前列腺癌CK5^+CK8^+细胞的分选及其分子生物学特性

目的在人前列腺癌细胞系中分选CK5^+CK8^+细胞,了解其分子生物学特性。方法流式细胞术在人前列腺癌细胞系PC3和LNCaP中分选CK5^+CK8^+细胞,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法方法检测LNCaP细胞分选的CK5^+CK8^+细胞CK5、CK8、雄激素受体(AR)和前列腺特异抗原(PSA)的表达,细胞迁移实验检测CK5^+CK8^+细胞迁移能力,琼脂糖凝胶克隆形成实验检测CK5^+CK8^+细胞成瘤能力。采用t检验进行统计学分析。结果采用流式细胞术可以在PC3中分选出(21.3±4.6)%的CK5^+CK8^+细胞,在LNCaP中分选出(1.2±0.4)%的CK5^+CK8^+细胞。与非CK5^+CK8^+细胞相比,LNCaP中分选的CK5^+CK8^+细胞CK5 mRNA表达差异有统计学意义(t=10.435,P<0.001),CK8 mRNA表达差异无统计学意义(t=1.974,P=0.121),AR和PSA mRNA表达差异有统计学意义(t=4.317,3.232;P=0.016,0.037)。蛋白质印迹法检测得到类似结果。细胞培养7 d后,CK5^+CK8^+细胞和非CK5^+CK8^+细胞均可以在Transwell小室迁移生长,迁移细胞数分别为(60±7)个和(32±5)个,2者比较差异有统计学意义(t=6.031,P=0.004)。细胞培养14 d后,CK5^+CK8^+细胞和非CK5^+CK8^+细胞均可以在软琼脂糖凝胶中克隆性生长,阳性克隆数分别为(71±5)个和(27±3)个,差异有统计学意义(t=13.009,P<0.001)。结论人前列腺癌细胞系LNCaP和PC3都可以分选出CK5^+CK8^+细胞,LNCaP中CK5^+CK8^+细胞AR和PSA均有一定程度表达,迁移和成瘤能力增强。

腺苷诱导耗竭型CD8^(+)T细胞影响肾癌细胞迁移及凋亡

目的探索腺苷是否诱导耗竭型T细胞生成以及对肾透明细胞癌细胞迁移和凋亡的影响。方法流式细胞术检测肾透明细胞癌及癌旁组织中CD8^(+)T细胞及耗竭表型分子3(TIM-3)的表达。生物信息学分析肾透明细胞癌及癌旁组织中基因表达差异,寻找影响T细胞耗竭基因。利用shRNA技术构建稳定敲除该基因的肾透明细胞癌786-O细胞株,检测细胞的迁移、凋亡等生物学行为。制备不同肿瘤条件培养基,培养CD8^(+)T细胞,研究敲除基因后的肾透明细胞癌细胞对耗竭型T细胞的影响。结果肾透明细胞癌与癌旁组织相比高表达CD8^(+)T细胞及TIM-3。生物信息学分析发现腺苷合成限速酶NT5E(CD73)在肾透明细胞癌中的表达高于癌旁组织。检测临床标本发现肾透明细胞癌组织中腺苷及CD73的表达高于癌旁组织。与对照组比较,敲除NT5E组的786-O细胞迁移能力下降及凋亡增加。敲除NT5E的肿瘤条件培养基培养的CD8^(+)T细胞中程序性死亡蛋白1表达减少,抑制T细胞增殖能力下降。结论肾透明细胞癌组织存在耗竭型CD8^(+)T细胞、腺苷及CD73的高表达。敲除NT5E的肾透明细胞癌786-O细胞迁移能力下降、凋亡增加。敲除NT5E可减少腺苷合成,减少耗竭型T细胞的生成。

