美国CLSI抗菌药物敏感试验操作标准(2010年版)部分变更内容

2010年美国临床实验室标准化研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）更新了M100－S20文件，现将其中主要更新内容作简要介绍，供临床微生物学检验工作者在常规工作中参考。

应用CLSI EP5-A2文件评价生化检测系统的精密度性能

目的应用CLSIEP5-A2文件对生化检测系统检测的精密度性能进行评价,以确定其是否满足临床的需要。方法在全自动生化分析仪上,根据CLSIEP5-A2文件,用稳定的高低值实验样品对采用速率法和终点法检测的项目进行精密度试验,对其批内标准差(S批内)、批间标准差(S批间)、天间标准差(S天间)和总不精密度(S总)进行评价。结果检测系统检测常规生化项目的批内标准差为美国的临床实验室室间质量评估允许误差的1/4,天间标准差应为该允许误差的1/3,且小于厂商声明的精密度性能指标,两者差异无统计学意义(P>0.05)。说明由实验估计的总不精密度均可接受。结论精密度既是临床检验的方法评价,也是检测系统性能评价的重要指标之一。CLSIEP5-A2精密度性能评价方法能够较为严密地反映出自动生化分析仪的长期使用性能是否能符合日常常规工作的质量要求。

参照CLSI M38-A方案测定皮肤癣菌临床株对4种抗真菌药物的敏感性

目的测定并比较临床分离的皮肤癣菌对4种常用抗真菌药物的敏感性,探讨CLSIM38-A方案用于皮肤癣菌药敏试验的可行性。方法实验菌株为31株临床近期分离的皮肤癣菌。其中红色毛癣菌14株,须癣毛癣菌14株,犬小孢子菌1株,铁锈色小孢子菌1株,絮状表皮癣菌1株。4种抗真菌药物为益康唑、伊曲康唑、特比萘芬、伏立康唑。采用M38-A方案微量稀释法,并适当调整试验参数进行体外抗真菌药物敏感性试验。结果红色毛癣菌和须癣毛癣菌对以上4种药物的敏感性无明显差异。犬小孢子菌、铁锈色小孢子菌、絮状表皮癣菌对所有4种抗真菌药物的敏感性都低于红色毛癣菌和须癣毛癣菌。结论M38-A方案经过调整适用于皮肤癣菌药敏试验。

运用CLSIEP方案对SysmexCA系列全自动血凝仪进行性能验证

目的:对希森美康公司CA-7000、CA-1500型全自动血凝仪检测系统主要分析性能进行验证。方法:参照美国临床和实验室标准化协会(CLSI)的EP文件及相关文献有关检测系统性能验证文件EP15-A、EP6-A、EP-9A2、EP6-A、EP10-A的方法对选定检测项目的精密度、准确度、检测系统的比对、可报告范围、携带污染率进行评价。结果:希森美康CA-7000、CA-1500检测PT、APTT、Fbg的批内精密度、批间精密度、准确度、可报告范围、携带污染率均在允许范围内,CA-7000与CA-1500测定结果相关性良好。结论:该系列血凝仪的性能基本符合临床实验诊断学实验的要求,Fbg的可报告范围在找到合适样本的情况下要重新进行测定。

CLSI药物敏感性试验标准VET01-A4概述及更新要点

抗生素药物敏感性试验是进行细菌抗药性研究的基础。美国临床和实验室标准协会(CLSI)制定了药物敏感性试验方法和试验结果的判定标准,并授权笔者译为中文,供中国兽医药理学界参考。文章概述了2013年CLSI药物敏感性试验标准VET01-A4及其附表VET01-S2的主要内容,并对更新的要点进行了介绍。

CLSI EP23-A在新型冠状病毒核酸检测实验室风险管理中的应用

目的将美国临床和实验室标准化协会(CLSI)EP23-A应用于新型冠状病毒核酸检测实验室风险管理,以降低新型冠状病毒核酸检测过程中的潜在风险,提供更加准确、及时的检测结果。方法从人员、仪器、试剂、方法、环境等实验室关键要素中识别潜在风险,参考CLSI EP23-A风险矩阵,根据风险严重程度、风险发生频率进行危害程度分级,然后针对评估出来的高风险因素采用鱼骨图寻找要因,采取预防措施,降低风险。结果在新型冠状病毒核酸检测过程中评估出不可接受的高风险因素包括实验室污染导致结果假阳性及突发事件处置不当。通过加强人员培训、考核与监督,细化突发事件处置流程,定期实施应急演练等措施进一步控制,可降低新型冠状病毒核酸检测过程中的潜在风险。结论通过对新型冠状病毒核酸检测实验室进行风险评估与管理,有利于降低检测过程中存在的风险,持续提高新型冠状病毒核酸检测的质量。

