琼脂糖凝胶CL-6B亲和色谱法一步纯化蚯蚓半乳凝素

环节动物的S型凝集素在结构和生化性质上都有别于一般的S型凝集素,其在抗癌等研究方面的潜在价值重大。根据环节动物S型凝集素的性质,采用惰性分子筛填料Sepharose CL-6B(琼脂糖凝胶CL-6B)作为亲和色谱介质对蚯蚓S型凝集素进行了纯化。以2mmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)-MEPBS(4mmol/Lβ-巯基乙醇,150mmol/L NaCl,20mmol/L磷酸盐,pH7.2)溶液作为平衡液,以氨水(150mmol/L,pH10.5)作为洗脱液得到的蛋白质经SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)、凝血实验及荧光检测等证明了其即为蚯蚓S型凝集素。该方法只需一个步骤即可从蚯蚓提取液中分离到纯的S型凝集素,比传统方法更加快捷高效,优越性明显。该方法的应用将有利于对环节动物S型凝集素的深入研究。

大量分离叶绿素a和b的方法

在原有分离叶绿素a和b的DEAE SepharoseCL 6B和SepharoseCL 6B柱层析法的基础上 ,用较大的层析柱 ,在保持分离效果的前提下 ,提高流速 ,并对层析柱进行原位再生处理 ,实现循环分离 ,可节省装柱和平衡时间 ,快速大量分离纯化叶绿素并可循环再生。 10 0 g菠菜叶可分离得到叶绿素a约 5 0mg ,叶绿素b约 15mg。

双歧杆菌22-5胞外多糖(EPS)的分离、纯化及纯度鉴定

为了得到双歧杆菌22-5胞外多糖(EPS)的纯品,对EPS分离纯化方法进行了摸索,得到EPS产量较高的分离条件:发酵上清液中加入3倍体积95%冷乙醇,-20℃沉淀12h以上,8000r/min离心4次,热水溶解后用Sevag法去蛋白6次,通过SephoroseCL-6B凝胶过滤得到的吸收峰,经紫外光谱扫描和HPLC分析,鉴定为单一多糖组分。

云芝胞内多糖CVP-Ⅱ的分离与初步鉴定

从液体发酵的云芝菌丝体中提取获得菌丝体胞内多糖,,经DEAE-SepharoseCL-6B洗脱分离出一种主要组分CVP-Ⅱ,该组分经凝胶层析显现单一峰,初步鉴定CVP-Ⅱ为较纯组分,对CVP-Ⅱ进行紫外分析,结果发现该组分呈现蛋白结合多糖的特征,从红外分析来看,明显呈现出多糖的官能团吸收.

环氧氯丙烷活化琼脂糖凝胶过程强化及性能评价

环氧氯丙烷的低水溶性和活化过程中环氧基水解制约了高活化效率的获得.通过引入亲水性有机试剂二甲基亚砜,研究了提高Sepharose CL-6B介质环氧基活化密度的方法.研究结果显示,二甲基亚砜溶剂体系消除了琼脂糖凝胶与环氧氯丙烷之间的相界面,形成了均相反应体系,强化了活化反应.在10%(φ)环氧氯丙烷、0.8mol/L氢氧化钠及反应时间2.5h的优化条件下,环氧基活化密度可达100μmol/mL以上.上述活化过程对介质的性能没有明显影响.活化介质对5-氨基吲哚的偶联密度达到95.3μmol/mL,较常规活化方法提高75%以上.

疏水层析介质的制备及对谷胱甘肽转硫酶的分离纯化

通过向环氧氯丙烷活化的Sepharose CL-6B中引入苯基,制备了Phenyl-Sepha-rose CL-6B凝胶并优化了偶联条件,以该合成的层析介质分离纯化了猪肝中的谷胱甘肽转硫酶。结果表明,在NaOH浓度为0.25mol.L-1,苯酚加入量为0.5mL.g-1凝胶,60℃下反应4.5h的条件下,偶联效果最好,偶联率达到95.5%。用该疏水层析介质纯化猪肝中的谷胱甘肽转硫酶,活性回收率为54.54%,纯化倍数为2.6。