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特异识别HIV-1序列的锌指蛋白的表达纯化及其在Biacore CM-5芯片上的固定
1
作者
刘娟
赵兴卉
+2 位作者
蒋世卫
朱旭东
黄培堂
《生物技术通讯》
CAS
2007年第3期437-440,共4页
目的:为了更好地利用Biacore 3000研究锌指与核酸的相互作用,将特异性识别HIV-15′端一段保守序列的三锌指蛋白固定在CM-5芯片上。方法:将特异性识别HIV-15′端一段保守序列5′-CTGTGTTTG-3′的三锌指基因克隆到表达载体pET-22b(+)中,...
目的:为了更好地利用Biacore 3000研究锌指与核酸的相互作用,将特异性识别HIV-15′端一段保守序列的三锌指蛋白固定在CM-5芯片上。方法:将特异性识别HIV-15′端一段保守序列5′-CTGTGTTTG-3′的三锌指基因克隆到表达载体pET-22b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达重组三锌指蛋白,超声碎菌进行SDS-PAGE分析;包涵体形式的表达产物用盐酸胍溶解后,经一步凝胶柱复性并纯化;随后摸索适宜固定的pH值并通过化学方法进行固定。结果:表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在于超声沉淀中,纯化及柱复性后的蛋白纯度为98.8%,并在CM-5芯片上成功固定。结论:本研究为利用Biacore实时定量研究锌指蛋白与其识别DNA的相互作用进行了尝试。
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关键词
锌指
HIV-1
包涵体
BIACORE
3000
cm-5芯片
下载PDF
职称材料
题名
特异识别HIV-1序列的锌指蛋白的表达纯化及其在Biacore CM-5芯片上的固定
1
作者
刘娟
赵兴卉
蒋世卫
朱旭东
黄培堂
机构
军事医学科学院生物工程研究所
出处
《生物技术通讯》
CAS
2007年第3期437-440,共4页
文摘
目的:为了更好地利用Biacore 3000研究锌指与核酸的相互作用,将特异性识别HIV-15′端一段保守序列的三锌指蛋白固定在CM-5芯片上。方法:将特异性识别HIV-15′端一段保守序列5′-CTGTGTTTG-3′的三锌指基因克隆到表达载体pET-22b(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达重组三锌指蛋白,超声碎菌进行SDS-PAGE分析;包涵体形式的表达产物用盐酸胍溶解后,经一步凝胶柱复性并纯化;随后摸索适宜固定的pH值并通过化学方法进行固定。结果:表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在于超声沉淀中,纯化及柱复性后的蛋白纯度为98.8%,并在CM-5芯片上成功固定。结论:本研究为利用Biacore实时定量研究锌指蛋白与其识别DNA的相互作用进行了尝试。
关键词
锌指
HIV-1
包涵体
BIACORE
3000
cm-5芯片
Keywords
zinc finger
HIV-1
inclusion body
Biacore 3000
sensor chip
cm-
5
分类号
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
特异识别HIV-1序列的锌指蛋白的表达纯化及其在Biacore CM-5芯片上的固定
刘娟
赵兴卉
蒋世卫
朱旭东
黄培堂
《生物技术通讯》
CAS
2007
0
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职称材料
已选择
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