血管性眩晕患者血清Nε-羧甲基赖氨酸、氧化低密度脂蛋白水平变化及其意义

目的观察血清Nε-羧甲基赖氨酸(CML)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平变化,并探讨其意义。方法选取河北北方学院附属第一医院2016年1月~2017年6月收治的血管性眩晕患者55例(血管性眩晕组)、非血管性眩晕患者40例(非血管性眩晕组),另选40例既往未发生眩晕的健康体检者作对照(健康对照组)。采用ELISA法检测各组血清CML、ox-LDL;应用直线相关分析法分析血管性眩晕组血清CML与ox-LDL的相关性;绘制血清CML、ox-LDL单独及联合诊断血管性眩晕的ROC曲线,分别计算曲线下面积,采用最大约登指数法计算CML、ox-LDL诊断血管性眩晕的截断值,并计算各自的灵敏度及特异度。结果血管性眩晕组、非血管性眩晕组、健康对照组血清CML水平分别为(565.21±60.08)、(402.52±55.07)、(388.85±50.11)ng/mL,血清ox-LDL水平分别为(214.29±20.06)、(145.51±19.56)、(139.66±18.14)μg/mL,血管性眩晕组分别与非血管性眩晕组、健康对照组比较,P均<0.05。血管性眩晕组患者血清CML与ox-LDL呈明显正相关(r=0.455,P<0.05)。血清CML、oxLDL检测诊断血管性眩晕的ROC曲线下面积分别为0.821和0.701,联合检测诊断血管性眩晕ROC曲线下面积为0.938;约登指数最大时血清CML、ox-LDL水平截断值分别为475.9 ng/mL和154.3μg/mL,此时血清CML水平检测诊断此病的灵敏度和特异度分别为0.695和0.701,血清ox-LDL水平检测诊断此病的灵敏度和特异度分别为0.583和0.651,两者联合检测诊断此病的灵敏度和特异度分别为0.883和0.845;两者联合检测诊断血管性眩晕的ROC曲线下面积、灵敏度和特异度均明显高于血清CML、ox-LDL单独检测(P均<0.05)。结论血管性眩晕患者血清CML、ox-LDL水平升高,检测两指标有助于此病的诊断,且两者联合检测的诊断效能优于单独检测。

冠心病患者血清晚期糖基化终产物N^ε-羧甲基赖氨酸含量的变化

目的 观察冠心病患者血清晚期糖基化终产物 (AGE)Nε 羧甲基赖氨酸 (CML)的水平。方法 采用抗戚蓝蛋白晚期糖基化终产物 (KLH AGE)抗体竞争ELISA法 ,对 33例冠心病患者、14例单纯高血压患者及 38名正常人血清中CML进行定量观察。结果 33例冠心病患者血清中均测得CML ,正常对照组中仅 3名血清CML含量 >0 .1mg/L ,两组比较差异有极显著性意义 (P <0 .0 0 1)。合并高血压的冠心病患者血清CML水平为 (0 .92± 0 .6 1)mg/L ,较单纯高血压 [(0 .2 3± 0 .16 )mg/L]或单纯冠心病 [(0 .44± 0 .47)mg/L]患者明显增高 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 )。不合并糖尿病的冠心病患者和合并糖尿病的冠心病患者血清CML水平无显著差异。结论 冠心病患者血清CML水平明显增高 ,提示机体内晚期糖基化终产物的产生在冠状动脉粥样硬化的形成机制中可能起一定的作用。血清CML含量可作为冠心病患者晚期糖基化反应水平的生物学指标。

青年人急性心肌梗死血清晚期糖基化终末产物N^ε-羧甲基赖氨酸含量的变化

为观察青年人 (<4 0岁 )急性心肌梗死血清晚期糖基化终末产物—Nε 羧甲基赖氨酸含量的变化 ,探讨其发病机制。采用抗戚蓝蛋白晚期糖基化终末产物抗体竞争酶联免疫吸附测定法测定 32例青年人急性心肌梗死、4 7例中老年人急性心肌梗死和 38例健康年轻自愿者血清中Nε 羧甲基赖氨酸含量。结果发现 ,年轻对照组中有 5例血清Nε 羧甲基赖氨酸含量 >0 .1mg L ,青年人急性心肌梗死组有 14例 ,两组差异显著 (P <0 .0 5 ) ,其中冠状动脉单支病变组与多支病变组相比具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;但中老年人急性心肌梗死组Nε 羧甲基赖氨酸水平较青年人急性心肌梗死组显著增加 (P <0 .0 0 1) ,冠状动脉单支病变与多支病变相比具有显著性差异 (P <0 .0 5 )。中老年人急性心肌梗死中合并糖尿病患者与不合并糖尿病患者血清Nε 羧甲基赖氨酸水平无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结果提示 ,机体内晚期糖基化终末产物的产生增多部分参与了青年人冠状动脉粥样硬化的形成和急性心肌梗死的发病机制。