重症肌无力患者外周血CD5^+B细胞和CD4^-CD8^-T细胞的变化

研究重症肌无力 (MG )患者外周血CD5 + B细胞和CD4 CD8 T细胞的变化 ,以探讨这两种细胞与MG的关系。采用流式细胞仪分析MG患者和对照组外周血中CD5 + B细胞和CD4 CD8 T细胞的频率 ,同时以ELISA方法检测这些患者的血清AchR、PsmR抗体水平。结果 :2 8例MG患者的CD5 + B细胞为 19 75 %± 10 8% ,高于对照组的 15 4 %± 9 6 7% (P <0 0 1) ;胸腺未切除MG患者的CD5 + B细胞为 2 2 31%± 7 4 7% ,显著高于对照组 (P <0 0 0 1) ;两种抗体阳性MG患者的CD5 + B细胞为 2 4 96 %± 13 1% ,显著高于对照组 (P <0 0 0 1) ;以上各组MG患者的CD4 CD8 T细胞与对照组均无显著区别 ;两种抗体阴性组的CD5 + B细胞和CD4 CD8 T细胞亦与对照组均无显著区别 ;两种抗体阴性组的CD5 + B细胞和CD4 CD8 T细胞亦与对照组无明显差异。本研究提示MG患者外周血的CD5 + B细胞频率增高 ,与胸腺切除与否以及突触前后膜抗体的阳性程度密切相关 ,而CD4 CD8 T细胞是否与MG有关还需进一步研究证实。

慢性乙型肝炎患者病程中CD5^+ B细胞及CD4/CD8的变化研究

目的研究CD5+B细胞和CD4/CD8在慢性乙型肝炎发病中的作用,以及他们之间的相关性。方法采用免疫荧光双标记技术和流式细胞仪对48例慢性乙型肝炎患者发病前后周围血中CD4/CD8比例和CD5+B细胞的百分率和37例健康对照者进行比较。结果在慢性乙型肝炎患者发病高峰期周围血CD4/CD8比例显著低于病情恢复期,且和健康对照组比较差异有显著性;而CD5+B细胞在慢性乙型肝炎患者发病高峰期,显著高于健康对照组和慢性乙型肝炎患者恢复期,差异有显著性。结论慢性乙型肝炎的发病和T细胞免疫功能的紊乱相关,而CD5+B可能在乙型肝炎的慢性化机制中发挥作用。

CK5、CK8和Oct-4在乳腺上皮干细胞分化及演变中的表达

为探讨CK5、CK8和Oct-4在乳腺上皮良、恶性增生病变中的表达及其作为标记物分析乳腺导管上皮干细胞分化及演变规律,对41例人乳腺导管上皮良、恶性增生病和10例正常人乳腺组织标本,采用免疫组化S-P法分别检测Oct-4、CK5和CK8的表达,应用SPSS10.0软件进行统计分析。结果表明,CK5在正常乳腺组织、乳腺增生病及乳腺癌中的阳性率呈下降趋势,且存在明显差异(P<0.05),在部分乳腺侵袭性导管癌中,CK5阳性染色主要集中在外层尚未侵袭的基底层细胞中,在肿瘤细胞中没有表达或很少表达;CK8主要在肿瘤细胞中表达,在基底层细胞中完全不表达;Oct-4在正常乳腺组织、乳腺增生病及乳腺侵袭性导管癌中均有表达,无显著性差异(P=0.381)。结论:成人乳腺上皮细胞谱系分化进程中,CK5表达下调,最终缺失,被CK8取代,表明乳腺上皮恶性转化时趋向腺系分化的方向发展;表达Oct-4基因的成人乳腺上皮细胞可能具有定向干细胞的分化特征,是癌变起源的靶细胞。

慢性HBV感染者外周血CXCR5^+ CD_8^+ T细胞亚群的特点及意义

目的:研究慢性HBV感染者外周血CXCR5^+CD_8^+T细胞亚群的特点,探讨CXCR5^+CD_8^+T细胞在慢性HBV感染进程中的作用。方法:收集76例慢性HBV感染者,分四组,其中肝功能正常高病毒载量组8例、肝功能异常高病毒载量组26例、肝功能正常低病毒载量组26例、肝功能异常低病毒载量组16例。另收集健康对照组21例。检测各项指标,统计并分析数据。结果:慢性HBV感染组外周血CXCR5^+CD_8^+T细胞水平(2.24±0.66)高于健康对照组(0.41±0.12);肝功能正常感染组外周血CXCR5^+CD_8^+T细胞水平(2.77±0.45)高于肝功能异常感染组(1.82±0.48);低病毒载量组外周血CXCR5^+CD_8^+T细胞水平(2.75±0.39)高于高病毒载量组(1.62±0.31),且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:CXCR5^+CD_8^+T细胞在慢性HBV感染进程中起抗病毒作用,进一步深入研究CXCR5^+CD_8^+T细胞的相关特点,可为治疗慢性HBV感染提供新方法。

