CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素瘤细胞B16的影响

目的将CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞,观察其上清液对黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性、黑素合成的影响,探讨CLEC2B基因在白癜风发病中的作用。方法培养人淋巴瘤细胞Jurkat细胞和小鼠黑素瘤细胞B16,采用脂质体介导的方法瞬时转染CLEC2B重组质粒入Jurkat细胞,半定量RT-PCR法鉴定CLEC2B基因过表达;将其细胞培养上清液作用于黑素瘤细胞48 h后,MTT法检测黑素瘤细胞的增殖情况,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性,氢氧化钠裂解法检测黑素含量。结果 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液作用后的黑素瘤细胞增殖比空载体组、正常对照组降低,差异有统计学意义(均P<0.05),CLEC2B过表达组黑素含量比空载体组、正常对照组减少,差异有统计学意义(均P<0.05),CLEC2B过表达组、空载体组、正常对照组之间的酪氨酸酶活性比较差异无统计学意义(均P>0.05),空载体组与正常对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 CLEC2B基因过表达的Jurkat细胞培养上清液对黑素细胞的增殖和黑素合成有一定的抑制作用,对酪氨酸酶活性影响不明显。提示CLEC2B可能通过调节淋巴细胞功能间接影响黑素细胞增殖和黑素合成,从而参与白癜风发病。

siRNA干扰CLEC2B基因沉默对黑素细胞的影响

目的探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)诱导淋巴细胞中CLEC2B(C-type lectin domain family 2,member B)基因沉默后,其淋巴细胞上清液对黑素细胞增殖活性的影响,从而揭示CLEC2B基因参与白癜风发病的免疫学机制。方法选用Jurkat淋巴瘤细胞及B16黑素瘤细胞为研究对象,应用RNA干扰技术沉默淋巴细胞CLEC2B mRNA的表达,MTT法检测CLEC2B基因沉默后淋巴细胞增殖情况及其上清液作用后对黑素细胞增殖情况。结果CLEC2B基因沉默后淋巴细胞增殖无明显影响,CLEC2B基因沉默后淋巴细胞上清液对黑素细胞的抑制作用降低,黑素细胞存活率增加(P<0.05)。结论 CLEC2B基因表达下调后减弱对黑素细胞的抑制作用,提示CLEC2B基因影响黑素细胞增殖活性,从而参与白癜风发病。