糖尿病合并冠心病患者颈动脉粥样硬化斑块钙化的影响因素及其与血清Nε-羧甲基赖氨酸水平的相关性

目的探讨糖尿病合并冠心病患者血清Ne-羧甲基赖氨酸(CML)水平与颈动脉粥样硬化斑块钙化的相关性。方法选择2016年4月至2018年3月我院收治的糖尿病合并冠心病患者84例,进行颈部CT血管造影(CTA)检查,根据所评估血管是否发生钙化将其分为钙化组和无钙化组,收集两组患者临床资料,并检测血清CML水平,采用Logistic回归分析颈动脉粥样硬化斑块钙化影响因素和血清CML与颈动脉粥样硬化斑块钙化的相关性。结果颈动脉粥样硬化斑块钙化患者53例,无钙化患者31例。钙化组年龄、体质指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及CML水平均高于无钙化组(P <0. 05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于无钙化组(P <0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄、糖尿病病程、冠心病病程、血清CML水平均是颈动脉粥样硬化斑块钙化发生的独立危险因素。结论糖尿病合并冠心病患者颈动脉粥样硬化斑块钙化影响因素包括年龄、糖尿病病程、冠心病病程、血清CML水平,其中血清CML水平异常升高与颈动脉粥样硬化斑块钙化发生密切相关。

肝移植患者手术前后N^ε-羧甲基赖氨酸含量的变化

目的观察肝硬化行肝移植患者术前及术后血清晚期糖基化终产物Nε-羧甲基赖氨酸(CML)的变化。方法采用抗戚蓝蛋白(KLH)晚期糖基化终产物抗体竞争性酶联免疫吸附测定法,对26例肝硬化行肝移植的患者于术前、术后3个月及40名健康人群进行血清CML定量测定,比较各组之间的差异。结果肝硬化行肝移植患者术前及术后3个月血清CML水平均较健康人群增高,与健康人群相比较差异有显著性(P<0.05),术后3个月血清CML水平明显下降,术前、术后相比较差异有显著性(P<0.05)。结论肝硬化行肝移植患者术后血清CML水平明显下降,提示肝脏是一个重要的晚期糖基化终产物代谢器官。

糖尿病患者血清Nε-羧甲基赖氨酸水平与颈动脉钙化关系的临床研究

目的探究血清Nε-羧甲基赖氨酸(CML)对1型糖尿病和2型糖尿病患者不同程度颈动脉钙化的影响。方法选取2016年1月至2017年6月在江苏大学附属医院就诊患者506例,其中1型糖尿病148例,2型糖尿病191例,无糖尿病者167例,所有患者均行彩色多普勒超声检测双侧颈动脉。将颈动脉钙化严重程度按照0~8分予以评估,以1~4分为低钙化组,5~8分为高钙化组。记录患者一般临床资料、体格检查结果、实验室检查结果,并通过酶联免疫吸附实验测量血清CML水平。进行多因素Logistic回归分析,以确定1型糖尿病、2型糖尿病患者不同程度颈动脉钙化的独立预测因子。随访复测CML并追踪主要不良心脑血管事件(MACCE);分析CML变化与MACCE的关系。结果在颈动脉高钙化组和低钙化组,糖尿病患者的CML、颈动脉内膜中膜厚度和低密度脂蛋白胆固醇水平均高于无糖尿病者(P<0.05),且2型糖尿病患者高于1型糖尿病患者(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,CML是1型糖尿病患者颈动脉钙化程度的独立预测因子(OR 2.025,95%CI 1.368~2.996,P<0.05),也是2型糖尿病患者颈动脉钙化程度的独立预测因子(OR 2.485,95%CI 1.481~4.171,P<0.05)。随访期CML水平明显升高与MACCE相关。结论CML是1型和2型糖尿病患者不同程度颈动脉钙化的独立预测因子,并在一定程度上预测糖尿病性心脑血管事件的发生。

