补骨脂素加长波紫外线诱导NB4细胞凋亡及对Fas/FasL基因表达影响的研究

目的探讨自中药补骨脂中提取的补骨脂素(psoralen,PSO)加长波紫外线(ultraviolet A,UVA)诱导人白血病细胞NB4凋亡及对Fas/FasL基因表达的影响。方法以NB4细胞为研究对象,采用流式细胞术、透射电镜、定量PCR等方法观察不同浓度的PSO,在不同时间的波长为360 nm的UVA照射下,细胞凋亡率、细胞超微结构以及细胞Fas/FasL基因、蛋白表达水平的变化。结果(1)补骨脂素加长波紫外线(PUVA)可诱导NB4细胞凋亡,当PSO浓度为10、20、40、80μg/mL时,UVA照射5 min的细胞凋亡率分别为(26.57±0.42)%、(30.67±0.11)%、(34.90±0.30)%、(24.63±0.38)%,凋亡率呈剂量-时间依赖性,两因素间有交互作用。(2)电镜下观察经PUVA处理后的NB4细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变特征。(3)PUVA可上调NB4细胞Fas基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,在基因水平两因素间有交互作用,在蛋白水平两因素无交互作用。(4)PUVA可下调NB4细胞FasL基因、蛋白的表达水平,并呈剂量-时间依赖性,且两因素间有交互作用。结论PUVA可诱导白血病细胞NB4发生凋亡,Fas/FasL系统是PUVA诱导NB4细胞发生凋亡的作用途径之一。

乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠CD_4^+/CD_8^+及Fas、FasL蛋白表达的实验研究

目的:观察乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠CD4+/CD8+及Fas、FasL蛋白表达的影响。方法:采用雌性BALB/c小鼠皮下多点注射小鼠透明带多肽,建立免疫性卵巢早衰模型。将造模成功的小鼠随机分为模型组、己烯雌酚组、六味地黄丸组、乌鳖颗粒大、中、小剂量组。另设正常组和佐剂组,共灌胃给药4周。实验末应用免疫组化法测定脾脏CD+4、CD8+,计算CD4+/CD8+的比值。应用免疫组化法测定卵巢Fas、FasL蛋白的表达。结果:模型组小鼠脾脏CD4+/CD8+比值明显高于正常组和佐剂组(P<0.05)。乌鳖颗粒各剂量组小鼠脾脏CD4+/CD8+比值明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。模型组小鼠卵巢Fas蛋白表达低于正常组,Fas-L蛋白表达明显高于正常组,卵巢Fas、Fas-L蛋白表达和Fas/Fas-L比值与正常组比较具有显著性差异(P<0.05,P<0.01)。乌鳖颗粒大剂量组和中剂量组小鼠Fas蛋白表达明显高于模型组,(P<0.05,P<0.01)。乌鳖颗粒各剂量组Fas-L蛋白表达明显低于模型组(P<0.05,P<0.01)。乌鳖颗粒大剂量组、中剂量组小鼠Fas/Fas-L比值与模型组比较具有显著性差异(P<0.01)。结论:乌鳖颗粒对免疫性卵巢早衰小鼠具有调节CD4+/CD8+比值和Fas/FasL系统的作用。

PUVA诱导NB4、K562细胞凋亡时对Fas、FasL表达的影响

目的:探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病细胞NB4、K562凋亡时对Fas、FasL表达的影响。方法:以NB4、K562细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察补骨脂中提取的PSO加波长为360 nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果:PSO,UVA照射及PUVA均可诱导NB4、K562细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。电镜下观察经PUVA处理后的NB4、K562细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变;PSO、UVA照射及PUVA均可上调NB4、K562细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者。结论:PUVA可诱导白血病细胞NB4、K562发生凋亡,其作用强于PSO及UVA照射,作用途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平。