CK5/6、P63、TTF-1和CK8/18在NSCLC组织中的表达及意义

目的检测细胞角蛋白5/6(cytokeratin5/6,CK5/6)、P63蛋白、甲状腺转录因子-1(thyroid transcription factor-1,TTF-1)和细胞角蛋白8/18(cytokeratin8/18,CK8/18)在人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况,研究其表达对于肺鳞癌和肺腺癌的诊断和鉴别诊断价值,探讨其临床意义。方法采用免疫组化(EnVision法)检测CK5/6、P63、TTF-1和CK8/18在1 067例病理确诊的NSCLC中的表达情况,分析其表达与NSCLC临床及病理资料的相关性。结果 CK5/6、P63、TTF-1和CK8/18在NSCLC中的阳性表达率分别为50.2%(227/452)、59.6%(164/275)、61.6%(257/417)和94.3%(116/123)。CK5/6诊断肺鳞癌的灵敏度和特异度分别为96.1%和89.8%,准确度为92.9%。P63诊断肺鳞癌的灵敏度和特异度分别为97.0%和73.9%,准确度为86.1%。TTF-1诊断肺腺癌的灵敏度和特异度分别为88.1%和91.7%,准确度为89.2%。CK8/18诊断肺腺癌的灵敏度和特异度分别为100.0%和13.5%,准确度为70.9%。CK5/6和P63共同表达阳性诊断肺鳞癌的灵敏度和特异度为84.1%和94.5%,准确度为89.0%。TTF-1和CK8/18共同表达阳性诊断肺腺癌的灵敏度和特异度为86.5%和100.0%,准确度为90.7%。CK5/6、P63主要表达在肺鳞癌,在男性、吸烟患者中升高明显(P<0.05);TTF-1、CK8/18主要表达在肺腺癌,TTF-1在女性、不吸烟患者中升高明显(P<0.01)。NCSLC患者T分期越晚,其CK5/6、P63、TTF-1的阳性表达率越高(P<0.01)。NSCLC患者淋巴结转移N分期越早,其CK5/6、P63的阳性表达率越高(P<0.01)。P63的表达与肿瘤TNM分期呈负相关(P<0.05)。结论单个指标中CK5/6、TTF-1的阳性表达对于肺鳞癌、肺腺癌的鉴别诊断具有较高价值。CK5/6和P63,TTF-1和CK8/18联合诊断有利于提高诊断的特异性。NSCLC中CK5/6、P63和TTF-1的表达与肿瘤生长浸润程度呈正相关,CK5/6、P63的阳性表达程度与淋巴结转移分期呈负相关,P63的表达与肿瘤TNM分期呈负相关。

