E-cad、CK14、Apollon表达与食管癌患者病理特征的关系研究

目的:探讨食管癌(Esophageal Cancer,EC)患者E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、细胞角蛋白14(Cytokeratin 14,CK14)、凋亡抑制蛋白Apollon(Inhibitor of Apoptosis Protein Apollon,IAP Apollon)表达及其与病理参数的相关性。方法:选取我院2018年1月至2020年1月期间收治的87例EC患者作为研究对象。分别取患者EC组织和癌旁组织。采用免疫组化法检测E-cad、CK14、Apollon在EC组织和癌旁组织中的表达。分析比较不同病理学参数EC组织中E-cad、CK14、Apollon的表达情况。分析EC组织中E-cad、CK14、Apollon表达与临床病理学参数相关性。探讨E-cad、CK14、Apollon表达与EC患者预后关系。结果:EC组织中CK14、Apollon阳性表达率显著高于癌旁组织,Ⅰ-Ⅱ期显著低于Ⅲ-Ⅳ期,高分化<中分化<低分化,无淋巴结转移显著低于有淋巴结转移(P<0.05)。EC组织中E-cad阳性表达率显著低于癌旁组织,Ⅰ-Ⅱ期显著高于Ⅲ-Ⅳ期,高分化>中分化>低分化,无淋巴结转移显著高于有淋巴结转移(P<0.05)。EC组织中E-cad阳性表达率与肿瘤转移(Tumor Node Metastasis,TNM)分期、淋巴结转移呈负相关,与分化程度呈正相关。CK14、Apollon阳性表达率与TNM分期、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。E-cad阳性EC患者3年生存率高于E-cad阴性患者,CK14阳性、Apollon阳性EC患者3年生存率分别低于CK14阴性、Apollon阴性患者(P<0.05)。结论:EC患者癌组织中CK14、Apollon呈现高表达,E-cad呈现低表达,与EC发生、发展、分化程度、TNM分期、淋巴转移及预后有紧密联系。

慢性紫外线损伤小鼠模型皮肤角质形成细胞中CK5和CK14表达研究

目的:观察慢性紫外线(utraviolet,UV)损伤对小鼠角质形成细胞CK5和CK14表达的调控效应。方法:采用模拟日光UV(UVA+UVB)光源对实验小鼠进行照射,照射从最小红斑量(MED,UVB0.07.J/cm^2,UVA0.7 J/cm^2),每周增加0.5个MED,每日1次,每周照射5 d,共9周,UVB总剂量达9.45 J/cm^2,UVA总剂量达94.5.J/cm^2,通过组织学观察、特殊化学染色和表皮厚度测量确定皮肤损伤,应用免疫组化法分别对照射前后(W0和W9)CK5和CK14的表达进行检测。应用Wilcoxon符号秩和检验和Spear-man秩相关系数进行统计分析。结果:对照组小鼠实验前、后CK5和CK14表达差异均无统计学意义(P>0.05)。损伤组小鼠实验前CK5和CK14的表达差异均有统计学意义(P<0.05),并且损伤组小鼠的CK5和CK14表达呈现明显的定位改变,在增厚的表皮中呈现弥漫的表达,失去在正常表皮中表达于基底细胞层的定位特点。损伤组小鼠表皮角质形成细胞内的CK5和CK14表达均显著上调,且二者的表达呈现正相关性(r=0.840,P<0.05)。结论:重复UV暴露导致小鼠角质形成细胞中CK5和CK14表达上调和定位异常。以上述两种角蛋白为标志物的基底层细胞过度增殖可能参与了慢性UV皮肤损伤出现表皮增厚的发生。

