羧甲基壳聚糖膜对皮肤成纤维细胞相容性研究

通过玻璃流延法制备不同分子质量的壳聚糖及羧甲基壳聚糖膜 ,以体外培养的人皮肤成纤维细胞作为对象 ,利用膜的浸渍液培养及膜表面直接培养法研究比较了两种多糖膜的细胞相容性 .实验发现两种多糖膜的浸渍液对细胞均无毒性效应 ,生物安全性是小分子质量膜好于大分子质量膜 ,羧甲基壳聚糖膜好于壳聚糖膜 .皮肤成纤维细胞在壳聚糖膜上的生长受到抑制 ,生长一段时间后细胞有聚集和脱落现象 ,而羧甲基壳聚糖膜上细胞能很好地贴附、生长 ,没有聚集和脱落现象 .

不同分子量羧甲基壳聚糖的制备及其对皮肤成纤维细胞和角质形成细胞生长的影响

本实验将高分子量壳聚糖通过酸水解法和氧化法降解成不同分子量,然后将其羧甲基化制备成相应不同分子量的羧甲基壳聚糖。分别以bFGF和EGF为对照,通过显微观察法和MTT细胞计数法研究不同分子量的羧甲基壳聚糖对小鼠皮肤成纤维细胞和人皮肤表皮角质形成细胞形态及细胞生长的影响。实验结果表明:不同分子量的羧甲基壳聚糖在浓度为1～1 000 ppm时对成纤维细胞和表皮角质形成细胞生长均有促进作用,在浓度为100 ppm时促进作用最强;其促进作用随着分子量的减小而增强,分子量为3 KD左右的羧甲基壳聚糖对成纤维细胞和表皮角质形成细胞生长促进作用最为显著,分别与bFGF和EGF促生长作用基本相当。

羧甲基壳多糖毒理学研究

羧甲基壳多糖的毒理学研究,包括急性皮肤毒性、急性经口毒性、长期经口毒性。研究结果表明羧甲基壳多糖属安全无毒物质。对小白鼠急性皮肤毒性LD_(50)>2200mg/kg,急性经口毒性LD_(50)>5001mg/kg长期经口毒性实验,采用高、中、低3个剂量组,对大白鼠体重增长百分率、血象、内脏外观、肝肾功能及肝、肾组织学检查,均未发现异常。

壳聚糖-羧甲基壳聚糖复合膜的研制及其生物相容性评价

壳聚糖膜降解较慢[1] ,为了加快其降解速度 ,研制了壳聚糖 羧甲基壳聚糖复合膜 (以下简称复合膜 )并进行了生物学评价。结果表明 ,该复合膜具有很好的生物相容性 ,可以满足体内植入膜的基本要求。

羧甲基壳聚糖中氨基葡萄糖含量测定方法的研究

以乙酰丙酮试剂结合分光光度法和以盐酸氨基葡萄糖为对照品 ,确定羧甲基壳聚糖的氨基葡萄糖含量测定方法。羧甲基壳聚糖在 6mol/LHCl、12 0℃条件下水解 2 .5h ,羧甲基壳聚糖水解样品溶液 ,效果较好 ;盐酸氨基葡萄糖对照品溶液和羧甲基壳聚糖水解样品溶液中的氨基葡萄糖与乙酰丙酮试剂进行定量反应 ,使溶液呈色 ,采用分光光度法进行定量分析 ,两者最大光吸收波长均为 5 2 5nm ,线性关系良好 ;该方法对氨基葡萄糖有较好的专属性、精密度和稳定性。可用于羧甲基壳聚糖的氨基葡萄糖定量分析。

羧甲基壳聚糖、盐酸氨基葡萄糖及N-乙酰氨基葡萄糖对大鼠胰岛细胞生长及胰岛素分泌量的影响

通过胶原酶消化法获得大鼠胰岛单层细胞 ,并用转板以及碘乙酸处理的方法除去其中的成纤维细胞 ,得到比较纯的胰岛内分泌细胞 ,以此为材料研究了羧甲基壳聚糖、盐酸氨基葡萄糖、N 乙酰氨基葡萄糖对大鼠胰岛细胞生长和胰岛素释放的影响。实验结果表明 ,羧甲基壳聚糖、盐酸氨基葡萄糖、N 乙酰氨基葡萄糖均能够促进大鼠胰岛细胞的生长。采用放射免疫法测定培养的胰岛细胞分泌胰岛素含量 ,结果表明 ,羧甲基壳聚糖具有刺激大鼠胰岛细胞胰岛素释放的作用。

