苦瓜几丁质酶基因的克隆、表达及酶学特性分析

采用一步法逆转录聚合酶链反应（RT—PCR），以苦瓜幼叶为材料克隆几丁质酶基因的cDNA序列，序列分析表明其包含了基因完整的编码序列，编码由333个氨基酸组成的几丁质酶，对所克隆的基因进行了原核表达和纯化．纯化的几丁质酶具有分解几丁质的生物活性．当底物质量浓度在100～400mg·L^-1时，几丁质酶分解底物的能力随底物浓度增加而增大；大于400mg·L^-1时，几丁质酶分解底物的能力反而降低；当底物质量浓度固定时，几丁质酶分解底物的量随反应时间延长而增多．苦瓜几丁质酶基因的克隆和表达将为研究其结构和生物学功能奠定基础．

羧甲基壳多糖毒理学研究

羧甲基壳多糖的毒理学研究,包括急性皮肤毒性、急性经口毒性、长期经口毒性。研究结果表明羧甲基壳多糖属安全无毒物质。对小白鼠急性皮肤毒性LD_(50)>2200mg/kg,急性经口毒性LD_(50)>5001mg/kg长期经口毒性实验,采用高、中、低3个剂量组,对大白鼠体重增长百分率、血象、内脏外观、肝肾功能及肝、肾组织学检查,均未发现异常。

葡萄几丁质酶基因在毕赤酵母中的表达及其生物活性研究

采用一步法逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR),以葡萄幼叶为材料克隆几丁质酶基因的cDNA序列,序列分析表明,其包含基因完整的编码序列,编码由314个氨基酸组成的几丁质酶,通过抑菌试验证明,所纯化的几丁质酶对尖孢镰刀菌菌丝生长有抑制作用,同时用水解CM-chitin-RBV的方法测定纯化的几丁质酶活性,在37℃,pH 5时分解几丁质的比活力为0.78△A 550/(μg.h),而该酶的粗提物的比活力为0.21△A 550/(μg.h)。

羧甲基壳聚糖和羧甲基甲壳素的生物学性质研究和比较

制备并纯化出了医用级羧化度为103．14％、脱乙酰度为97．18％的羧甲基壳聚糖和羧化度为96．37％的羧甲基甲壳素，对其对成纤维细胞生长作用和体内外可降解性、生物相容性进行了研究。结果表明，两种多糖均能不同程度地促进成纤维细胞的生长，其中以100μg／ml的羧甲基壳聚糖效果最好。体内外降解实验表明二者均具有良好的可降解性和生物相容性，其中羧甲基甲壳素降解的速度相对较快，而羧甲基壳聚糖的生物相容性更好，在体内降解7d后，已无明显炎症反应。

稻纵卷叶螟几丁质合成酶及合成通路相关酶基因的鉴定及表达分析

【目的】稻纵卷叶螟Cnaphalocrocis medinalis(Guenee)是水稻上的四大害虫之一,危害较为严重,近年来以几丁质合成和代谢过程作为害虫防治的标靶研究已成为热点。为阐明几丁质合成酶及合成通路上关键酶的作用,本研究开展了对稻纵卷叶螟几丁质合成酶及合成相关通路上关键酶的克隆及时空表达分析。【方法】本研究基于稻纵卷叶螟转录组,结合PCR及RACE技术,克隆了几丁质合成酶代谢通路上的4条基因的c DNA全长;利用生物信息学软件对序列进行结构预测、序列比对和进化分析;采用实时定量PCR技术研究了4条基因在不同虫态和幼虫的不同组织中的表达情况。【结果】获得了2条几丁质合成酶序列及2条合成通路上的基因序列,包括几丁质合成酶A(Chitin synthase A,CHSA),几丁质合成酶B(Chitin synthase B,CHSB),N-乙酰葡糖胺磷酸变位酶(Phosphoacetylglucosamine mutase,PGM和UDP-N-乙酰葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase,UAP),并分别命名为Cm CHSA、Cm CHSB、Cm PGM和Cm UAP;序列分析显示Cm CHSA序列全长4 868 bp,编码1 564个氨基酸。Cm CHSB序列全长4 651 bp,编码1 525个氨基酸。Cm PGM全长1 934 bp,编码548个氨基酸。Cm UAP序列全长1 837 bp,编码487个氨基酸。实时定量研究表明,Cm UAP和Cm PGM在血淋巴中表达量最高,Cm CHSA在头部和表皮中表达量较高,而Cm CHSB在中肠中表达量最高。【结论】本研究得到了稻纵卷叶螟几丁质合成路径的4个关键酶基因c DNA全长,它们在稻纵卷叶螟的不同组织和虫态中呈现了差异显著的时空表达,本文为进一步探究稻纵卷叶螟的几丁质合成酶的生理功能和几丁质的合成代谢途径奠定了基础。