PUVA诱导HL-60、NB4细胞凋亡时对Fas、FasL表达的影响

目的探讨补骨脂素(PSO)加长波紫外线(UVA)光化学疗法(PUVA)诱导人白血病细胞HL-60、NB4凋亡时对Fas、FasL表达的影响。方法以HL-60、NB4细胞为研究对象,以细胞凋亡率、电镜下细胞超微结构改变以及细胞Fas、FasL在基因、蛋白水平的表达为检测指标,观察中药补骨脂中提取的PSO加波长为360nm的UVA对人白血病细胞诱导凋亡的作用以及部分作用途径,并采用多因素方差分析法进行统计学处理。结果PSO、UVA照射及PUVA均可诱导HL-60、NB4细胞发生凋亡,PUVA的作用显著强于前两者。电镜下观察经PUVA处理后的HL-60、NB4细胞超微结构,可见明显的凋亡形态学改变。PSO、UVA照射及PUVA均可上调HL-60、NB4细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,下调FasL在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者。结论PUVA可诱导白血病细胞HL-60、NB4发生凋亡,作用强于PSO及UVA照射。PUVA诱导HL-60、NB4凋亡的途径之一为上调细胞Fas基因表达水平,下调FasL基因表达水平。

UVB致小鼠皮肤癌变中Fas/FasL,CD4及CD8的表达

目的通过窄谱中波紫外线(NB-UVB)照射诱发小鼠皮肤肿瘤,探讨Fas/FasL,CD4及CD8在Bowen病(BD)、光老化皮肤及正常小鼠皮肤中的表达情况,加深对皮肤肿瘤Fas/FasL凋亡途径和免疫逃逸机制及周围浸润淋巴细胞类型的认识。方法将42只健康的昆明种小鼠分为两组,慢性照光组(UVB)32只,正常组10只。应用免疫组化法检测其Fas/FasL,CD4及CD8的表达情况。结果成功制作了NB-UVB致小鼠皮肤癌模型。Fas表达光老化皮肤组高于正常鼠皮肤,BD组低于光老化组,FasL表达BD组和光老化组均高于正常鼠皮肤,BD组较光老化组增高,CD4在BD组较正常鼠皮肤及光老化皮肤组均降低,光老化组较正常鼠增高,CD8在BD组、光老化组较正常鼠增高,差异均有统计学意义(P均<0.05),而BD组和光老化组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 FasL在光老化皮肤中表达增高,在BD中进一步增高,支持了Fas/FasL系统启动细胞凋亡过程和肿瘤细胞通过表达FasL来逃避机体免疫监视的学说。BD组与正常皮肤组相比,CD4表达降低,CD8表达增高,这可能与BD是表皮内鳞状细胞癌且存在向侵袭性癌转变的倾向有关。

斑秃皮损中CD4、CD8、FasL和穿孔素表达的研究

目的:通过研究T淋巴细胞杀伤靶细胞的途径和机制,探讨T淋巴细胞在斑秃发病中的作用。方法:采用免疫组化ABC法,检测斑秃和正常组织皮损中CD4、CD8、FasL和穿孔素的表达。结果:在正常组织中CD4、CD8阳性表达,FasL和穿孔素阴性表达。在斑秃皮损中CD4、CD8、FasL均阳性表达,而穿孔素为阴性表达。结论:T淋巴细胞在斑秃发病中起着重要作用,T淋巴细胞可能通过Fas-FasL结合途径引起细胞凋亡,细胞凋亡参与了斑秃的发病。

大鼠CTLA4-FasL融合基因的克隆、表达及体外生物活性研究

目的表达并纯化CTLA4-FasL重组融合蛋白,鉴定其体外生物活性,为今后将该重组基因用于真核或者病毒载体递送系统的体内研究做准备。方法用RT-PCR方法从大鼠脾细胞中钓取CTLA4和FasL胞外区基因,搭建二者融合的重组基因,以pGEX-6P-1载体表达和纯化融合蛋白;去除GST标签,获得的目的蛋白经体外流式检测分析与细胞表面的相应配体B7和受体Fas分子的结合;CCK8检测系统分析其抑制T淋巴细胞的增殖作用。结果与结论成功调取了目的基因,获得并纯化了CTLA4-FasL目的蛋白,该蛋白既可与细胞表面的B7配体结合,又可与细胞表面的Fas受体结合,并能明显抑制T淋巴细胞的增殖,为今后动物体内研究奠定了基础。