改性明胶膜的制备及其力学性能探讨

分别研究了羧甲基壳聚糖、交联剂和甘油等对明胶膜的改性问题,对改性膜的断裂强度、断裂伸长率进行了测试,并通过扫描电镜对改性膜截面进行了观测．结果表明,羧甲基壳聚糖、交联剂和甘油的加入能有效地改善明胶膜的机械性能,截面的电镜照片表明羧甲基壳聚糖和明胶具有很好的相容性．

6-O-羧甲基壳多糖的细胞毒性效应研究

采用溶血试验和细胞毒性试验研究6 -O-羧甲基壳多糖的细胞毒性效应，结果表明：1% 浓度的6-O-羧甲基壳多糖对红细胞溶 血率小于5%，说明该材料无溶血现象。以手术缝合线和500μg/mL的苯酚为对照研究不同分 子量的6-O-羧甲基壳多糖分别在1000μg/mL和2000μg/mL浓度下对大白鼠皮肤成纤维细胞 生长的影响，经过2d，4d，7d细胞培养，细胞增殖率均大于100%，说明该材料对成纤维细胞 无毒性效应且对大白鼠皮肤成纤维细胞有促进生长的作用，分子量越小促生长作用越强，随 着培养时间延长促生长作用亦增强。此研究在一定程度上证明，6-O-羧甲基壳多糖作为医 用生物材料在细胞毒性方面是安全的。

羧甲基甲壳胺对豚鼠单—心室肌细胞钙离子电流的作用

应用全细胞膜片钳制技术观察了羧甲基甲壳胺对豚鼠单一心室肌细胞钙离子电流（Ｉ_（ｃａ））的作用。实验结果显示：羧甲基甲壳胺能抑制心室肌细胞的Ｃａ^（２＋）内流，使Ｉ_（ｃａ）减小。此作用具有明显的电压依赖性，对其反转电位无明显影响。羧甲基甲壳胺对Ｉ_（ｃａ）的作用也具有明显的浓度依赖关系，浓度为０．０５％、０．１％、０．２％的羧甲基甲壳胺使Ｉ_（ｃａ）分别减小１１． ８％、３０％和 ４８．１％，最大效应浓度接近 ０． ２５％。此外，停止给予羧甲基甲壳胺后，其对Ｉ_（ｃａ）的作用减小直至消失，Ｉ_（ｃａ）可基本恢复至给药前的水平。上述结果提示，羧甲基甲壳胺减小Ｃａ^（２＋）内流的作用可能与其杭心律失常作用有关。

盐酸溶液中羧甲基壳聚糖对碳钢的缓蚀吸附性能研究

用失重法研究了1 mol/L盐酸溶液中羧甲基壳聚糖(Carboxym enthylch itosan(CM-ch itosan))对碳钢的缓蚀作用.结果表明,CM-ch itosan对碳钢在盐酸介质中的腐蚀具有良好的缓蚀作用,随着浓度的增加缓蚀效率增大.在200 mg/L的浓度下达到最高.用电化学阻抗法测定了碳钢在盐酸溶液中的零电荷电位,确立了CM-ch itosan的吸附模型.303K^343K内CM-ch itosan在碳钢表面的吸附遵循Langmu ir规律,并获得吸附过程ΔGo、ΔHo和ΔSo等重要热力学参数.

