拮抗菌Pseudomonas marginalis CJT23活性物质的分离纯化

拮抗菌用于防治病害的本质是其中的活性物质对病原菌具有抑制作用,因此对拮抗菌Pseudomonas marginalis CJT23活性物质进行初步探讨。通过对P.marginalis CJT23活性物质种类的研究,初步判断其活性成分为抗菌蛋白,不同发酵时间和离心速度的离心试验,均表明活性物质属胞内产物;Tris-HCl缓冲为最适缓冲液;缓冲液中不同Na^(+)浓度对活性物质的溶解性无显著性影响(P>0.05);当缓冲液pH为4,6,7时,其细胞破碎液与菌体重悬液有显著性差异(P<0.05);用不同的洗液清洗菌体,结果表明活性物质并不在细胞膜表面;用体积分数为20%的乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙醚等有机溶剂浸泡有活性的菌体,结果显示上述有机溶剂不能提取活性物质,且使活性物质失活;用体积分数为5%的DMSO缓冲液对菌体进行细胞破碎,其上清液有抑菌活性;用超滤管对含有活性物质的上清液进行浓缩,结果表明,其分子质量大于1.0×10^(5) g/mol,且在4℃条件下比在其他温度下储藏抑菌活性强;对含有活性物质的上清液采用硫酸铵分级沉淀法分离,结果显示,当硫酸铵初始饱和度为60%、终饱和度为80%时,其活性物质的抑菌活性最强。该研究可为活性物质分离纯化、拮抗机理研究和开发利用奠定基础。

泥鳅鳃出血病拮抗菌边缘假单胞菌Pseudomonas marginalis CJT23的条件优化

用单因素法和正交试验对拮抗菌边缘假单胞菌Pseudomonas marginalis CJT23进行发酵条件优化。单因素条件优化结果表明:环境条件装液量为50%,接种量为1%(体积分数),盐度为1%,pH为7,转速为130 r/min,温度为20℃,其抑菌活性最强;营养条件碳源为葡萄糖、氮源为胰蛋白胨、无机盐为氯化钙、生长因子为半胱氨酸时,抑菌圈直径最大。正交试验结果表明:影响因素大小顺序为碳源>无机盐>氮源>生长因子,即酵母>氯化钠>胰蛋白胨>酪氨酸;发酵时间>盐度>pH,即发酵12 h,pH为6,盐度为3%,抑菌圈直径最大,抑菌活性最强。该结果为拮抗菌P.marginalis CJT23的进一步开发利用提供了理论依据,也为微生物制剂生产提供了参考资料。