共表达2个独立的抗关节炎分子TNFR-Fc和CTLA4-FasL重组表达系统的建立与鉴定

目的构建能同时独立表达双抗关节炎分子TNFR-Fc和CTLA4-FasL的重组腺相关病毒(AAV)载体,并对蛋白表达进行鉴定。方法应用furin-2A新型剪切策略,构建TNFR-Fc和CTLA4-FasL双融合基因重组AAV载体,体外转染293T细胞,收集转染上清,以ELISA和Western blot等方法检测目的蛋白的表达。结果成功构建双抗炎分子重组表达载体TFCF,在转染细胞上清中检测到目的蛋白TNFR-Fc和CTLA4-FasL的独立共表达。结论获得了可同时拮抗TNF和T细胞的新型双抗关节炎分子共表达系统,为今后动物体内研究奠定了基础。

COPD患者营养不良与T淋巴细胞凋亡及其表面Fas、FasL、Bcl-2表达的关系

目的探讨COPD患者营养不良对T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+T细胞凋亡及其细胞表面Fas、FasL、Bcl-2抗原表达的影响。方法选取COPD稳定期患者30例,正常对照组20例,流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群细胞凋亡率、及其表面Fas、FasL、Bcl-2抗原表达水平,测定体质指数、三头肌皮皱厚度等指标评估营养状况。用单因素方差分析进行统计。结果 :1.COPD患者外周血中CD4+的凋亡及其表面Fas、FasL抗原表达均较对照组增加,营养不良组又高于营养正常组,而其表面Bcl-2的抗原表达降低。COPD稳定期患者血清CD4+凋亡及其表面CD4+Fas、CD4+FasL的表达均与体质指数负相关,而CD4+Bcl-2与体质指数则呈正相关。结论营养不良促进COPD患者CD4+T淋巴细胞的凋亡,可能是通过Fas/FasL,Bcl-2发挥作用。

Fas,FasL,DR4,DR5,TRAIL在宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义

目的探讨Fas,FasL,DR4,DR5,TRAIL异常表达与宫颈上皮内瘤变发病关系。方法应用免疫组化法检测51例正常宫颈组织,48例CIN(cervical intraepithelial neoplasia)Ⅰ,40例CINⅡ,45例CINⅢ组织中Fas,FasL,DR4,DR5,TRAIL的表达,并以显微镜定位表达位置,以Ki-67阳性细胞计数增生细胞数。结果增殖和凋亡细胞百分率随CIN程度加重而升高,正常宫颈组织和CINⅠ组织中FasL,DR4,DR5和TRAIL主要表达于基底层细胞及基底旁层细胞,Fas主要表达于细胞表层,尤其在分化良的细胞表层,并随着CIN程度增加Fas表达减少;CINⅢ组织中FasL,DR4,DR5和TRAIL表达遍及整个细胞;死亡受体或死亡配体的表达与细胞增殖或凋亡的百分率无密切关联。结论在宫颈上皮内瘤变演变至宫颈癌的过程中,Fas的表达缺失及FasL,DR4,DR5和TRAIL的表达异常可能是宫颈上皮内瘤变致癌的功能性因素。DR4和DR5过度表达提示其可能是药物治疗宫颈癌的靶点。