肾癌患者中外周血淋巴细胞亚群、T-reg、MDSC的表达及临床意义

目的 采用流式细胞术分析肾癌患者MDSC、T-reg、CD_(3)^(+)CD4^(+)T细胞、CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)T细胞和CD3-CD_(1)^(+)6CD_(5)^(+)6细胞的表达情况,以及各项指标与肾癌进展的相关性,探讨各项指标在肾癌治疗预后中的相关价值。方法 选取2021年9月至2022年11月住院的肾癌患者44例为肾癌组,选取29例健康人作为对照组。清晨,空腹采集3 mL静脉血。所有肾癌患者均已通过组织病理学诊断。采用全血9色荧光11参数流式细胞术检测肾癌患者和健康体检者MDSC、Treg、CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)T细胞、CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)T细胞、CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)T细胞/CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)T细胞比值和CD3-CD_(1)^(+)6CD_(5)^(+)6细胞表达水平。收集患者的临床数据:包括年龄、性别、BMI、临床分期、肿瘤大小、病理类型。结果 肾癌组与对照组之间性别、年龄、BMI差异均无统计学意义(P>0.05)。肾癌组与对照组之间外周血CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)、CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)、CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)/CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)、NK、T-reg、PMN-MDSC、M-MDSC水平差异有统计学意义(P<0.05)。肾癌患者CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)、CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)的表达水平低于对照组(P<0.05),T-reg、PMN-MDSC、M-MDSC的表达水平高于对照组(P<0.05)。肾癌周血中患者外的CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)、CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)、CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)/CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)、NK、T-reg、PMN-MDSC、M-MDSC的表达水平与性别、年龄、BMI、病理学类型水平无显著相关(P>0.05)。CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)T、CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)/CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)、NK与肿瘤大小、临床分期之间无明显相关性(P>0.05),CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)、M-MDSC、PMN-MDSC、Treg与肿瘤大小、临床分期有相关性(P<0.05)。经Logistic回归分析结果显示:外周血CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)淋巴细胞低表达,T-reg、PMN-MDSC、M-MDSC的高表达可能与肾癌患者分期相关(P<0.05)。通过构建ROC曲线结果显示:按照临床分期进行分组,“0”为Ⅰ期、Ⅱ期组,“1”为,Ⅲ期、Ⅳ期组,T-reg、PMN-MDSC、M-MDSC血清指标水平检测肾细胞Ⅲ期、Ⅳ期患者的AUC均>0.70,均有一定的评估价值。T-reg、PMN-MDSC、M-MDSC、M-MDSC+Treg、PMN-MDSC+Treg与参考线比较差异有统计学意义(P<0.05),其中PMN-MDSC+Treg联合检测的差异性最为显著(P<0.05)。结论 肾癌患者与对照组相比CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)T细胞、CD_(3)^(+)CD_(8)^(+)T、CD3-CD_(1)^(+)6CD_(5)^(+)6细胞有明显降低,CD4/CD8比值升高,PMN-MDSC、M-MDSC和Treg细胞明显升高,提示机体的免疫功能受损。CD_(3)^(+)CD_(4)^(+)、PMN-MDSC、M-MDSC、T-reg在肿瘤大小、临床分期中表达水平不同,肿瘤直径越大,临床分期越晚,PMN-MDSC、M-MDSC、T-reg表达水平越高。外周血MDSC、T-reg与肾癌临床分期相关,外周血MDSC、T-reg对于肾癌的发生、发展和预后可能有一定的提示意义。

DLGAP5作为肾透明细胞癌的诊断标志物及其与CD8^(+)T细胞的相关性

目的探讨Discs大同源物关联蛋白5(DLGAP5)表达在肾透明细胞癌(KIRC)中的作用。方法基于癌症基因组图谱(TCGA)分析KIRC中DLGAP5的表达情况与临床参数之间的相关性。应用比例风险(Cox)回归模型和Kaplan-Meier(K-M)分析评估了DLGAP5在KIRC患者中的预后价值。CIBERSORT分析DLGAP5和CD8^(+)T细胞之间的相关性,基因集富集分析(GSEA)方法筛选和DLGAP5表达相关的生物学途径。结果与正常肾脏组织比较,KIRC中DLGAP5的表达呈显著上调。其高表达情况与肿瘤组织的分化程度、病理分期、复发和死亡均显著相关。K-M分析结果表明,DLGAP5高表达与KIRC患者的不良总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)相关,且DLGAP5是OS和PFS的独立预后因子。免疫微环境分析表明,DLGAP5的表达量与多种肿瘤免疫细胞相关,尤其是CD8^(+)T细胞。DLGAP5表达在“细胞周期”“泛素介导的蛋白水解”“蛋白酶体通路”和“T细胞受体信号通路”上显著富集。药敏分析结果显示,高危组患者对阿昔替尼、舒尼替尼更敏感。结论DLGAP5是KIRC的一种潜在生物标志物,与KIRC的诊断与预后显著相关,这将为临床的诊断与治疗提供新的研究方向。

EB病毒蛋白对培养B细胞产生TNF-α和IL-8的影响

目的 :EB病毒 (Epstein Barrvirus,EBV)蛋白刺激培养的人脐带血B细胞产生细胞因子的作用 .方法 :从人脐带血分离获得纯化的B细胞 ,用UV灭活和热处理EBV处理培养的B细胞 ,流式细胞仪检测UV灭活EBV组细胞CD5 ,CD3,CD4和CD8的表达 ,ELISA法检测培养上清液中TNF α和IL 8的产生 .结果 :细胞培养 1 4d时 ,未检测到T细胞 ,CD5 + B细胞占 4 3% ;2 8d时 ,CD5 + B细胞占 4 7% .UV灭活EBV组 2 ,1 8,2 2和 2 6d时间点TNF α有显著变化 (P <0 .0 5 ) ,1 8,2 2 ,2 6和 30d时间点IL 8差异有显著性 (P <0 .0 5 ) .热处理EBV组TNF α和IL 8无明显变化 (P >0 .0 5 ) .结论 :EBV蛋白可诱导人脐带血B细胞产生TNF α和IL 8。

