CLEC4M介导HCV感染人PBDC实验研究

目的通过对表达CLEC4M的CD14细胞与HCV结合来证实CLEC4M是介导HCV感染的特异性受体。方法应用磁珠分选出健康人的CD14+细胞,检测表达CLEC4M后将细胞共分4组,阳性对照组:CLEC4M+HCV RNA+血清;干扰组:CLEC4M+鼠抗人CLEC4M抗体+HCV RNA+血清,每组均与收集到的3份HCV阳性患者血清作用,阴性对照组:CLEC4M+正常人血清;空白对照组:CLEC4M+5%DMEM。干扰组在加入3组HCV RNA+血清之前,先分别加入CLEC4M抗体进行干预,其余3组滴入同体积PBS。培养24h后利用RT-PCR检测细胞表面结合的HCV RNA含量,培养48h后用免疫荧光法检测细胞与病毒结合情况。结果流式结果表明分离出的CD14细胞中CLEC4M阳性率高达80%以上。RT-PCR结果显示干扰组HCV RNA含量明显低于阳性对照组。免疫荧光可直观看到阳性对照组有大量绿色荧光,而干扰组只有很少的部分,空白对照组和阴性对照组无荧光。结论表达CLEC4M的CD14细胞可以与HCV结合,而病毒的结合可以被CLEC4M抗体竞争性抑制。

C型凝集素CLEC4M对HCVcc易感性的影响

目的利用HCV体外培养细胞模型,观察C型凝集素CLEC4M对于HCVcc易感性的影响。方法构建GV166-CLEC4M慢病毒表达载体,脂质体转染293T细胞,获取的慢病毒转染Huh7.5细胞,获得稳定过表达CLEC4M的Huh7.5细胞系(即Huh7.5-CLEC4M),Western印迹和RT-PCR检测CLEC4M的过表达情况。利用HCVcc病毒液感染过表达CLEC4M的Huh7.5细胞系,并设置单克隆抗体干扰组及甘露聚糖干扰组,检测CLEC4M对HCVcc感染性的变化。结果 Huh7.5细胞系获得稳定过表达的CLEC4M。Huh7.5-CLEC4M获得对HCVcc的高度易感性。经鼠抗人CLEC4M单克隆抗体和甘露聚糖干扰后,Huh7.5细胞的感染效率较前降低。结论 C型凝集素CLEC4M影响细胞对HCVcc的易感性,可能与HCV的嗜肝性有关。