CTLA4.FasL免疫抑制效应及对肝前体细胞增殖分化潜能的影响

目的探讨融合蛋白CTLA4.FasL对肝前体细胞(LEPCs)增殖分化潜能的影响及抑制异种排斥反应的效应。方法克隆CTLA4.FasL基因,构建携带CTLA4.FasL基因与红色荧光蛋白(mCherry)双顺反子结构的重组慢病毒载体Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry。优化慢病毒感染LEPCs的条件,建立高表达CTLA4.FasL的LEPCs,荧光显微镜观察mCherry的表达,Western blot检测CTLA4.FasL的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定细胞培养上清中CTLA4.FasL的浓度,水溶性四氮唑(WST-1)法检测细胞的增殖活性,Real time PCR(RT-PCR)检测干细胞相关基因CK19和c-Kit mRNA的表达,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)掺入法测定CTLA4.FasL-LEPCs在异种混合淋巴细胞培养体系中对大鼠淋巴细胞增殖的抑制作用。结果构建重组慢病毒载体Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry,病毒滴度为2×108 TU/mL。在感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10,聚凝胺质量浓度是5μg/mL时,感染效率约90%。Western blot证实了CTLA4.FasL的表达,在细胞培养上清中其质量浓度约为(0.72±0.10)μg/mL。CTLA4.FasL-LEPCs细胞增殖活性未受到影响,CK19和c-Kit基因mRNA表达水平无变化。CTLA4.FasL-LEPCs细胞可显著抑制大鼠淋巴细胞的增殖(P<0.05)。结论构建成功的重组慢病毒载体Lv-CTLA4.FasL-IRES-mCherry可介导CTLA4.FasL基因在LEPCs中高效表达;CTLA4.FasL可有效地抑制异种排斥反应,同时不损害LEPCs增殖活性和分化潜能。

IgG4乔本甲状腺炎中TRAIL、FasL的表达及临床病理意义

目的探究IgG4乔本甲状腺炎(IgG4Hashimoto's thyroiditis,IgG4HT)的临床、病理、血清学特征,分析血清TRAIL和/或FasL浓度与IgG4HT的临床、病理特征的相关性。方法采用免疫组化检测46例HT组织中的IgG^+、IgG4^+浆细胞,化学发光法及酶联免疫吸附测定法分别检测患者术前血清TgAb,TPOAb和TRAIL、FasL的浓度,并进行分析。结果依据IgG4+浆细胞>20/HPF、IgG4^+/IgG^+浆细胞>30%的诊断标准,HT组中11例(23.9%)为IgG4 HT。IgG4 HT较非IgG4HT具有更显著的甲状腺纤维化(P=0.006),更易发生亚临床甲状腺功能减退(P=0.02),血清TPOAb水平较低(P<0.001),FasL浓度较高(P<0.001);血清FasL浓度与IgG4HT甲状腺纤维化程度呈正相关(r=0.620,P=0.042),与甲状腺功能状态呈负相关(r=-0.841,P=0.001)。结论 IgG4HT为更具破坏性的乔本甲状腺炎亚型,FasL可能在甲状腺功能减退进程中发挥作用。