剔除CCR5基因供者小鼠细胞加重急性移植物抗宿主疾病

目的评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。方法经过致死剂量照射的BALB/C小鼠接受异基因C57BL/6小鼠骨髓移植。根据回输的细胞不同分为4组:1)B6 CCR5 KO组,受者接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;2)B6 WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓和脾脏细胞;3)B6 CCR5 KO BMC组,受者只接受C57BL/6 CCR5-/-小鼠骨髓细胞;4)B6 WT BMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞。结果与B6 WT组比较,B6 CCR5 KO组小鼠以更快的速度死于急性移植物抗宿主疾病(GVHD);其受者体内的CD8+T细胞大量增生;T细胞恢复后产生更多的干扰素-γ(INF-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α),T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平,进一步促进T细胞增生。组织学检测提示移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现病理损伤,肝脏存在更为严重的病理变化。结论剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率增加,供者CD8+T细胞在受者体内增生加重肝肾损害。提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。

剔除CCR5基因供者小鼠细胞加重急性移植物抗宿主疾病

目的评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为今后的异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。方法经过致死剂量照射的BALB/C小鼠接受异基因C57BL/6小鼠骨髓移植。根据回输的细胞不同分为4组:B6CCR5KO组,受者接受C57BL/6CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;B6WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞;B6CCR5KOBMC组,受者只接受C57BL/6CCR5-/-小鼠骨髓细胞;B6WTBMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞。结果较之B6WT组,B6CCR5KO组小鼠以更快的速度死于急性GVHD;其受者体内的CD8+T细胞更大量的增殖;其T细胞恢复后产生更多的IFN-γ和TNF-α,并且由于其T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平从而进一步促进T细胞增殖,提示CCR5的作用之一是下调参与排异反应的供者CD8+T细胞的增殖。组织学评价提示移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现了病理损伤并且肝脏存在更为严重的病理变化。结论剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率增加,供者CD8+T细胞在受者体内增殖增加以及肝肾损害加重,提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。

雄激素受体对从前列腺癌LNCaP细胞分选出的CK5+CK8+细胞的作用及其调控机制

目的探讨雄激素受体(AR)对从前列腺癌LNCaP细胞中分选出的CK5+CK8+细胞的作用及其调控机制。方法采用流式细胞术从LNCaP细胞中分选CK5+CK8+细胞,使用慢病毒载体携带AR基因转入CK5+CK8+细胞。实验分为转入AR的AR CK5+CK8+组和转入空载体的V CK5+CK8+组,在1、10 nmol/L二氢睾酮(DHT)培养条件下,采用蛋白质印迹法检测AR、p-AKT和bcl-2蛋白的表达,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、细胞迁移实验和琼脂糖凝胶克隆形成实验检测AR对CK5+CK8+细胞生物学特性的影响。采用MTT法检测应用AKT信号通路活化抑制物LY 294002(LY)、γ-生育三烯酚(γ-TT)和(或)诱导AR表达的5-氮胞嘧啶(5-AZA)对CK5+CK8+细胞增殖的影响。结果AR基因转入CK5+CK8+细胞后,AR表达增强,p-AKT和bcl-2蛋白表达水平降低。在1、10 nmol/L DHT作用2、4、6 d后,AR CK5+CK8+组细胞较V CK5+CK8+组细胞增殖受抑制程度高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。DHT 1、10 nmol/L作用3 d后,AR CK5+CK8+组细胞较V CK5+CK8+组细胞迁移能力下降[迁移细胞数:(54±9)个比(113±21)个,(13±3)个比(34±6)个],差异均有统计学意义(t=4.450,P<0.01;t=5.157,P<0.01)。DHT 1、10 nmol/L作用3周后,AR CK5+CK8+组细胞较V CK5+CK8+组细胞成瘤能力弱[克隆数:(39±7)个比(105±16)个,(41±6)个比(86±6)个],差异有统计学意义(t=6.631,P<0.01;t=8.662,P<0.01)。5 nmol/L LY+10 nmol/L 5-AZA、5 nmol/L LY+5 nmol/Lγ-TT、10 nmol/L 5-AZA+5 nmol/Lγ-TT、2.5 nmol/L LY+5 nmol/L 5-AZA+2.5 nmol/Lγ-TT联合1 nmol/L DHT或10 nmol/L DHT作用2、4、6 d均能抑制CK5+CK8+细胞增殖(均P<0.05)。结论AR可以抑制从LNCaP中分选出的CK5+CK8+细胞增殖,导致细胞迁移和成瘤能力下降;其可能通过抑制AKT-bcl-2信号通路的活化而发挥作用。