N~ε-羧甲基赖氨酸通过RAGE促进平滑肌细胞源性泡沫细胞形成

目的研究Nε-羧甲基赖氨酸（CML）对平滑肌细胞泡沫化中脂质外流的影响,探讨其在促进平滑肌细胞泡沫化中的作用和机制。方法使用组织贴块法从C57BL/6J小鼠主动脉中提取原代血管平滑肌细胞并进行鉴定;将第3~9代的原代平滑肌细胞分为对照组,氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）（50 mg/L）模型组,1、10、100μmol/L的CML与ox-LDL共刺激组,通过NBD-胆固醇流出实验检测CML对泡沫细胞胆固醇流出率的影响,通过胆固醇含量测定试剂盒测定细胞内总胆固醇（TC）、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）水平;将原代血管平滑肌细胞分为四组：对照组、ox-LDL模型组、ox-LDL＋CML组、RAGE siRNA沉默组（ox-LDL＋CML＋siRAGE组）并进行刺激,通过Western blot检测糖基化终末产物受体（RAGE）和胆固醇流出调节子ABCA1的表达;通过油红O染色和油红萃取实验检测各组平滑肌细胞泡沫化程度。结果与对照组相比,不同浓度CML明显升高平滑肌细胞内TC、CE和FC的含量;胆固醇流出实验表明胆固醇流出率随CML浓度升高而降低;Western blot实验表明与对照组相比,加入CML后RAGE明显升高,ABCA1明显降低,ox-LDL＋CML＋siRAGE组RAGE的表达降低,并且ABCA1降低水平减少;油红O染色显示ox-LDL能够促使平滑肌细胞内脂质蓄积,CML能够增强其作用,抑制RAGE表达后CML作用减弱。结论 CML通过RAGE抑制脂质外流,促进平滑肌细胞源性泡沫细胞形成。

高效液相色谱-串联质谱法测定油条中羧甲基赖氨酸

建立了利用高效液相色谱-串联质谱法（HILIC-HPLC-MS/MS）测定油条中羧甲基赖氨酸（CML）含量的检测方法。样品经硼氢化钠还原、盐酸水解,过混合型阳离子交换小柱萃取净化,样品溶液在HILIC色谱柱中以甲醇-水（均含2mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸）为流动相进行梯度洗脱,CML被保留并与样品基质分离。选用电喷雾正离子（ESI＋）模式电离,多反应监测模式（MRM）进行串联质谱分析。以内标法定量,D4-CML为内标物,分析时间为12min。本方法添加回收率范围89.5%~99.1%,相对标准偏差范围2.1%~2.6%,仪器检出限为1μg/L,定量限为3μg/L。应用该方法测得15种不同来源的油条中CML含量为69.3±8.2~182.2±3.1mg/（kg蛋白质）,5.3±0.5~15.4±0.3mg/（kg样品）。本方法操作简便、快速、灵敏度高、精密度好,为进一步研究食品中CML的产生机理提供了有效的检测方法。

血清Nε-羧甲基赖氨酸水平与2型糖尿病患者颈动脉钙化的关系

目的探讨血清Nε-羧甲基赖氨酸(CML)水平与2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉钙化的关系。方法选择T2DM患者132例,根据颈动脉超声检查结果将患者分为钙化组(92例)和无钙化组(40例),根据钙化积分将钙化组分为高钙化组(58例)和低钙化组(34例);另选51例门诊体检健康志愿者为对照组。用酶联免疫吸附法检测两组血清CML;用超声检测颈动脉钙化情况,对钙化长度进行评分。收集各组临床资料。Spearman秩相关分析CML与钙化积分之间的相关性;Logistic二元逐步回归分析T2DM患者颈动脉钙化的危险因素;受试者工作特征曲线分析CML诊断T2DM患者颈动脉钙化的价值。结果钙化组、无钙化组血清CML水平高于对照组(P均<0.05),钙化组血清CML水平高于无钙化组(P<0.05)。高钙化组血清CML水平高于低钙化组(P<0.05),钙化组血清CML水平与钙化积分呈正相关(rs=0.597,P<0.05)。高TC、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、CML是T2DM患者颈动脉钙化的危险因素(P均<0.01)。校正TC、HOMA-IR后CML仍为T2DM患者颈动脉钙化的影响因素(OR=1.953,95%CI:1.842~2.632,P<0.05)。CML诊断T2DM颈动脉钙化的最佳截断值为73.49 mg/L,曲线下面积为0.717(95%CI:0.621~0.813,P<0.05),其灵敏度、特异度、约登指数、阳性预测值、阴性预测值、漏诊率、误诊率、诊断符合率分别为78.26%、82.50%、0.61、91.14%、62.26%、21.74%、17.50%、79.55%。结论血清CML水平升高与T2DM患者颈动脉钙化相关,可作为诊断颈动脉钙化的指标之一。