羧甲基壳聚糖的化学结构表征

本文通过含N量、总羧甲基化度、伯胺基含量和DEPT、13C-NMR测定,以及其它参数的计算,对羧甲基壳聚糖的化学结构作了表征。

羧甲基壳聚糖和羧甲基甲壳素的生物学性质研究和比较

制备并纯化出了医用级羧化度为103．14％、脱乙酰度为97．18％的羧甲基壳聚糖和羧化度为96．37％的羧甲基甲壳素，对其对成纤维细胞生长作用和体内外可降解性、生物相容性进行了研究。结果表明，两种多糖均能不同程度地促进成纤维细胞的生长，其中以100μg／ml的羧甲基壳聚糖效果最好。体内外降解实验表明二者均具有良好的可降解性和生物相容性，其中羧甲基甲壳素降解的速度相对较快，而羧甲基壳聚糖的生物相容性更好，在体内降解7d后，已无明显炎症反应。

含有奥硝唑纳米囊泡的改性明胶膜释药性能的研究

目的:研制含有载药纳米囊泡的明胶缓释膜,对比普通载药膜表征其释药性能。方法:结合超声波法和逆向蒸发法,制备了载药纳米囊泡,并通过共混的方法进一步得到了含有奥硝唑纳米囊泡的改性明胶膜(简称载药纳米囊泡膜)。通过透射电镜观察分析了载药纳米囊泡的形态以及稳定性,通过紫外分光光度法分别测试了载药纳米囊泡的包封率、载药量以及载药纳米囊泡、载药膜和载药纳米囊泡膜的累积释药曲线。结果:载药纳米囊泡粒径在50～150nm之间,能长期稳定地存在于膜材料中,载药量和包封率分别为0．18mg·mg^(-1)和32．15%。普通载药膜在11h左右达到释药平衡,而载药纳米囊泡膜释药平衡时间达到了22h左右。结论:载药纳米囊泡膜同时具有载药膜和载药纳米囊泡的药物释放性能,明显改善了载药膜的药物缓释性和突释现象,扩展了载药膜和载药囊泡的应用范围。

羧甲基壳聚糖铋盐在大鼠体内分布及排泄的初步研究

用羧甲基壳聚糖作为铋的载体合成了新型含铋化合物--羧甲基壳聚糖铋盐(CM-Chitosan-Bismuth,CM-ChBi),用这种药剂对实验大鼠进行了灌胃观察,研究了它在大鼠体内的分布及排泄情况.实验结果表明:羧甲基壳聚糖铋盐组大鼠肝脏、肾脏、胃、脑、血液经酸水解产物中氨基葡萄糖含量均高于水对照组,粪便中含量最高;羧甲基壳聚糖铋盐组大鼠粪便、肝脏、肾脏、胃、脑、血液中铋的含量,以粪便中含量最高.实验结果提示:羧甲基壳聚糖铋盐主要经粪便排泄,少量被降解吸收.本研究为进一步的代谢动力学研究提供了参考数据.

小分子羧甲基壳聚糖的抑菌性能研究

采用体外抑菌法分别测定不同小分子量羧甲基壳聚糖对几类菌种的抑制作用。结果表明3 000 u分子量的羧甲基壳聚糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉和酵母菌的最低抑菌浓度分别为:0.10%、0.15%、0.15%、0.15%;6 000 u分子量的羧甲基壳聚糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉和酵母菌的最低抑菌浓度分别为:0.15%、0.15%、0.20%、0.15%;9 000 u分子量的羧甲基壳聚糖对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉和酵母菌的最低抑菌浓度分别为:0.20%、0.10%、0.20%、0.20%。较高分子量的羧甲基壳聚糖对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好,低分子量的羧甲基壳聚糖对大肠杆菌、黑曲霉、酵母菌的抑菌效果较好。

壳聚糖复合不对称膜的制备及生物组织相容性研究

用分步流延干燥法制备了一种由壳聚糖(CS)、聚乙烯醇(PVA)、羧甲基壳聚糖(CM-CS)构成的新型人工皮肤医用材料--壳聚糖复合不对称膜(C-P-C膜),其上层为CS层,中间为PVA层,下层为CM-CS层.研究结果表明,可通过调节CS、PVA、CM-CS的加入量来控制复合不对称膜各层的厚度和膜的水蒸气通透性,C-P-C膜具有良好的透光性和吸水率.生物相容性实验发现,C-P-C膜是无毒材料,不会引起创伤感染,随着植入C-P-C膜时间的延长,组织炎症反应明显减轻,6周时,炎症浸润程度低于手术缝合线.C-P-C膜能够明显地促进创面愈合,能有效地密封出血创面且具有显著的止血作用.