联合检测CK5/6、CK14和表皮生长因子受体对基底样三阴乳腺癌的诊断价值

目的探讨联合检测CK5/6、CK14和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)对基底样三阴乳腺癌的诊断价值。方法北京协和医院2000年1月至2011年12月经组织病理学证实的115例三阴乳腺癌患者,收集其临床及病理资料。应用免疫组织化学法检测所有石蜡标本中CK5/6,CK14和EGFR的表达,以此判定是否为基底样三阴乳腺癌。以三者联合检测结果作为金标准,计算CK5/6,CK14和EGFR单独检测、两两联合检测的敏感性和特异性。进一步分析基底样三阴乳腺癌和非基底样三阴乳腺癌在年龄、肿瘤大小、组织学类型等临床及病理特征方面的差异。结果115例三阴乳腺癌患者平均患病年龄为(50.7±13.6)岁。免疫组织化学结果显示,单独检测CK5/6,基底样三阴乳腺癌阳性率为29.6%(34/115),CK14为21.7%(18/83),EGFR为60.9%(70/115)。CK14,CK5/6和EGFR三者联合检测阳性率为67.8%(78/115)。将三者联合检测的阳性例数作为金标准,则EGFR与CK5/6联合检测敏感性及特异性分别可达98.7%及100%。基底样三阴乳腺癌与非基底样三阴乳腺癌在组织学类型、分级,淋巴结转移情况,死亡率方面差异有统计学意义(P均<0.05),基底样三阴乳腺癌总生存期显著缩短(HR=0.363,95%CI:0.139~0.947)。结论 CK14、CK5/6和EGFR联合检测能够标识出最多数量的基底样三阴乳腺癌。基底样三阴乳腺癌预后比非基底样三阴乳腺癌预后更差,病理识别很重要。

丹黄散对糖尿病大鼠创面愈合及新生皮肤中CK14、CK15表达的影响研究

目的探讨丹黄散对糖尿病大鼠创面愈合及新生皮肤中细胞角蛋白14(CK14)、细胞角蛋白15(CK15)表达的影响。方法链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型大鼠成功后,将实验大鼠随机分成丹黄散组、西药组、模型对照组和空白对照组,每组20只。在所有实验动物背部两侧制作直径约1 cm的圆形全层皮肤缺损创面,从造模当日开始,丹黄散组清创后外撒丹黄散后无菌棉纱覆盖;西药组清创后用山莨菪碱、庆大霉素和胰岛素的无菌棉纱外敷,空白对照组及模型对照组清创后无菌棉纱覆盖。分别于造模3 d、7 d、14 d、21 d后观察和记录各组创面未愈合面积,计算各时间点创面愈合率;取各组大鼠创缘新生皮肤组织进行HE染色,观察创缘组织修复情况及局部炎症反应;采用免疫组化法检测各组大鼠创缘组织中CK14和CK15蛋白表达情况。结果丹黄散组大鼠3 d时可见少量肉芽组织开始形成,21 d时创面基本愈合结痂,无死亡大鼠;西药组大鼠7 d时可见肉芽组织出现,到21 d表皮覆盖大部分创面,无死亡大鼠;模型对照组大鼠创面愈合缓慢,7 d、12 d各死亡1只,21 d时创面大多未愈合;空白对照组大鼠3 d时即可见新鲜肉芽组织生成,18 d时死亡1只,21 d时创面基本愈合。西药组、丹黄散组大鼠各时间点创面愈合率及创面组织中CK14、CK15表达水平均明显高于模型对照组(P均<0.05);丹黄散组大鼠3 d、7 d时创面愈合率及创面组织中CK14、CK15表达水平与西药组比较差异无统计学意义(P均>0.05),14 d、21 d时均明显高于西药组(P均<0.05)。结论丹黄散可有效促进糖尿病大鼠皮肤溃疡创面愈合,机制可能与有效调控CK14、CK15表达有关。

玉女煎对气分证兔舌黏膜CK14、E-Cad、HSP70、PCNA、TLR4表达影响

目的:探讨玉女煎对兔舌象变化的分子机制。方法:玉女煎治疗内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)所造气分证,观察兔舌象变化,免疫组织化学研究舌黏膜CK14、E-Cad、HSP70、PCNA、TLR4表达变化。结果:气分证兔舌黏膜增厚,CK14、HSP70、PCNA、TLR4表达升高,E-Cad表达降低,玉女煎治疗可以逆转舌黏膜相关分子表达水平,使舌黏膜变薄。结论:气分证兔造模前后及用药前后舌黏膜厚度的变化与CK14、E-Cad、HSP70、PCNA、TLR4表达有密切联系。

