CKLF1-C19多肽对TGF-β诱导原代人肺成纤维细胞向肌成纤维细胞转化的干预作用

目的:探讨CKLF1-C19多肽(C19)对TGF-β诱导原代人肺成纤维细胞(LFB)向肌成纤维细胞(MFB)转化的干预作用。方法:培养原代人肺成纤维细胞并鉴定。用适宜的TGF-β浓度处理LFB,制备LFB向MFB转化的细胞模型。随后将实验分为对照组、TGF-β(5μg/L)组及4个浓度(1、0.1、0.01、0.001 mg/L)C19与TGF-β合用组。以细胞生长状态、细胞增殖率、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及I型胶原蛋白(collagen I)的表达变化为观察指标。结果:经显微镜检测,证实成功培养出原代人LFB。5μg/L TGF-β明显刺激LFB增殖及α-SMA和collagen I表达(P<0.05)。与TGF-β组相比,C19-0.01 mg/L+TGF-β及C19-0.001 mg/L+TGF-β组LFB的细胞增殖率、α-SMA和collagen I的mRNA及α-SMA的蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论:0.01 mg/L及0.001mg/L的CKF1-C19多肽对TGF-β诱导的LFB向MFB转化有一定的抑制作用,可在一定程度上抑制气道重塑和纤维化的发生。

CKLF1拮抗肽C19在小鼠特应性皮炎中的作用研究

目的探讨趋化素样因子1(CKLF1)拮抗肽C19局部皮下注射对特应性皮炎小鼠模型的作用。方法用卵清蛋白(OVA)经皮致敏BALB/c小鼠建立特应性皮炎模型。将60只BALB/c小鼠随机分成特应性皮炎组、对照组、预防组和治疗组,每组15只。观察小鼠致敏局部皮肤及组织病理改变。以ULSTM荧光标定技术检测各组总RNA中micro RNA的表现图谱。结果 1与对照组及预防组相比,皮炎组小鼠局部皮肤出现红斑、鳞屑等皮损,治疗组小鼠皮损经治疗后红斑、水肿减轻,鳞屑减少。小鼠局部皮损组织病理学显示,经CKLF1拮抗肽C19预防或治疗后,小鼠表皮增厚、细胞间水肿、真皮血管扩张充血及炎性细胞浸润均较轻。2以ULSTM荧光标定技术检测各组总RNA中micro RNA的表现图谱,通过鉴定各组间上调与下调的特定micro RNA基因,筛选调节炎症细胞因子特定靶基因表达的micro RNA,初步分析发现,经CKLF1拮抗肽C19局部外用治疗或预防后,小鼠皮损中部分调节炎症细胞因子特定基因表达的micro RNA上调。结论 CKLF1拮抗肽C19可能在预防或治疗特应性皮炎中具有重要作用,为了解及探索治疗特应性皮炎的多肽类药物提供了新途径。

局部外用CKLF1拮抗肽C19在小鼠特应性皮炎的治疗作用

目的探讨趋化素样因子1(CKLF1)拮抗肽C19局部外用对小鼠特应性皮炎(AD)模型的作用,并探索C19浓度与小鼠AD治疗效果的关系。方法用卵清蛋白(OVA)经皮致敏BALB/c小鼠腹部,建立小鼠AD模型。将55只小鼠按照随机数字表法分成空白对照组、皮炎组、治疗组a、治疗组b和治疗组c,每组各11只。其中空白对照组和皮炎组给予0.9%氯化钠溶液局部外用治疗,治疗组a、b、c三组则分别给予0.1μg/ml、1.0μg/ml、10.0μg/ml浓度的C19局部外用治疗。治疗隔日1次,共4次,治疗结束后,观察并记录各组小鼠皮损改变;收集小鼠皮损及血清,观察其组织病理学改变、组织中相关炎症因子及血清总Ig E水平。结果 (1)与空白对照组相比,皮炎组和治疗组小鼠局部皮肤出现明显的水肿、红斑、渗出、皮屑、结痂等皮疹表现,建模成功。(2)治疗结束后,经C19局部外用治疗后,AD小鼠局部皮肤外观及皮损组织病理学炎症减轻;与皮炎组相比,组织匀浆炎症因子IL-4和IL-5均在治疗组c中显著降低(P<0.05),而治疗组a、b与皮炎组相比差异无统计学意义(P>0.05);与皮炎组相比,组织匀浆炎症因子IL-13和嗜酸性粒细胞趋化因子(Eotaxin)在治疗组a、b、c组中均显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05),而IL-13和Eotaxin在治疗组a、b、c三组中差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 CKLF1拮抗肽C19在小鼠AD模型中可以经皮肤吸收发挥治疗作用,对于血清Ig E及组织匀浆IL-4、IL-5,高浓度C19对AD的作用效果优于低浓度C19;对于组织匀浆IL-13和Eotaxin,C19对AD的作用效果无明显浓度依赖性。