CTLA4.FasL促进异种肝卵圆细胞在大鼠脾脏的定植

背景:CTLA4.FasL可有效抑制同种反应性T淋巴细胞及自身反应性T淋巴细胞,但CTLA4.FasL在异种肝卵圆细胞经脾移植中对异种反应性T淋巴细胞的抑制作用还不明确。目的:研究CTLA4.FasL对异种反应性淋巴细胞增殖的作用,监测CTLA4.FasL修饰的小鼠肝卵圆细胞(CTLA4.FasL-肝卵圆细胞)在大鼠脾脏内的存活与定植。方法:①于小鼠肝卵圆细胞悬液中,加入携带CTLA4.FasL融合基因的重组慢病毒载体Lv/CTLA4.FasL和聚凝胺进行感染,以未感染慢病毒的肝卵圆细胞和感染空白慢病毒-肝卵圆细胞为对照;在荧光显微镜下观察肝卵圆细胞的活力和红色荧光蛋白慢病毒载体的表达;②对行2/3肝切除的SD大鼠分别经脾移植CTLA4.FasL-肝卵圆细胞、空白慢病毒-肝卵圆细胞、肝卵圆细胞和PBS(不含肝卵圆细胞),分别于肝切除术后1,5,14和21 d,采用ELISA法测定大鼠血清CTLA4.FasL浓度,取受体大鼠脾脏进行CK-19的免疫组化检测;③以C57BL/6小鼠淋巴细胞作为刺激细胞,以SD大鼠淋巴细胞作为反应细胞;在混合淋巴细胞反应中,分别接种CTLA4.FasL-肝卵圆细胞,空白慢病毒-肝卵圆细胞及肝卵圆细胞,或分别加入CTLA4.FasL-肝卵圆细胞(质量浓度分为10,50和100μg/L)、空白慢病毒-肝卵圆细胞及肝卵圆细胞培养上清液,培养96 h后,用5-Brdu法测定各组大鼠淋巴细胞的增殖情况。结果与结论:①在异种混合淋巴细胞培养体系中,CTLA4.FasL-肝卵圆细胞及培养上清均能有效抑制大鼠淋巴细胞的增殖;②CTLA4.FasL-肝卵圆细胞移植受体大鼠的脾脏淋巴细胞对小鼠淋巴细胞低免疫应答,而空白慢病毒-肝卵圆细胞和肝卵圆细胞移植受体大鼠来源的脾细胞则表现出强应答;③CTLA4.FasL-肝卵圆细胞组移植后21 d大鼠脾脏实质内可见CK-19阳性细胞,而在PBS组、肝卵圆细胞组和空白慢病毒-肝卵圆细胞组术后21 d未见CK-19阳性细胞;④结果说明,CTLA4.FasL可有效抑制异种反应性淋巴细胞的增殖,促进小鼠肝卵圆细胞在大鼠脾实质内的存活及定植。

B7-H4及Fas、FasL与宫颈癌免疫逃逸机制的关系

目的:检测免疫共刺激分子B7-H4及Fas、FasL在不同宫颈组织中的表达,研究三者的异常表达与宫颈癌免疫逃逸机制的关系。方法:选择陕西省肿瘤医院病理科2014-2018年的石蜡包埋标本162例,采用免疫组织化学方法检测20例正常宫颈、30例宫颈上皮内瘤变(CIN)和112例Ⅰ期-Ⅳ期宫颈癌组织中B7-H4及Fas、FasL的表达水平。结果:B7-H4在正常宫颈组、CIN组、宫颈癌组的阳性表达率分别为0、20.0%、47.32%,两两相比,具有显著性差异(P<0.05)。在112例宫颈癌病例中FIGO临床分期Ⅰ期至Ⅳ期各期别宫颈癌组织B7-H4的阳表达率分别为16.67%、43.18%、70.83%、85.71%,各组间相比差异具有统计学意义。正常对照组Fas的阳性表达率是85.00%,CIN组43.33%,宫颈癌组41.96%,正常组与CIN、正常组与宫颈癌组相比差异均具有统计学意义(P<0.05),CIN组与宫颈癌组相比,无明显差异(P>0.05)。FasL的阳性表达率在正常组为20.00%,CIN组为50.00%,宫颈癌组为56.25%,正常组与CIN、宫颈癌组比较,差异具有统计学意义(P<0.05),CIN组与宫颈癌组比较无显著差异;B7-H4阳性宫颈癌组Fas阳性表达率28.30%明显较B7-H4阴性宫颈癌组Fas阳性表达率54.24%低,差异具有统计学意义(P<0.05);而B7-H4阳性宫颈癌组FasL阳性表达率79.25%明显高于B7-H4阴性宫颈癌组FasL阳性表达率35.59%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:负性免疫共刺激分子B7-H4和Fas、FasL凋亡蛋白在宫颈癌的发生、进展中起到了重要作用,其协同作用可能为宫颈癌细胞逃逸机体免疫的机制之一。