用CLSI EP方案评价总胆红素试剂分析性能

目的通过应用CLSI EP方案分别对国产和进口总胆红素(TBil)试剂的分析性能评价,了解国产总胆红素试剂分析性能能否满足临床需要。方法在同一台全自动生化分析仪上,同时测定试剂准确度、精密度、最低检测限、线性范围、干扰试验、方法比对实验、稳定性观察等7项技术指标。结果两种试剂准确度测定,其相对偏差≤±10%;批间变异系数<4.0%;国产TBil试剂线性范围0.5～865.0μmol/L,进口试剂线性范围0.4～869.0μmol/L;国产TBil试剂的最低检测限为0.5μmol/L,进口试剂的最低检测限为0.4μmol/L;方法比对实验结果Y=1.0069X+0.9366,R2=0.9993;抗干扰能力无明显差异;试剂稳定性相近。结论国产总胆红素试剂与进口试剂的分析性能差异无统计学意义,能满足临床实验室的需要。

EUCAST和CLSI微量稀释法检测曲霉体外药物敏感试验差异比较

目的比较欧洲抗菌药物敏感试验委员会（European Committeeon Antimicrobial Susceptibility Testing，EUCAST）和美国临床实验室标准化协会（Clinicaland Laboratory Standards Institute，CLSI）微量稀释法检测曲霉体外药物敏感性的差异。方法分别用EUCAST方法和CLSI方法检测116株曲霉对两性霉素B、伏立康唑、伊曲康唑、卡？白芬净和米卡芬净的敏感性，比较两种方法的基本符合率、药敏符合率、极重大误差率和重大误差率。结果EUCAST方法和CLSI方法对116株曲霉药敏检测的基本符合率为96．3％～100％。两方法检测烟曲霉对伏立康唑的药敏符合率98．8％，重大误差为1．2％，极重大误差率为0。烟曲霉和黑曲霉对两性霉素B以及烟曲霉和黄曲霉对伊曲康唑的药敏符合率均为100％，重大误差率和极重大误差率均为0。结论EUCAST方法和CLSI方法对检测曲霉体外药物敏感性具有良好的一致性。

2011年CLSI M100-S21文件主要更新内容介绍

2011年1月美国临床和实验室标准化研究所(CLSI)出版了《抗菌药物敏感试验执行标准第二十一版信息增刊》(M100-S21),以取代M100-S20。现简要介绍第二十一版信息增刊更新内容。

CLSI、EUCAST和中国耐药判定标准概述

制定耐药判定标准的意义在于对药敏试验结果进行解释,以选择合适的药物和最佳的给药方案对动物进行治疗,是控制耐药性产生的重要手段。目前许多发达国家都成立了制定耐药判定标准的机构,其中最具影响力和权威的是美国临床和实验室标准协会以及欧盟药敏试验标准委员会两大机构。中国耐药性监测的研究起步较晚,主要借鉴美国临床和实验室标准协会所设立的耐药判定标准。2017年,在欧洲临床微生物和感染病学会和欧洲药敏试验委员会的支持下中国成立了华人药物敏感性试验委员会。近年来,在中国兽医药品监察所的带领下,各研究机构人员在耐药判定标准及耐药性监测方面也取得了突破性的进展,为控制中国抗菌药物耐药性的发展奠定了坚实的基础。本文首先介绍了耐药判定标准的定义和意义,为微生物研究者提供基本的理解;然后分别综述美国临床和实验室标准协会与欧盟药敏试验标准委员会的基本情况,并比较两者在兽用抗菌药物耐药判定标准制定上的差异;最后对中国兽用抗菌药物耐药性监测和耐药判定标准制定方面的成果进行分析总结。总体来说,中国在兽用抗菌药物耐药性控制方面处于稳步增长状态,已经制定的许多耐药判定标准对控制耐药性的发展具有重要意义。但仍有许多兽用抗菌药物缺乏相应的耐药判定标准,需要更多的研究者在未来找到更加快速、简便和准确的方法,不断填补、更新兽用抗菌药物的耐药判定标准。

2005年CLSI／NCCLS文件M100-S15主要更新内容介绍

美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的抗微生物药物敏感性试验操作方法和判断标准被世界上许多国家和地区所采用。2005年该委员会更名为临床实验室标准化研究所(Clinical and Labo- ratory Standards Institute,CLSI),考虑到大家的习惯问题,在过度时期暂称为CLSI/NCCLS。每年CLSI/ NCCLS都会根据研究资料对抗微生物药物敏感性试验执行标准信息增刊(M100文件)

CLSI新、旧判读标准对大肠埃希氏菌药敏结果的影响

目的探讨新、旧两种判读标准对大肠埃希菌药敏结果的影响,规范抗生素的使用。方法收集本院2011年11月至2013年6月住院及门诊感染患者送检标本中分离出的大肠埃希氏菌122株,纸片扩散法测定菌株对头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)的敏感性,美国临床实验室标准化研究所(CLSI)表型确证试验确定产ESBLs菌株,根据药物敏感性结果对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株和非产ESBLs菌株在S19和S20新旧折点下CAZ、CTX的敏感性以及ESBLs阳性菌株分布率进行分析。结果产ESBLs菌株CTX,非产ESBLs菌株CTX,CAZ应用S20和S19判断差异均无统计学意义,而CAZ药敏结果差异有统计学意义。结论在CLSI M100-S20规则下,体外药敏实验CTX、CAZ耐药率均有所提高,但实际报告时头孢类药物由完全耐药到部分敏感,这增加了头孢他啶等治疗临床产ESBLs菌株所致感染的用药机会。

