CLIP170通过TGF-β通路抑制甲状腺乳头状癌的转移

目的:研究细胞质连接蛋白170(cytoplasmic linker protein 170,CLIP170)是否影响甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)细胞的转移和侵袭并阐明其机制。方法:通过GEO和TCGA数据分析CLIP170在PTC中的表达水平;通过慢病毒转染技术构建CLIP170敲减细胞,Transwell转移和侵袭实验评估其功能;通过免疫荧光观察CLIP170对细胞肌动蛋白结构的影响;以ELISA方法检测细胞培养基中转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)1的释放;通过免疫印迹和实时定量荧光PCR方法检测上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和TGF-β信号通路分子的表达量并最终在裸鼠肺转移模型中验证。结果:CLIP170在PTC中的表达量比在正常甲状腺组织中的表达量低。功能方面,CLIP170KD在体外和体内均显著增强了PTC细胞的转移;机制方面,CLIP170KD触发了TGF-β通路的激活,促进肿瘤细胞的迁移和侵袭。TGF-β的抑制剂有效抑制了TGF-β活性,并显著逆转CLIP170KD所诱导的肿瘤转移。结论:CLIP170有望成为一种缓解有转移倾向的PTC的治疗靶点。

Clip170和Clasp1在小鼠神经系统中的表达及在自噬中作用

目的探讨微管正端示踪蛋白Clip170和Clasp1在小鼠神经系统中表达分布以及在细胞自噬蛋白降解通路中的作用。方法以1.5个月龄C57BL/6J野生型小鼠为材料,使用蛋白印迹(Western blot)检测Clip170和Clasp1在小鼠眼、脑、脊髓和坐骨神经中表达情况,以HEK293细胞为材料,使用转染和Western blot法分别检测HEK293细胞中Clip170和Clasp1缺失对于自噬通路中关键蛋白的影响。结果Clip170和Clasp1在小鼠神经系统中表达广泛,且与脊髓相比,坐骨神经中两者含量均显著下降(P<0.05)。在HEK293细胞中敲减Clip170蛋白可引起使自噬通路中p62和LC3B-Ⅱ蛋白表达水平显著提高(P<0.05),而LC3B-Ⅰ蛋白含量未发生明显变化(P>0.05)。HEK293细胞中敲减Clasp1蛋白可引起使自噬通路中p62蛋白表达水平极显著下降(P<0.05),LC3B-Ⅱ蛋白显著提高,LC3B-Ⅰ蛋白含量未发生明显变化(P>0.05)。结论微管正端示踪蛋白Clip170和Clasp1在小鼠神经系统广泛表达,但具有组织区域差异性。Clip170和Clasp1含量下降可能通过破坏自噬小体的形成或运输引起自噬通路异常。