磁性壳聚糖对钚、镅、锔的吸附性能研究

研究了磁性壳聚糖对超铀元素Ｐｕ（Ⅳ）、Ｃｍ（Ⅲ）、Ａｍ（Ⅲ）的吸附性能。在ｐＨ大于５的硝酸溶液中磁性壳聚糖可吸附去除＞９９％的这些超铀元素，其吸附能力是Ａｍ（Ⅲ）＞Ｃｍ（Ⅲ）＞Ｐｕ（Ⅳ），吸附过程在４５ｓ内基本上达到平衡。磁性壳聚糖经交联后有助于提高吸附能力和动力学性能。

羧甲基壳聚糖对变形链球菌表面疏水性及黏附力的影响

目的研究羧甲基壳聚糖对变形链球菌表面疏水性及黏附能力的影响。方法采用微生物黏着碳氢化合物法(MATH)测定不同浓度的羧甲基壳聚糖对变形链球菌表面疏水性的影响;并采用不同浓度的羧甲基壳聚糖与变形链球菌共同培养计算羧甲基壳聚糖对变形链球菌的黏附率的影响。结果不同分子量的羧甲基壳聚糖浓度为0.16 g/L时可降低变形链球菌表面的疏水性,并抑制变形链球菌在光滑玻面的黏附。结论羧甲基壳聚糖可以有效抑制变形链球菌的疏水性及黏附能力。

不同分子量的羧甲基壳聚糖对糖尿病小鼠血糖的影响

目的:研究不同分子量的水溶性羧甲基壳聚糖对糖尿病小鼠的降血糖作用。方法:通过腹腔注射链脲佐菌素160 mg/kg建立小鼠糖尿病模型,并将造模成功的小鼠随机分为模型组、阳性对照组、实验组(高分子量羧甲基壳聚糖组、中分子量羧甲基壳聚糖组、低分子量羧甲基壳聚糖组),设置空白对照组,每组12只。实验组小鼠每日按990 mg/kg·b·w分别灌胃不同分子量羧甲基壳聚糖,模型组和空白对照组按体质量灌胃相同体积的蒸馏水,阳性对照组按20 mg/kg·b·w灌胃拜唐苹阿卡波糖,连续灌胃28 d,于末次灌胃后测定小鼠空腹血糖值、糖耐量。结果:不同分子量的羧甲基壳聚糖对高血糖模型小鼠体重没有显著影响(p>0.05);与模型组比较,低分子量组能极显著的降低造模小鼠的血糖浓度(p<0.01),中分子量组能显著的降低造模小鼠的血糖浓度(p<0.05),而高分子量组未见显著效果;并且三者均可改善糖尿病小鼠的糖耐量。综上所述,低分子量羧甲基壳聚糖降血糖效果最好,中分子量羧甲基壳聚糖效果次之,高分子量羧甲基壳聚糖效果最弱。

The Evaluation on Biological Properties of Carboxymethyl-chitosan and Carboxymethyl-chitin

Carboxymethyl-chitosan and carboxymethyl-chitin were prepared with the methods developed in our laboratory. The DS (degree of substitution) and DD (degree of deacetylation) of the carboxymethyl-chitosan were 103.14% and 97.18% respectively,while the DS of the carboxymethyl-chitin was 96.37%. Their effects on human fibroblasts,intradermal irritation test,in vitro and vivo degradability,and biocompatibility were evaluated. The results indicate that the polysaccharides at low concentrations can facilitate the growth of human fibroblasts and the carboxymethyl-chitosan at 100 μg mL-1 is the most effective. The polysaccharides at higher concentrations,however,inhibit the growth of fibroblasts. The PII (Primary Irritation Index) values of CM-chitosan and CM-chitin are both 0.0,which shows that they have no irritation reaction. Both of the polysaccharides show good degradability and biocompati-bility. Carboxymethyl-chitin degrades faster in vitro than carboxymethyl-chitosan. The latter,however,has no inflammatory reaction after being implanted in vivo for 7 d and shows better biocompatibility. This study may provide a scientific basis for the use of car-boxymethyl-chitosan and carboxymethyl-chitin as biomaterials.