Antimicrobial susceptibility of strains of Enterobacteriaceae isolated from bloodstream infections using current CLSI and EUCAST breakpoints

Understanding local susceptibility patterns is important when selecting antimicrobials for initial empirical antibiotic-therapy of bloodstream infections. Because the determination of susceptibility is dependent on the breakpoints used, the aim of the study was to compare the antimicrobial susceptibility results to different classes of antibiotics of 512 strains of Enterobacteriaceae (200 ESβL positive) isolated from bloodstream using CLSI 2013 and current EUCAST 2013 guidelines to evaluate the impact of break-point discrepancies. The results of the study showed that statistically significant discrepancies (p ≤ 0.001) were found for amoxicillin/clavulanic acid, piperacillin alone or with tazobac-tam, imipenem, meropenem, cefepime (only ESβL negative isolates), amikacin and gentamicin using current CLSI or EUCAST interpretive criteria. Further harmonization of CLSI and EUCAST breakpoints is warranted. This study could give useful information to physicians for managing bloodstream infections caused by Enterobacteriaceae.

参照CLSIEP方案评价直接胆红素试剂分析性能

目的通过应用CLSIEP方案分别对国产和进口直接胆红素（DBil）试剂分析性能进行评价，了解国产直接胆红素试剂分析性能能否满足临床需要。方法在同一台全自动生化分析仪上，同时测定试剂准确度、精密度、最低检测限、线性范围、干扰试验、方法比对实验、稳定性观察等7项技术指标。结果两种试剂准确度测定，其相对偏差≤±10％；批间变异系数小于4．0％；国产DBil试剂线性范围0．2—595．0umol／L，进口试剂线性范围-0．4—595．7umol／L；国产DBil试剂的最低检测限为0．4umoL／L，进口试剂的最低检测限为0．9umol／L；方法比对实验结果Y=0．997X＋5．2467，R^2=0．9996（浓度范围0.2—595．0umol／L）；抗干扰能力无明显差异；试剂稳定性相近。结论：国产直接胆红素试剂与进口试剂的分析性能无显著性差异，能满足临床实验室的需要。

基于CLSI-M43国际标准改良的Mycoview-AST试剂盒检测性能评估

目的基于美国临床标准化协会（clinical and laboratory standards institute，CLSI）M43国际标准改进的泌尿生殖道支原体Mycoview-AST试剂盒检测性能评估。方法以法国MYCOFAST revolution支原体试剂盒为比对标准，用CLSI—M43规定的质控株和有关指标及60例临床标本对新改进的试剂盒性能进行评估。结果Mycoview—AST试剂盒以质控菌株检测的药敏结果与MYCOFAST11 revolution试剂盒一致。60例临床标本，阴性标本37倒，解脲支原体（Uu）阳性16例，人型支原体（Mh）阳性5例，Uu与Mh均阳性的标本2例。两种试剂盒Uu和Mh的鉴定结果一致。23例阳性标本的药敏结果共161个，与进口比对试剂MYCOFAST。比对，154个结果符合，药敏结果符合率为95．6％（154／161）。结论基于CLSI—M43国际标准改进后的Mycoview-AST试剂盒检测性能与国际知名品牌MYCOFAST revolution试剂盒相当。

CLSI EP09c方案评价血气分析仪与血液分析仪检测血红蛋白和红细胞压积的一致性

目的 参照CLSI EP09c文件,比较2种不同检测原理的血气分析仪ABL800 Flex、GEM3500测量的血红蛋白(Hb)和红细胞压积(Hct)与XN-9000血液分析仪检测结果的一致性。方法 采用回顾性分析,收集ABL800 Flex与XN-9000患者配对数据379对,GEM3500配对数据448对,计算组内相关系数。选取最佳回归模型进行拟合,计算各参数在相应医学决定水平处的偏倚,Bland-Altman图分析平均偏倚。结果 ABL800 Flex与XN-9000的Hb和Hct配对数据组内相关系数分别为0.989 8、0.982 3,GEM3500分别为0.881 2和0.927 4,均为高度相关。与XN-9000相比,ABL800 Flex的Hb检测结果在医学决定水平45、105、170、230处的相对偏倚分别为-2.93%、-2.82%、-2.79%、-2.78%,平均相对偏倚为-2.9%;Hct在医学决定水平0.14、0.33、0.56、0.70处的相对偏倚分别为-1.00%、0.01%、0.31%、0.40%,平均相对偏倚为-0.02%。GEM3500的Hb检测结果在45、105、170、230处的相对偏倚分别为11.55%、-6.32%、-12.09%、-14.62%,平均相对偏倚为-9.2%;Hct在0.14、0.33、0.56、0.70处的相对偏倚分别为11.61%、-2.52%、-7.23%、-8.62%,平均相对偏倚为-4.3%。结论 ABL800 Flex与XN-9000的Hb和Hct检测结果具有良好的一致性,可以互换使用。GEM3500和XN-9000之间没有足够的可比性,应建立自己的参考范围。检测原理可能是影响血气分析仪与血液分析仪一致性的重要因素。