CD5^+CD19^+B细胞在乙型肝炎病毒慢性感染中对CD8+细胞的作用和机制

目的观察CD5^+CD19^+B细胞在体外是否具有分泌IL-10的功能,并探讨其在HBV感染过程中对CD8^+细胞的作用和机制。方法纳入2017年7月至2018年6月在南京医科大学附属无锡第二医院确诊的慢性乙型肝炎(乙肝组)23例、肝硬化(肝硬化组)18例患者,以及同期健康对照(健康对照组)19名。通过外周血单个核细胞(PBMC)分离、细胞培养、流式细胞术分析、CD5^+CD19^+B细胞分离等操作,比较3组CD5^+CD19^+B细胞含量较多(占淋巴细胞百分比>6%)的患者比例、CD5^+CD19^+B细胞分泌IL-10的情况和IL-10^+细胞含量较多(占淋巴细胞百分比>4%)的患者比例,分析CD5^+CD19^+B细胞对CD8^+细胞分泌γ干扰素的影响和可能机制。通过对慢性乙型肝炎13例和肝硬化5例患者行肝活组织和免疫组织化学检查,分析CD5^+CD19^+B细胞在人体肝组织中表达情况。统计学分析采用卡方检验和Fisher确切概率法。结果肝硬化组中CD5^+CD19^+B细胞含量较多的患者比例高于健康对照组(8/18比2/19),差异有统计学意义(Fisher确切概率法,P=0.029)。健康对照组(10名)、乙肝组(23例)、肝硬化组(18例)的CD5^+CD19^+B细胞分别占IL-10^+细胞的81.6%、82.3%、70.1%,IL-10^+细胞含量较多的患者分别为2、7和2例,3组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。在脂多糖刺激培养48 h后,健康对照组(10名)CD8^+γ干扰素^+细胞占淋巴细胞百分比与乙肝组(10例)、肝硬化组(10例)比较(10.73%比7.05%和9.52%)差异均无统计学意义(P均>0.05);剔除CD5^+CD19^+B细胞后,健康对照组(10名)、乙肝组(10例)和肝硬化组(10例)中分别有5、4、4例患者CD8^+γ干扰素^+细胞占淋巴细胞百分比升高。添加IL-10受体阻滞剂后,PBMC中CD8^+γ干扰素^+占淋巴细胞百分比较添加IL-10受体阻滞剂前升高(7.23%比6.87%)。肝活组织标本免疫组织化学分析结果显示,CD4^+和CD8^+细胞在患者肝小叶汇管区强表达,CD5^+和CD19^+细胞较少表达。结论CD5^+CD19^+B细胞在HBV慢性感染的进展过程中并未体现出明显数量和功能上的差异,但对CD8^+细胞分泌γ干扰素的能力具有抑制作用,并且可能是通过分泌IL-10而不是通过细胞间的直接接触实现。

Notch1信号在乳腺癌干细胞分化中的作用

目的探讨Notch1信号与CK5、CK8在乳腺癌干细胞分化中的作用。方法采用免疫组化SP法检测Notch1、CK5、CK8在96例乳腺浸润性导管癌中的表达。结果Notch1在浸润性导管癌75%(72/96)表达;CK5在浸润性导管癌中17.7%(17/96)呈现阳性;CK8在浸润性导管癌中92.7%(89/96)表达。5例CK5+/CK8-表型病例中,有1例Notch1阳性;12例CK5+/CK8+表型病例中,4例伴Notch1阳性;77例CK5-/CK8+表型病例中,有67例伴Notch1的表达,并且Notch1与浸润性导管癌的这种免疫表型的分化模式呈相关关系(P=0.000)。结论Notch1信号在乳腺上皮干细胞恶性转化中表达上调,Notch1基因可能是一种癌基因,对乳腺癌干细胞的分化起调节作用。