CK4、CK14在小鼠食管上皮的表达

为观察细胞角蛋4(CK4)和14(CK14)表达与小鼠食管上皮发育之间的关系。采用免疫组织化学观察CK4、CK14在胚胎第11天开始到胚胎第18天、小鼠出生后(生后)第1-7天、生后第2周、生后第4周以及成年小鼠食管上皮细胞的表达情况。结果显示,CK4和CK14在小鼠食管上皮均有表达,但是CK4在胚胎第15天开始表达,而CK14在胚胎第11天开始就有表达,二者表达的相同之处在于:在小鼠胚胎第16天开始表达明显,且定位明确,以后随着胚胎发育,表达逐渐增强,但在生后第7天表达最强,其中CK4主要在食管上皮基底层以上表达,而CK14在食管上皮的基底层表达,随后在生后第2周、第4周和成年的表达又逐渐降低。由此可知:CK14可以结合干细胞标记物,共同标记食管上皮干细胞。

受体三阴性乳腺癌中CK14和EGFR的检测及临床意义

目的研究三阴性乳腺癌中CK14和EGFR蛋白的表达及意义。方法免疫组化法检测95例三阴性及50例非三阴性浸润性乳腺癌中CK14和EGFR蛋白的表达,运用荧光原位杂交(FISH)检测4例EGFR基因扩增情况。结果所有三阴性乳腺癌病例显示为高级别癌,核分裂像易见。肿瘤组织具有推进式的边缘,周围伴淋巴细胞浸润。瘤细胞呈合体细胞样,通常见坏死。免疫组化示ER、PR和HER2均阴性,CK14和EGFR在三阴性乳腺癌中的表达率分别为83.2%和65.3%,在非三阴性乳腺癌中的表达率分别为2.0%和20.0%(P<0.01)。4例FISH检测见EGFR基因扩增。结论三阴性乳腺癌具有独特的组织学与基底样细胞表型,EGFR常过度表达,对于EGFR分子靶向治疗可能有效。

外用玉屏风凝胶对皮肤慢性光老化小鼠模型HaCaT角蛋白CK5和CK14表达的影响

目的观察外用玉屏风凝胶对紫外线诱导的小鼠慢性光老化模型的改善作用。方法应用紫外线治疗仪将实验小鼠造成慢性光老化模型后,小鼠随机分成治疗组(外用玉屏风凝胶)、自然恢复组、外用凝胶基质组3组,采用不同方法干预4周,通过HE染色、EVG染色及角蛋白CK5和CK14的表达变化观察玉屏风凝胶对皮肤光老化的改善作用。结果小鼠光老化模型建立成功;治疗组外用玉屏风凝胶后表皮逐渐变薄,细胞层数减少,细胞排列均匀一致,真皮层胶原纤维和弹力纤维排列较前致密有序,无卷曲扭结。CK5和CK14的阳性表达由95%分别下降为50%和70%,与用药前相比,差异有统计学意义(P<0.05);外用凝胶基质组和自然恢复组组织结构及CK5和CK14的阳性表达在干预前后均没有变化,仍为95%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论外用玉屏风凝胶对皮肤光老化有明显的改善作用,用药后引起CK5和CK14的表达下调,提示CK5和CK14可能参与了光老化创伤后的修复。

CK5/6和CK14在乳房外Paget病的分布

目的观察细胞角蛋白5/6(CK5/6)及14(CK14)在乳房外Paget病中的表达特点,并探讨其生物学意义。方法应用免疫组化二步法分别检测34例乳房外Paget病患者皮损及20例正常对照皮肤中CK5/6及CK14的表达情况。结果 CK5/6和CK14在乳房外Paget病中阳性表达,两者主要在表皮全层弥漫性表达,表达率分别为91.17%和88.24%。结论 CK5/6和CK14在乳房外Paget病的组织来源方面起到一定的启示作用,推测乳房外Paget病的肿瘤细胞可能来源于异常分化的基底细胞层表皮干细胞。

