CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素瘤细胞B16的影响

目的将CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞,观察其上清液对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成的影响,探讨CLEC2B基因在白癜风发病中的作用。方法培养人淋巴瘤细胞Jurkat细胞和小鼠黑素瘤细胞B16,采用脂质体介导的方法瞬时转染CLEC2B重组质粒入Jurkat细胞,半定量RT-PCR法鉴定CLEC2B基因过表达;将其细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞48 h后,MTT法检测黑素瘤细胞的增殖情况,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法检测黑素含量。结果 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用后的黑素瘤细胞增殖比空载体组、正常对照组降低,差异有统计学意义(均P<0.05),CLEC2B过表达组黑素含量比空载体组、正常对照组减少,差异有统计学意义(均P<0.05),CLEC2B过表达组、空载体组、正常对照组之间的酪氨酸酶活性比较差异无统计学意义(均P>0.05),空载体组与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素细胞的增殖和黑素合成有一定的抑制作用,对酪氨酸酶活性影响不明显。提示CLEC2B可能通过调节淋巴细胞功能间接影响黑素细胞增殖和黑素合成,从而参与白癜风发病。

RNA干扰CLEC2B基因沉默对淋巴细胞可溶性白介素2受体mRNA表达的影响

目的探讨RNA干扰淋巴细胞中CLEC2B基因沉默后,对淋巴细胞增殖及其细胞因子可溶性白介素2受体(sIL-2R)mRNA表达的调节作用,揭示CLEC2B基因参与白癜风发病的免疫学机制。方法人Jurkat淋巴瘤细胞株细胞培养后,分别应用RNA干扰技术转染3条CLEC2B siRNA(沉默1组、沉默2组、沉默3组),转染scrambled siRNA(非沉默对照组)及不做任何处理(空白对照组)。应用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法分析CLEC2B基因沉默效率,MTT法检测CLEC2B基因沉默后淋巴细胞增殖率(A值),荧光定量PCR方法检测sIL-2R mRNA表达情况。结果转染CLEC2B siRNA后,各CLEC2B沉默组较非沉默对照组淋巴细胞CLEC2B mRNA表达下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。各CLEC2B沉默组siRNA序列对CLEC2B基因沉默效率不等,差异有统计学意义(P<0.01);其中沉默2组siRNA沉默效率最高,与沉默1组和沉默3组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。CLEC2B基因沉默后,空白对照组、非沉默对照组、CLEC2B沉默组淋巴细胞增殖率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。3组sIL-2R mRNA相对表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05);其中CLEC2B沉默组较非沉默对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CLEC2B基因表达沉默后可下调淋巴细胞sIL-2R mRNA的转录表达,提示CLEC2B可能通过调节淋巴细胞产生的细胞因子水平参与白癜风的免疫发病机制。

白癜风患者皮损CLEC2B mRNA及其蛋白表达

目的探讨白癜风患者皮损区CLEC2B(C-type lectin domain family 2,member B)mRNA表达水平及其蛋白的表达,明确CLEC2B基因表达的细胞定位。方法应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测白癜风患者与正常对照组皮损区中CLEC2B mRNA表达量,取CLEC2B转录表达明显增高的白癜风患者皮损组织,用免疫组织化学方法进行皮损区CLEC2B蛋白的定位表达。结果患者组皮损中CLEC2B mRNA表达量高于正常对照组(t=4.432,P<0.05),在白癜风皮肤组织真皮层的淋巴细胞中有CLEC2B蛋白阳性表达。结论 CLEC2B基因在白癜风皮损中高表达,且在真皮层淋巴细胞的细胞核中也有表达。

siRNA干扰CLEC2B基因沉默对黑素细胞的影响

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)诱导淋巴细胞中CLEC2B(C-type lectin domain family 2,member B)基因沉默后,其淋巴细胞上清液对黑素细胞增殖活性的影响,从而揭示CLEC2B基因参与白癜风发病的免疫学机制。方法选用Jurkat淋巴瘤细胞及B16黑素瘤细胞为研究对象,应用RNA干扰技术沉默淋巴细胞CLEC2B mRNA的表达,MTT法检测CLEC2B基因沉默后淋巴细胞增殖情况及其上清液作用后对黑素细胞增殖情况。结果CLEC2B基因沉默后淋巴细胞增殖无明显影响,CLEC2B基因沉默后淋巴细胞上清液对黑素细胞的抑制作用降低,黑素细胞存活率增加(P<0.05)。结论 CLEC2B基因表达下调后减弱对黑素细胞的抑制作用,提示CLEC2B基因影响黑素细胞增殖活性,从而参与白癜风发病。

白癜风患者CLEC2B mRNA差异表达与临床相关性研究

目的探讨CLEC2B（C—type lectin domain family 2，memberB）基因在白癜风发病中的作用。方法实时荧光定量PCR方法检测白癜风患者皮损区及外周血中CLEC2B mRNA表达，比较不同临床类型、病期、病程CLEC2BmRNA的差异表达。结果白癜风患者组皮损中，CLEC2BmRNA表达量高于健康对照组（两组表达量分别为1．21±0．03，1．00），差异有统计学意义（t=4．432，P〈0．05）。白癜风患者与健康对照组外周血CLEC2BmRNA表达量比较，差异无统计学意义（两组表达量分别为1．02±0．05，1．00；t=1．435，P〉0．05）。寻常型白癜风皮损组中，CLEC2BmRNA表达量高于节段型白癜风组（1．21±0．03，1．02±0．01），差异有统计学意义（t=5．330，P〈0．05）。不同病程白癜风患者皮损中，CLEC2BmRNA表达量比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。进展期白癜风患者组皮损中CLEC2BmRNA表达量高于稳定期患者组（1．25±0．05比1．08±0．03），差异有统计学意义（t=3．046，P〈0．05）。结论CLEC2BmRNA的差异表达可能参与白癜风的发病。