华蟾素诱导NB4细胞凋亡及其作用机制

目的研究华蟾素(cinobufagin)对人早幼粒白血病细胞株NB4的诱导凋亡作用,并探讨可能的分子机制。方法通过细胞计数观察华蟾素对细胞的生长抑制作用,荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变,DNA凝胶电泳观察DNA的片段化改变,流式细胞术定量分析细胞凋亡。免疫荧光结合流式细胞术检测bcl-2表达、半定量RT-PCR检测Fas和FasL的表达。结果与对照组相比,1：100～1：25浓度的华蟾素能明显抑制NB4细胞生长。经华蟾素作用后,NB4细胞出现凋亡典型的形态学改变,核浓聚、核碎裂、凋亡小体形成；DNA电泳出现凋亡特有的“梯子”条带；流式细胞术也证实凋亡的存在。在经1：100、1：50、1：25浓度的华蟾素作用2d后,细胞凋亡率分别为12．49％、18．53％、37．76％。凋亡细胞的bd-2的表达下调,Fas表达上调,FasL表达无变化。结论华蟾素能抑制NB4生长并诱导凋亡,可能是通过下调bcl-2的表达,增加Fas的表达来实现。

CD40/CD40L交联在CD4^+ T细胞诱导肿瘤细胞凋亡中的机制研究

目的:探讨CD40/CD40L交联在CIK细胞中CD4+T细胞(CD4+CIK)诱导肿瘤细胞凋亡中的作用机制。方法:体外扩增CIK细胞并纯化CD4+T细胞亚群,AnnexinV染色法观察CD4+CIK诱导肿瘤细胞凋亡的作用;半定量PCR、流式细胞法及ELISA法比较CD4+CIK激活前后CD40L的表达变化;将转染质粒pIRES2-EGFP-sCD40L的CHO细胞(CHO-sCD40L)与乳腺癌细胞T47D共孵育,监测24小时后其表面分子Fas的表达变化及对Fas介导凋亡的敏感性。结果:CD4+CIK细胞可诱导肿瘤细胞凋亡,凋亡率随孵育时间和效靶比的升高而增加,且肿瘤细胞表面分子Fas水平升高,可从1.98%±0.23%升高到31.62%±7.07%;CD4+CIK细胞被激活后,CD40L表达水平均较激活前明显增加;成功转染的CHO-sCD40L细胞与T47D共培养后,T47D表面分子Fas可被诱导升高,加入CH-1124小时后可观察到明显T47D细胞的凋亡。结论:CD4+CIK可能通过CD40/CD40L交联提升肿瘤细胞表面功能性Fas表达来诱导其凋亡。

甘草查尔酮A衍生物对结肠癌细胞增殖及凋亡的影响

探讨甘草查尔酮A衍生物4′-甲基-2,4-二羟基查尔酮对结肠癌细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用,并分析相关作用机制。通过体外培养人结肠癌HT29、HCT116、COLO205和SW480细胞,取对数生长期各细胞,随机分为对照组和10、20、40μmol·L-1 4′-甲基-2,4-二羟基查尔酮试验组,用MTT法检测细胞增殖抑制率,并确定IC50。选取抑制效果最好的结肠癌细胞,利用Hoechst 33258荧光检测及流式细胞术检测细胞凋亡情况;利用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Fas、FasL、Caspase-8的蛋白表达水平。结果表明:与空白组相比,药物组各浓度均可引起结肠癌细胞的增殖抑制作用(P<0.01,P<0.05),其中对HCT116的抑制效果最好(IC50为14.24μmol·L-1)。Hoechst 33258荧光和流式细胞术检测结果显示,随给药浓度增高,HCT116细胞凋亡逐渐增多(P<0.05),并可引起Fas、FasL和Caspase-8的蛋白表达增多(P<0.05)。说明4′-甲基-2,4-二羟基查尔酮可抑制结肠癌细胞增殖并诱导凋亡发生,其作用机制与上调Fas/FasL通路蛋白表达水平有关。