CK5/6、CK14、CK17、EGFR、BRCA1、BRCA2在三阴性乳腺癌中表达的研究

目的探讨CK5/6、CK14、CK17、EGFR、BRCA1、BRCA2在三阴性乳腺癌中的表达。方法采用免疫组化方法检测10例三阴性乳腺癌和15例非三阴性乳腺癌标本的CK5/6、CK14、CK17、EGFR、BRCA1、BRCA2的表达状态,并分析两组患者表达结果的差异。所有患者均经免疫组化明确ER、PR、Her-2状态。结果 10例三阴性乳腺癌患者中CK5/6阳性4例,CK14阳性4例,CK17阳性2例,EGFR阳性3例,BRCA1阳性3例,BRCA2阳性5例。三阴性与非三阴性乳腺癌在CK5/6和CK14的表达差异有显著性。将三阴性乳腺癌患者中CK5/6、CK14、CK17或EGFR有一个阳性患者分为Basal-like组,其他均为非Basal-like组,则两组患者中CK5/6、CK14、CK17的表达差异有显著性;EGFR的表达差异有显著性。结论 CK5/6和CK14在三阴性乳腺癌中高表达;CK17与EGFR在基底样细胞乳腺癌中高表达;BRCA1、BRCA2与三阴性乳腺癌关系用免疫组化方法尚难判定。

P16、Ki67、CK14细胞学检测与HPV感染在宫颈上皮内瘤变诊断中的意义

目的探讨检测宫颈脱落细胞中P16、Ki67、CK14与薄层液基细胞学检查(TCT)及高危型人乳头瘤病毒检查(HR-HPV)在宫颈上皮内瘤变(CIN)筛查的应用价值。方法选取宫颈病变筛查者的宫颈脱落细胞作为研究样本,对所有患者行TCT及HR-HPV检查,对阳性结果或临床症状高度可疑的患者行阴道镜活检和P16、Ki67、CK14检测。结果 P16、Ki67、CK14在实验组阳性表达率均高于TCT及HPV单独筛查阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。P16、Ki67、CK14在实验组各组中阳性表达率组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 P16、Ki67、CK14联合细胞学检测对宫颈上皮内瘤变的早期筛查有较高的准确率,为临床治疗提供一定的指导。

细胞角蛋白CK14和CK18在早期宫颈癌中的表达及意义分析

目的:探讨细胞角蛋白CK14和CK18在早期宫颈癌中的表达及临床意义。方法:收集2017年1月—2018年6月在本院行宫颈手术切除样本的石蜡切片。根据病理检查结果分为正常宫颈组30例,宫颈上皮内瘤变组30例(低级别瘤变15例、高级别瘤变15例),早期宫颈癌组60例。免疫组化检测CK14和CK18表达水平,分析其与病理类型、FIGO分期、组织分化、淋巴结转移的关系。结果:正常宫颈组、宫颈低级别上皮内瘤变组、宫颈高级别上皮内瘤变组、早期宫颈癌组CK14阳性率之间差异有统计学意义(P<0.01);CK14阳性率与宫颈病变程度呈负相关。在宫颈癌组织中完全覆盖鳞状上皮层CK18阳性率之间差异有统计学意义(P<0.01);CK18阳性率与宫颈病变程度呈正相关。不同病理类型、组织分化程度、淋巴结转移情况的宫颈癌患者CK14阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);不同病理类型、组织分化程度的宫颈癌患者CK18阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CK14和CK18表达水平与宫颈病变程度明显相关,CK14低表达、CK18高表达的早期宫颈癌患者未来病情可能进一步发展。

CK14mRNA在喉癌颈淋巴结微转移灶检测中的使用

颈部淋巴结转移的正确评估对头颈部鳞状细胞癌的预后判断及治疗有十分重要的意义。但常规病理检查手段很难发现以单个细胞或微小细胞团形式存在的微小转移灶,这些不被一般检查方法发现的隐匿性转移可能会影响患者术后综合治疗方案的制定，并间接影响患者的预后。

CK14在低分化非小细胞肺癌中区分鳞癌和腺癌的意义

根据世界卫生组织公布的资料,2012年癌症在全球共造成约820万人死亡,其中肺癌的死亡人数在所有癌症中排名第一,约159万.肺癌中约80％为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）.在对NSCLC进行组织学诊断时,应尽可能进一步划分腺分化或鳞分化.因为腺癌常伴有表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）突变,可用表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKI）或培美曲塞（pemetrexed）或贝代美珠（beracigumab）单抗治疗.