Ⅱ型糖尿病患者血浆N~ε-羧甲基赖氨酸与颈动脉内中膜厚度的相关性

目的:探讨晚期糖基化终末产物Nε-羧甲基赖氨酸[Nepsilon-(carboxymethyl)lysine,CML]与Ⅱ型糖尿病患者颈动脉内中膜厚度(intimal-medial thickness,IMT)的相关性。方法:采用酶联免疫测定72例糖尿病患者及24例正常对照者血浆CML的浓度,同时用彩色多普勒超声测定IMT。结果:糖尿病组血浆CML浓度高于正常对照组;糖尿病组IMT高于正常对照组,且与血浆CML浓度呈正相关。多因素回归分析显示,在控制年龄、血脂及血压等因素后CML水平与IMT仍有相关性。结论:糖尿病患者血浆CML浓度显著升高,且与IMT独立相关。

2型糖尿病患者颈动脉高频超声特点与N~ε-羧甲基赖氨酸水平及其临床应用价值

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉高频超声特点与血清N~ε-羧甲基赖氨酸(CML)水平及其临床应用价值。方法将200例T2DM患者按病程分为≤5年组(观察1组) 120例和>5年组(观察2组)80例,同时选取100例健康体检者为对照组。检测各组CML水平,并行高频超声检查,观察颈动脉斑块形成情况及颈动脉内膜中层厚度(IMT),计算斑块积分。应用受试者工作特征(ROC)曲线评价高频超声、血清CML以及二者联合诊断T2DM患者颈动脉粥样硬化(CAS)血管重构的价值。结果对照组、观察1组、观察2组斑块积分、IMT、血清CML水平、斑块检出率均依次升高(均P<0.05)。高频超声、血清CML以及二者联合应用诊断T2DM患者CAS血管重构的ROC曲线下面积分别为0.872、0.865、0.924(均P<0.05)。结论 T2DM患者更易出现IMT增厚、颈动脉斑块增多、CML升高,且随着糖尿病病程的延长,以上现象加剧。高频超声联合血清CML水平诊断T2DM患者CAS血管重构的价值高于单纯超声和血清CML。

气相色谱-质谱法测定大菱鲆肌肉中羧甲基赖氨酸含量

建立了大菱鲆肌肉中羧甲基赖氨酸（CML）的气相色谱-质谱（GC-MS）检测方法。以大菱鲆为研究对象,选用三氯甲烷/丙酮对样品进行脱脂,经硼氢化钠还原、蛋白水解、净化、衍生化（酯化与酰化）后,进行GC-MS选择离子监测（SIM）模式检测。选取m/z 392为定量离子,m/z 392,365,333,305为定性离子。结果表明,CML三氟乙酰甲酯化衍生物峰面积与浓度在1~200μg/L范围内呈良好线性关系,方法检出限为1 mg/kg,定量限为5 mg/kg,3个加标水平（10,150和350 mg/kg）下的平均回收率在100%~104%之间,相对标准偏差RSD〈5%（n=5）。

UPLC-Q-TOF/MS在烘焙食品中羧甲基赖氨酸和羧乙基赖氨酸检测中的应用

建立了烘焙食品中羧甲基赖氨酸(CML)和羧乙基赖氨酸(CEL)的UPLC-Q-TOF/MS检测方法。烘焙食品经脱脂、还原、沉淀蛋白、酸水解释放出CML和CEL,使用FMOC-Cl柱前衍生和HLB小柱固相萃取净化后,采用UPLC-Q-TOF/MS检测。CML和CEL在1~700 ng/m L浓度范围内均呈良好的线性关系,线性回归系数r>0.999。CML和CEL的检出限均为0.1 mg/kg;回收率为94.4%~108.3%;相对标准偏差(RSD,n=6)为0.4%~6.2%。该方法定性、定量准确,灵敏度高,能很好地应用于烘焙食品中CML和CEL的检测。

糖醋排骨中羧甲基赖氨酸分析方法的建立及其烹饪过程中动态变化

采用高效液相色谱-三重四极杆质谱联用技术建立了一种操作简单、稳定性好的检测中式菜肴糖醋排骨中羧甲基赖氨酸（Nε-（carboxymethyl）lysine,CML）的方法.样品用正己烷去脂肪,硼氢化钠还原,盐酸水解蛋白,Oasis MCX固相萃取小柱净化.以5 mmol/L的乙酸铵溶液和甲醇-水（80∶20,V/V）溶液作为流动相,采用Phenomenex Synergi 4 μ Hydro-RP 80A色谱柱,在正离子模式下采用多重反应监测分析,同位素内标法定量.该方法检出限为1.40 μg/g,加标回收率为90.94％～105.26％,相对标准偏差为5.80％～15.46％.采用该分析方法对中式菜肴糖醋排骨加工过程中CML的含量变化进行分析,结果表明,加工温度和加热时间以及糖和油脂的添加均可以显著影响糖醋排骨中CML的含量.

