脾气虚大鼠心肌细胞线粒体Lon蛋白酶和ClpXP复合物表达的研究

目的:通过研究心肌细胞线粒体L o n蛋白酶和C l p X P复合物的表达,围绕线粒体未折叠蛋白反应(UPRmt)探讨脾病及心的可能机制。方法:16只雄性SD大鼠随机分为正常组和脾气虚证模型组(模型组);鼠尾动脉无创测压法测定血压;心脏彩超检查心脏功能;透射电镜观察心肌细胞线粒体形态;ELISA法检测三磷酸腺苷(ATP)和MDA水平,Western Blot法检测心肌细胞线粒体Lon蛋白酶和ClpXP复合物的表达。结果:与正常组比较,模型组心率、收缩压、舒张压、左室射血分数和左室短轴缩短率均下降(P<0.01),线粒体内可见致密颗粒,ATP水平下降(P<0.01),MDA含量升高(P<0.01),Lon蛋白酶和ClpX表达均升高(P<0.05,P<0.01),但ClpP表达变化不明显。结论:脾病及心的现代医学机制可能与心肌细胞UPRmt未充分启动所导致的线粒体蛋白失稳态有关。

脾气虚大鼠肝脏细胞线粒体蛋白质控的研究

目的:观察肝细胞线粒体结构和功能及其蛋白质控,探讨肝耐受脾气虚的可能机制。方法:16只SPF级雄性SD大鼠根据随机数字表法平均分成两组,即8只正常组(对照组)和8只脾气虚组(模型组)。透射电镜观察肝细胞线粒体结构,比色法和JC-1法分别检测肝组织ATP和肝细胞线粒体膜电位(membrane membrane potential,MMP),Western blot法检测肝细胞线粒体热休克蛋白(hot shock protein,HSP)70、Lon蛋白酶(Lon protease,LonP)以及酪蛋白裂解酶(caseinolytic protease,Clp)XP复合物等表达。结果:两组线粒体大量分布于细胞核附近,形态相似,均呈卵圆形,边缘清楚,内部致密,未见到明显异常变化。与正常组相比,模型组ATP和MMP水平均下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。与正常组相比,模型组HSP70、ClpX、ClpP表达均上升,LonP表达下降,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:肝耐受脾气虚的机制与肝细胞线粒体蛋白质控机制增强有关。

ssrA标签及其变体在细菌蛋白质降解中的研究与应用进展

在原核生物的基因表达过程中,核裂解或转录错误等事件的存在往往使转录所得mRNA截短,即3′端缺少终止密码子。因此以截短型mRNA为模板的翻译过程会使核糖体停滞于3′端,这种mRNA缺少3′终止密码子导致核糖体停滞的突变被称为No-Go突变。为使核糖体循环顺利进行,兼具tRNA和mRNA功能的tmRNA将被募集发生在停滞的3′端,为停滞的新生多肽C端加载被称为ssrA标签的短肽标记并以自带的终止密码子终止肽链合成,释放核糖体。ssrA标签作为Degron(降解决定子)会引导多肽降解,以确保维持细胞的蛋白稳定与合成能力。由于ssrA标签具有靶向蛋白降解的能力,因此该标签在生物工程领域得到了广泛的开发和应用。文章总结了ssrA标签的种类,介导蛋白降解的机制和突变体,展望了ssrA标签在生物工程中的应用前景,以期为进一步开发靶向蛋白降解系统提供参考。