在小鼠骨髓移植中CCR5与急性移植物抗宿主病的相关性研究(英文)

本研究评价供者CCR5在经过强化预处理的骨髓移植动物模型受者体内的作用,为今后的异基因造血干细胞移植的临床应用提供科学依据。经过致死剂量照射的BALB/c小鼠接受异基因C57BL/6小鼠的骨髓移植。根据回输的细胞不同实验分为4组:B6CCR5KO组,受者接受C57BL/6CCR5-/-小鼠骨髓和脾脏细胞;B6WT组,受者接受野生型C57BL/6小鼠骨髓和脾脏细胞;B6CCR5KOBMC组,受者只接受C57BL/6CCR5-/-小鼠骨髓细胞;B6WTBMC组,受者只接受野生型C57BL/6小鼠骨髓细胞。结果表明:较之B6WT组,B6CCR5KO组小鼠以更快的速度死于急性GVHD;其受者体内的CD8+T细胞更大量的增殖;其T细胞恢复后产生更多的INF-γ和TNF-α并且由于其T细胞有丝分裂原刀豆素水平处于较高水平,从而进一步促进T细胞的增殖,提示CCR5的作用之一是下调参与排异反应的供者CD8+T细胞的增殖。组织学评价提示,移植剔除CCR5基因受者细胞的小鼠肾脏出现了病理损伤并且肝脏存在有更为严重的病理变化。结论:剔除CCR5基因的异基因骨髓移植使GVHD发病率的增加,供者CD8+T细胞在受者体内增殖增加以及肝肾损害加重,这提示CCR5在异基因骨髓移植中起着重要作用。

前列腺癌组织中间层上皮细胞比例差异的研究

目的:探讨前列腺癌组织中间层上皮细胞构成比例差异及其临床意义。方法:对60例前列腺癌标本分别进行CK5、CK8免疫组化染色将前列腺癌分为两类:即以中间层上皮细胞为主的前列腺癌(CaP-INT)共计32例和以腔面层上皮细胞为主的前列腺癌(CaP-LUM)共计28例。比较两类前列腺癌雄激素受体(AR)阳性率、患者年龄、血清t-PSA、前列腺体积、G leason评分、临床分期、雄激素抵抗率的差异。结果:两类前列腺癌相比较,CaP-LUM的AR阳性率为(77.21±10.22)%,而CaP-INT其阳性率为(24.42±11.41)%,CaP-INT的AR阳性率明显低于CaP-LUM(P<0.05)。远处转移的病例数,CaP-INT为14例,CaP-LUM为4例,CaP-INT转移率明显高于CaP-LUM(P<0.05)。在行内分泌治疗的患者中,CaP-INT组共26例,有6例进展为雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC);CaP-LUM共23例,有1例进展为AIPC,两者亦有显著差异(P<0.05)。CaP-INT在局部临床分期上也显著高于CaP-LUM(P<0.05)。而两类前列腺癌在年龄、血清t-PSA、前列腺体积及G leason评分上无显著差异(P>0.05)。结论:中间层上皮细胞增多和前列腺癌侵袭性增加、肿瘤转移性增强及产生雄激素抵抗相关。

ABCG5和ABCG8在肝细胞胆固醇转运中的作用

目的验证ABCG5和ABCG8在胆固醇转运中的作用。方法通过脂质体介导将含ABCG5或ABCG5和ABCG8的质粒导入7721细胞系,通过抗生素G418、zeocin筛选获得新的细胞系7721-G5与7721-DG。用RT-PCR及Western blot等方法证明细胞系7721-G5与7721-DG中分别含有ABCG5,ABCG5和ABCG8。7721、7721-G5、7721-DG细胞系分别用[3H]标记的胆固醇、游离胆固醇、卵磷脂、无脂血清作用使细胞内胆固醇饱和,随后用牛磺胆酸钠/卵磷脂受体系统进行胆固醇外运实验。每60 min测定培养液中[3H]标记的胆固醇含量,计算外运的胆固醇数量。结果研究发现转染后含有ABCG5和ABCG8的7721-DG细胞系胆固醇转运能力明显高于其余两株细胞系,而仅含有ABCG5的7721-G5细胞系胆固醇转运能力无明显变化。结论ABCG5与ABCG8具有促进胆固醇外运的作用,两者必须形成异二聚体才能行使这种作用。此外,用myc和HA标记后并不影响ABCG5和ABCG8发挥功能。