羧甲基赖氨酸的毒理学研究进展(英文)

晚期糖基化终末产物(Advanced Glycation End-products,AGEs)是蛋白质、脂质或核酸等大分子物质的非酶糖基化产物。其中,羧甲基赖氨酸(CML)是AGEs的主要结构成分之一,在体内广泛分布,其在生物体内及食品加工和加热过程中均有生成。研究表明,羧甲基赖氨酸(CML)作为AGEs的主要抗原表位,在糖尿病及多种并发症以及衰老的发生发展过程中起着重要作用。该研究对羧甲基赖氨酸(CML)的主要来源、毒理危害以及控制等进展进行综述。

食品中羧甲基赖氨酸的检测方法

综述了羧甲基赖氨酸(CML)的检测方法,为食品中CML含量检测方法的选择提供依据。

HPLC法测定婴幼儿配方乳粉中羧甲基赖氨酸

乳由于热损伤而发生美拉德反应,产生羧甲基赖氨酸(CML)。研究显示,CML与糖尿病、动脉粥样硬化、人体细胞老化等均呈正相关。本文建立了HPLC方法对婴幼儿乳粉中羧甲基赖氨酸的测定方法。样品经预处理,采用高效液相色谱仪(HPLC)进行测定,色谱柱为C18柱,柱温为35℃,流动相为甲醇和醋酸钠缓冲液(p H 6.50,0.048 mol/L)(96∶4,体积比),流速为0.8 m L/min,荧光检测器,激发波长340 nm,发射波长455 nm,外标法定量。结果显示,CML在0.2μg/m L^35.0μg/m L范围内呈良好线性关系,相关系数(r)为0.999 1。最低检出浓度为0.16μg/m L。选择市售2种品牌奶粉进行加标回收试验,回收率分别为92%和107%。

对二氧环己酮与N^ε-苄氧羰基-L-赖氨酸无规共聚物的合成及其共聚反应机理

通过对二氧环己酮与Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸-N-羧酸酐本体共聚的方法制备了聚对二氧环己酮-Nε-苄氧羰基-L-赖氨酸的无规共聚物(PPCLAs),其结构1H NMR和GPC表征。考察了聚合反应时间及催化剂用量对PPCLAs平均分子量的影响,并提出了"先竞争引发,再大分子间缩聚"的共聚反应机理。

游离态羧甲基赖氨酸对秀丽隐杆线虫的毒性作用

羧甲基赖氨酸(CML)是食品加工中经美拉德反应由蛋白质与糖类通过非酶催化反应产生的一种晚期糖基化终末产物,是一种新型食品潜在有害物质。本文通过研究外源游离性CML对秀丽隐杆线虫寿命、子代数量、热环境中线虫存活时间的影响,探讨其可能的毒性机制。结果表明,外源游离性CML导致线虫产卵期缩短,寿命试验以及热刺激下存活的线虫数量呈现出剂量-反应关系。影响了TOR信号通路的Skn-1基因和生殖系统信号通路中的hsf-1基因,提高线虫的热环境阻力的抵抗力并延长其寿命。高浓度的CML降低了线虫的中DAF-16的表达水平从而影响其寿命,抑制线虫体内Folt-1基因的表达,从而减少其子代线虫的数量。

基于高光谱图像技术的油炸薯片中羧甲基赖氨酸含量检测

为探究羧甲基赖氨酸[N^(ε)-(1-carboxymethyl)-L-lysine,CML]含量的快速无损检测方法,该文采用高光谱图像技术对8种自制油炸薯片进行检测研究,提取每个高光谱图像的平均光谱值作为特征参量,同时结合液相色谱-质谱法测定CML含量,探寻预测其含量最适宜的光谱预处理和建模方法。首先将高光谱图像进行黑白校正,再选用标准正态变量变换光谱预处理方法,以消除固体颗粒、散射以及光程变化对光谱的影响。然后筛选出第200个到1 000个波段图像的平均光谱反射值,建立主成分回归、偏最小二乘回归和BP神经网络3种预测模型。对比结果表明:BP神经网络可以预测油炸薯片中CML含量,预测正确率为99.67%,决定系数为0.99,均方根误差为0.22。同时,为验证模型的稳健性,随机选取5组训练集和预测集代入相同参数的模型进行预测。结果显示:预测正确率平均值为96.23%,决定系数平均值为0.99,均方根误差平均值为0.22。这说明高光谱图像技术结合BP神经网络快速预测油炸薯片中CML含量具有可行性。