CD4^+ CD25^- T细胞凋亡机制的研究

目的:探讨CD4+CD25-T细胞AICD发生的机制。方法:磁性细胞分离器(MACS)分离CD4+CD25-T细胞。以CD3/CD28单克隆抗体活化BALB/c小鼠CD4+CD25-T细胞或以OVA323-339肽、抗原递呈细胞活化DO11.10小鼠CD4+CD25-T细胞两种方式建立AICD模型。基因芯片检测CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞凋亡相关基因的表达。流式细胞仪检测细胞的凋亡率。并观察FasL中和抗体、TRAIL中和抗体及zVAD-fmk对CD4+CD25-T细胞凋亡的影响。结果:MACS成功分离CD4+CD25-T细胞,纯度可达98%。建立了CD3/CD28抗体以及OVA特异性抗原活化的CD4+CD25-T细胞AICD模型,CD4+CD25-T细胞凋亡率达35%~40%。基因芯片分析发现CD4+CD25-T细胞相对高表达TRAIL、FAS,而CD4+CD25-T细胞相对高表达DR5、FasL。FasL、TRAIL中和抗体及zVAD-fmk可明显抑制CD4+CD25+T细胞的凋亡。结论:FasL、TRAIL及其它凋亡相关分子可能参与了CD4+CD25-T细胞的凋亡。

不同活化系统对CD4^+T细胞凋亡诱导配体表达的影响

目的 :探讨不同活化系统对CD4 + T细胞凋亡诱导配体在细胞内和膜表面表达的影响 .方法 :分别以PMA、PHA、SEB和单向混合淋巴细胞反应 (MLR)刺激PBMC ,以免疫荧光染色结合三色流式细胞术分析比较刺激前后的CD4 + T细胞中 ,3种主要的凋亡诱导配体TRAIL、FasL和TNF α在细胞内和膜表面表达的变化 .结果 :①FasL在静止CD4 + T细胞表面的表达基本为阴性 ,PMA和PHA上调其表达 ;FasL在静止CD4 + T细胞内有一定程度表达 ,PMA、PHA和MLR下调其在胞内的表达 .②TRAIL在静止CD4 + T细胞表面几乎不表达 ,SEB微弱上调其表达 ;TRAIL在静止CD4 + T细胞胞内有低水平表达 ,SEB和MLR微弱上调其表达 ,PHA则下调其表达 .③TNF α在静止CD4 + T细胞表面几乎不表达 ,PMA和PHA对其表达有一定上调作用 ;TNF α静止CD4 + T细胞胞内有一定水平表达 ,SEB和MLR明显上调其表达 .结论 :FasL、TRAIL和TNF α都是Th细胞重要的效应分子 。

8例B细胞淋巴瘤的T细胞基因CD4 V4突变及其相关蛋白的表达

【目的】检测B细胞淋巴瘤组织中T细胞的CD4V4基因突变情况及其相应病例的Fas/FasL、CD4、bcl 2和CyclinD1蛋白表达特征。【方法】PCR SSCP技术筛选检测 5 6例B细胞淋巴瘤CD4分子的V4外显子突变状况。用免疫组化方法检测有突变的B细胞淋巴瘤组织中L2 6 ,UCHL1,CD3,Fas ,FasL ,bcl 2和CyclinD1蛋白表达情况。【结果】 8例 / 5 6例(14 2 % )T细胞CD4V4外显子有变异。其中小淋巴细胞性淋巴瘤 (smalllymphocytelymphoma,SLL)和淋巴母细胞性淋巴瘤(lymphoblasticlymphoma ,LBL)的Fas,FasL和CD4蛋白均为弱或无表达 ;滤泡性淋巴瘤 (follicularlymphoma ,FL) 3项均强表达 ;3例弥漫性大B细胞淋巴瘤 (diffuselargeBcelllymphoma ,DLBL)和 1例套细胞淋巴瘤 (mantlecelllymphoma ,MCL)Fas和FasL强表达 ,CD4无或弱表达。Fas和FasL双强表达的 4例 ,均有bcl 2和 /或CyclinD1过表达。【结论】B细胞淋巴瘤中CD4V4基因有突变 ,并提示这种突变与细胞死亡和细胞周期调控异常有关。