东方百合‘索邦’基于喷雾式植物反应器的AtCKX3基因转化

以东方百合‘索邦’鳞片为试材,采用喷雾式植物反应器(即开放式培养)手段,进行外源基因At CKX3的转化,并对除草剂草丁膦(PPT)质量浓度筛选、转化效率进行了研究。以生长情况一致的百合幼苗为材料进行草丁膦质量浓度的筛选,结果表明:8.5 mg·L-1为‘索邦’草丁膦筛选的临界质量浓度;将农杆菌侵染后的鳞片在喷雾式反应器中培养,诱导出不定芽及生根后进行移栽,并对转化植株幼苗进行草丁膦筛选。对抗性植株进一步进行PCR检测和PCR-Southern杂交检测,结果表明:采用喷雾式植物反应器培养,一方面,可有效提高转化效率,缩短培养时间,转化率为0.29%左右;另一方面转化苗移栽成活率更高,达75%。

‘巨峰’葡萄细胞分裂素氧化酶基因CKX3的克隆与表达分析

结合同源克隆和RACE技术在‘巨峰’葡萄(Vitis labruscana Bailey×V.vinifera L.‘Kyoho’)中克隆了细胞分裂素氧化酶基因CKX3,分析了该基因的表达特性及其对细胞分裂素的响应。序列分析表明,该基因c DNA全长为2 049 bp(Gen Bank登录号:KP689597),ORF(开放阅读框)为1 569 bp,编码522个氨基酸,具有FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)结合结构域和细胞分裂素结合结构域。该基因定位在葡萄的7号染色体上,具有4个内含子,5个外显子。氨基酸序列多重比对和系统进化树分析显示‘巨峰’葡萄CKX3与荷花Nu CKX3亲缘关系最近,与毛果杨同源性较高。基因表达分析结果显示‘巨峰’葡萄CKX3主要在根部和花序中大量表达,其次是在卷须和果实中有较高的表达,在茎和叶中的表达量较低;在花序发育过程中,在盛花期前表达量较低,盛花期以及盛花后表达量增加。在6-BA处理葡萄叶片后,CKX3的表达与细胞分裂素氧化酶的活性都高于对照。