CK10、CK14、CK17、P16在宫颈不成熟鳞状化生及宫颈上皮内瘤变中的表达

目的探讨CK10、CK14、CK17、P16在宫颈不成熟鳞状化生(IM)及宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达和意义。方法应用SP免疫组化法检测CK10、CK14、CK17、P16在宫颈45例IM及120例CIN标本中的表达情况,并对结果进行分析。结果 CK17、CK10在宫颈IM中的阳性表达率分别为100%、95.6%,明显高于LSIL和HSIL组(分别为CK17:11.3%、15%;CK10:20.0%、22.5%。P均<0.01);P16在LSIL和HSIL中的表达率均为100%,明显高于IM组(13.3%,P<0.01);CK14在IM组、LSIL和HSIL组的表达率分别为64.4%、61.2%、67.5%,三组间差别不显著(P>0.05);在LSIL和HSIL组,CK14、P16的表达率无明显差别,但在LSIL中,阳性细胞位于上皮下1/3层,在HSIL中,位于上皮上1/3或全层。结论①CK17、CK10、P16在宫颈IM和CIN病变中表达具有明显差异,有助于两种病变的鉴别诊断;②CK14、P16可用于LSIL和HSIL的辅助鉴别诊断。

CK56CK14雌激素受体和孕激素受体检测在乳腺导管内增生性病变辅助诊断中的应用

目的：探讨CK5／6、CK14、雌激素受体（ ER）和孕激素受体（ PR）表达模式在普通型导管上皮增生（UDH）、不典型导管上皮增生（ADH）和低级别导管原位癌（DCIS）辅助病理诊断中的意义。方法2013年1月至2014年2月天津医科大学肿瘤医院病理诊断为乳腺ADH、灶性早期癌变为低级别DCIS的连续病例20例，收集其相关临床病理资料，并进行CK5／6、CK14、ER和PR免疫组化检测。结果 CK5／6、CK14在UDH腺上皮细胞中阳性表达，呈镶嵌状，而在ADH和低级别DCIS的腺上皮细胞中则呈阴性表达。 CK5／6、CK14在UDH、ADH和低级别DCIS的肌上皮细胞均有阳性表达。ER、PR在UDH、ADH和低级别DCIS的腺上皮中均有阳性表达，在ADH和低级别DCIS中表现为弥漫、均匀一致的强阳性，而在UDH中表现为少数细胞异质性阳性。结论在乳腺导管内增生性病变中，联合检测CK5／6、CK14、ER和PR的表达，对UDH、ADH和低级别DCIS的辅助鉴别诊断有着切实可行的意义。

皮肤创伤愈合过程中短暂扩增细胞增生及皮肤干细胞迁移

目的研究皮肤疤痕组织形成过程中皮肤干细胞分布、增殖分化迁移特征,初步探讨这些特征与皮肤创伤修复的关系。方法利用眼科显微外科剪对2日龄昆明小鼠背部皮肤进行人工统一造创,定期获取皮肤创面样品,常规病理染色观察创面愈合形态;应用免疫荧光染色法,以细胞转录因子Sox2和角蛋白14抗体分别检测皮肤干细胞的分布及干细胞增殖分化时所形成的短暂扩增细胞,并结合细胞增殖EdU荧光染色初步分析皮肤干细胞的迁移方向。结果创面愈合过程中表皮层中表达Sox2的阳性细胞逐渐连贯,并且发现真皮乳头层中Sox2和角蛋白14同时大量表达,可见致密细胞网和向下凸起的新生毛囊样结构形成。同时,创面愈合初期细胞迁移主要由创面底部开始,向上迁移并填充创面。结论创面愈合过程中,创面底部皮肤干细胞首先开始大量分裂增殖,并向创面迁移,创面上部皮肤干细胞分裂增殖迟于创面底部;迁移的皮肤干细胞以不对称分裂的形式增殖形成大量短暂扩增细胞,并在增厚的疤痕乳头层部位形成毛囊样结构填充皮肤疤痕。

