Sdha基因敲低对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的探讨琥珀酸脱氢酶复合物亚单位A(SDHA)对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法用慢病毒载体介导的sh RNA敲低BNL CL.2细胞中sdha基因的表达。流式细胞仪检测慢病毒的感染效率;实时荧光定量PCR和Western蛋白印迹法分别检测sdha m RNA和SDHA蛋白表达水平;细胞计数法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果无相关sh RNA对照组和sdha sh RNA组慢病毒的感染效率均>80%。与无相关sh RNA对照组相比,感染sdha sh RNA慢病毒载体的BNL CL.2细胞sdha m RNA水平降低20倍左右(P<0.01),蛋白表达水平降低10倍左右(P<0.01);细胞增殖速度减慢,为无相关sh RNA对照组的70%左右(P<0.05);细胞周期发生改变,G0/G1期细胞百分率是无相关sh RNA对照组的1.17倍(P<0.01),G2/M期细胞百分率为1.37倍(P<0.01),S期细胞百分率为73.8%(P<0.01);但细胞凋亡率无明显差异。结论降低SDHA表达对小鼠肝细胞BNL CL.2细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用与细胞周期阻滞相关,与细胞凋亡无明显关系。

镉对小鼠胚胎肝细胞BNL CL.2氧化损伤作用的研究

目的:观察镉对小鼠肝细胞氧化损伤作用,为研究镉的肝毒性作用机制提供基础。方法:首先,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测镉对小鼠肝细胞活力的影响,然后通过苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,HE)和Hoechst 33342染色观察细胞病理变化情况,最后通过测定细胞超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量,评价镉诱导小鼠肝细胞氧化损伤情况。结果:与对照组相比,40μmol/LCdCl_(2)处理小鼠胚胎肝细胞(BNL CL.2)12 h后,可极显著的抑制其活力(P<0.01)。显微镜下观察发现,40μmol/L CdCl_(2)处理BNL CL.2细胞12 h后,大量细胞开始出现空泡变性、核皱缩等病理改变;与对照组相比,40μmol/LCdCl_(2)处理BNL CL.2细胞6 h后,SOD活力极显著降低(P<0.01),同时染镉细胞内MDA的含量极显著升高,表明染镉处理可造成BNL CL.2细胞氧化应激损伤。结论:CdCl_(2)可诱导BNL CL.2细胞发生氧化应激损伤进而导致细胞死亡。