cytokerain,CK19)蛋白表达的临床意义。方法收集2016年12月—2019年8月牡丹江医学院附属红旗医院100例甲状腺乳头状癌患者及桥本甲状腺炎患者,将其中甲状腺乳头状癌合并桥本甲状腺炎患者53例为研究组;单纯乳头状癌患者21例为对照1组;单纯桥本甲状腺炎患者26例为对照2组。比较三组患者的发病年龄、性别、肿瘤大小、病理特点、淋巴结转移等临床资料,利用免疫组化方法检测三组患者甲状腺组织Galectin-3、HBME-1、CITED1和CK19表达。结果与两个对照组患者相比,研究组患者例数明显增多、尤以女性患者多发,但是,肿瘤组织体积显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照1组和对照2组患者相比,研究组甲状腺组织Galectin-3、HBME-1、CITED1和CK19呈现高表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Galectin-3、HBME-1、CITED1和CK19在甲状腺乳头状癌合并桥本甲状腺炎患者组织中呈现显著高表达,可作为甲状腺乳头状癌合并桥本甲状腺炎的诊断指标。 展开更多
关键词 桥本甲状腺炎 甲状腺乳头状癌 半乳糖凝集素-3 共转录因子 细胞角蛋白19 人骨髓内皮细胞-1
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女性室内居住空间研究知识图谱分析 被引量:1
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作者 谢亮 江雪梅 郭延龙 《家具与室内装饰》 北大核心 2023年第2期110-116,共7页
本文旨在系统刻画世界范围内女性室内居住空间研究知识图谱,通过对当前女性室内居住空间研究热点分析与总结,以客观数据为依据,根据当前研究热点来探究未来发展趋势。以Web of Science数据库中“女性”和“室内居住空间”主题为数据源,... 本文旨在系统刻画世界范围内女性室内居住空间研究知识图谱,通过对当前女性室内居住空间研究热点分析与总结,以客观数据为依据,根据当前研究热点来探究未来发展趋势。以Web of Science数据库中“女性”和“室内居住空间”主题为数据源,借助VOSviewer和Cite Space 6.1.R1文献计量可视化软件构建出以研究国家、发文机构、关键词等为节点知识图谱分析,并对女性室内居住空间热点主题和研究前沿进行分析和总结。从1991-2021年,关于女性室内居住空间相关研究热点总体上呈上升趋势。在这一研究领域,研究内容不断丰富,包括性别差异、居住空间环境影响、空间性能、健康评估、室内空气质量。研究方法也在不断丰富。本文希望通过分析和整理该领域研究现状、研究热点和未来可能研究趋势,为研究实施提供更多参考。 展开更多
关键词 女性 室内居住空间 Cite Space 6.1.R1 VOSviewer
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国内精准教学研究热点及演化趋势——基于CiteSpace文献计量分析
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作者 任瑞肖 周榕 《中国医学教育技术》 2022年第4期406-415,共10页
作为课程教学和现代信息技术高度融合的产物,精准教学在促进知识快速内化和能力顺畅达成的同时,也突破了教学评估的功能。文章选取中国知网178篇文献作为研究样本,首先根据文献数量分布、作者机构分布、研究作者、研究对象和研究方法初... 作为课程教学和现代信息技术高度融合的产物,精准教学在促进知识快速内化和能力顺畅达成的同时,也突破了教学评估的功能。文章选取中国知网178篇文献作为研究样本,首先根据文献数量分布、作者机构分布、研究作者、研究对象和研究方法初步解释国内精准教学研究现状;然后,运用CiteSpace 5.8.R1软件对研究样本聚类图谱、突现词和时间线图谱进行可视化分析,深入了解精准教学研究热点及演化趋势,以期为中国精准教学未来研究提供借鉴;最后,基于上述分析,提出了对未来精准教学研究的建议。 展开更多
关键词 精准教学 Cite Space 5.8.R1 热点 趋势
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