SD大鼠角朊细胞分离培养及鉴定

目的探讨SD大鼠角朊细胞的分离培养技术并鉴定,观察细胞生长情况。方法采用中性蛋白酶(DispaseⅡ)和胰蛋白酶分离角朊细胞,加入含有10%胎牛血清的角质化细胞专用培养基(keratinocyte serum free,K-SFM)培养。用免疫组化法和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法进行鉴定。结果角朊细胞生长缓慢,原代培养第5天开始出现细胞克隆,核大而圆,培养11天连成片,培养24天长满单层,细胞传代培养比较困难,很难贴壁,经摸索在培养第15天,细胞长满80%左右时即可传代,但一般传3代后就不能再传。大鼠角朊细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)染色,细胞质呈棕褐色,提示培养的细胞CK19阳性。大鼠角朊细胞标志RT-PCR检测整合素β1、CK14(cytokeratin 14)、CK10(cytokeratin 10)的mRNA表达均阳性。结论用两种酶分离获得的大鼠角朊细胞活性好,降低成纤维细胞污染,用K-SFM培养基培养的细胞经鉴定具有角朊细胞特性,为皮肤组织工程的研究提供良好的种子细胞方面的实验数据。

上皮根鞘细胞在牙骨质发育中的作用

目的:观察牙根发育中上皮根鞘细胞(Hertwig′s epithelial root sheath,HERS)断裂后结局和增殖凋亡相关基因的表达,探讨上皮根鞘在牙根发育特别是牙骨质形成中的可能作用。方法:用TUNEL( TdT-mediated -dUTP nick end labeling , TUNEL)法原位细胞凋亡检测牙根发育中上皮根鞘细胞凋亡的情况。以细胞角蛋白14(cytokeratin 14)标记上皮根鞘细胞,追踪其断裂后结局。SP免疫组化法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA )和凋亡抑制基因Bcl -2在上皮根鞘细胞的表达。结果:牙形成后,内外釉上皮结合增殖形成HERS,此时呈PCNA表达阳性;牙根发育开始后,HERS呈Bcl -2阴性表达,在少量牙本质基质形成处,上皮根鞘细胞开始呈TUNEL阳性表达,之后HERS断裂,在其外侧可见成牙骨质细胞的形成,断裂的HERS细胞部分转入牙周膜形成上皮剩余(the epithelial rest of Malassez),而细胞牙骨质形成中可见部分埋入细胞呈CK14阳性表达。结论:HERS细胞的凋亡可能会为成牙骨质细胞分化提供信号,部分HERS细胞可能参与牙骨质的形成。

浸润性乳腺癌分子亚型患者的临床特征及预后研究

目的:探讨浸润性乳腺癌分子分型在基层医院的应用,了解北方人群各亚型的分布,以用于判断临床预后和指导治疗。方法:342例浸润性乳腺癌,按照免疫表型分为5种亚型:腺腔A型、腺腔B型、正常乳腺样型、人表皮生长因子受体2(HER2)过表达型和基底细胞样型。对比分析5型患者的分布比例、发病年龄、肿瘤最大径以及淋巴结转移等相关因素。结果:在5型中,腺腔A型例数最多(39.2%),其次为腺腔B型(30.7%)、HER2过表达型(16.7%)、基底细胞样型(7.6%),正常乳腺样型例数最少(5.8%)。发病年龄各型以40～59岁年龄段最多。结论:在5型中,腺腔A型所占比例最高;40～59岁为各型乳腺癌高发年龄组;HER2过表达型和基底细胞样型肿瘤最大径和多枚淋巴结转移比例高,提示预后更差。CK14角蛋白对基底细胞样型乳腺癌的诊断有协助作用。