四种显像剂在NCI—H358肺癌裸鼠模型中显像效果和生物分布的比较

目的比较^18F-脱氧葡萄糖（^18F-FDG）、^99Tc^m-甲氧荩异丁基异腈（^99Tc^m-MIBI）^99Tc^m-氮-二（N-2基N-2氧基二硫代氧基甲酸盐）[^99Tc^m-N（NOET））]和^99Tc^m-RGD-4CK娃像剂任NCI—H358肺癌裸鼠中的摄取，评价4种硅像剂对低代谢肺胆瘤的诊断价值。方法建立人非小细胞肺癌NCIH358细胞裸鼠移植瘤模型20只，随机分为4组，分别经尾静脉注射^18F-FDG、^99Tc^m-MIBI、^99Tc^m-N（NOErr），和^99Tc^m-RGD-4CK移像剂，进行显像和生物分布研究。结果SPECT全身平面显像显示，^18F-FDG组倚瘤小鼠胸部放射性核素明妙浓聚，与肿瘤组织部分重叠，以敛肿瘤轮廓显示不清晰；^99Tc^m-MIBI组荷瘤小鼠右前肢肿瘤处隐约显影，轮廓不清；^99Tc^m-N（NOET）2组和^99Tc^m-RGD-4CK组荷瘤小鼠右前肢肿瘤部位硅影均清晰。^18F-FDG组、^99Tc^m-MIB组。^99Tc^m-N（NOET）：组和^99Tc^m-RGD-4CK组肺癌裸鼠模型显像的肿瘤勺肌肉放射性比值（T／NT）分别为1．85±0．07、0．99±0．16、2．78±2．26和3．40±0．27，生物分布的T／NT值分别为2．32±0．14、0．44±0．08、2．59±0．53和3．43±0．36，其^99Tc^m-RGD-4CK组的rf／NT值明显高于其他组（均P〈0．01）。结论^99Tc^m-RGD-4CK对人非小细胞肺癌NCI—H358细胞移植瘤的湿像效果好于^18F—FDG，在诊断低代谢的非小细胞肺癌时，^99Tc^m-RGD--4CK妊像町能比^18F—FDG显像更具优势。

鞘内泵入吗啡对甲醛炎性疼痛大鼠免疫功能的影响

目的:观察鞘内泵入不同剂量的吗啡对甲醛炎性疼痛大鼠免疫功能的影响。方法: 32只SD大鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)和3个不同剂量吗啡组(M组),分别为10μg/h(M1 ), 5μg/h(M2 ), 2. 5μg/h(M3),每组8只。采用改良Yaksh法进行鞘内置管,Alzet泵持续泵入吗啡、生理盐水。复制甲醛炎性疼痛模型, 7d后采用疼痛加权评分(PIS)评价吗啡镇痛效应,分离脾脏单个核细胞进行原代培养,检测脾脏T淋巴细胞增殖水平、NK细胞活性,流式细胞仪检测脾脏T淋巴细胞亚群和NK细胞表型变化。结果:与对照组比较,M1,M2,M3组在甲醛炎性疼痛第一时相和第二时相的PIS差异有统计学意义(P<0. 01),且有量效关系,但3组间比较差异无统计学意义(P>0. 05);泵入吗啡7d后M1,M2,M3组脾脏指数、T淋巴细胞增殖转化水平和NK细胞活性降低(P<0. 05);CD3+, CD3+CD4+,CD3+CD8+数量及百分率降低,CD4+ /CD8+降低,CD161+数量及百分率降低(P<0.05)。结论:鞘内泵入吗啡对炎性疼痛大鼠具有明显的抗伤害作用;鞘内泵入不同剂量吗啡( 10μg/h, 5μg/h, 2. 5μg/h)均可抑制大鼠细胞免疫功能,免疫抑制程度与剂量成正比。