CMTM1-v17/CKLFSF1-v17多克隆抗体的制备、亲合纯化与鉴定

目的：CMTM1-v17是我室克隆的人类新基因，为进一步研究CMTM1-v17的功能，需制备高纯度的CMTM1-v17的抗体。方法：根据生物信息学分析的结果，用PCR法扩增人CMTM1-v17分子C端的cDNA片段（编码118～149位氨基酸），亚克隆到GST融合蛋白表达载体pGEX-4T-2上。将重组质粒pGST-CMTM1-v17导入大肠杆菌BL21，诱导表达GST-CMTM1-v17 C端融合蛋白，经GST亲合层析、凝血酶切割后获得CMTM1-v17 C蛋白作为抗原免疫家兔制备抗血清。抗血清经抗原亲合层析后用Western blot和免疫组化方法进行鉴定。结果：通过重组表达获得抗原蛋白，免疫家兔并纯化抗血清得到特异的抗CMTM1-v17抗体，该抗体能检测到CMTM1-v17超表达和细胞内源性的蛋白。结论：成功制备了抗CMTM1-v17的多克隆抗体，对进一步研究CMTM1-v17的功能提供了一个有用的工具。

新的潜在的雄激素受体协同抑制因子CMTM1-v17

目的:研究CMTM1-v17(CKLF-like MARVEL transmembrane domain containing family 1-variant17)在正常前列腺及前列腺癌来源细胞系中的表达,初步探索CMTM1-v17对雄激素受体(androgen receptor,AR)转录活性的影响及其作用机制。方法:用免疫组织化学和免疫细胞化学染色的方法分析CMTM1-v17在正常人前列腺组织和前列腺癌来源细胞系中的表达。用荧光素酶报告系统研究CMTM1-v17对AR转录活性的影响及作用机制。结果:CMTM-v17在正常前列腺和前列腺癌来源的LNCaP,Du145和PC3细胞均有表达。荧光素酶报告系统的结果提示在二氢睾酮(5α-dihydrotestosterone,DHT)存在的情况下,将空载体对照组的荧光强度设为100,超表达1μgCMTM1-v17后的相对荧光强度仅为70.8,而超表达2μgCMTM1-v17后的相对荧光强度下降到34.7。当细胞用DHT刺激、同时用组蛋白去乙酰转移酶(histone deacetylase,HDAC)的抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)后,则超表达1μgCMTM1-v17后的相对荧光强度和超表达2μgCMTM1-v17后的相对荧光强度分别从70.8和34.7上升至90.9和86.4。结论:CMTM1-v17在正常前列腺中和前列腺癌来源的细胞系中都有较高丰度的表达,它可能是潜在的AR协同抑制因子,并通过募集HDAC发挥其抑制功能。

脑胶质瘤组织CMTM1、ME2表达与临床病理特征和复发的关系研究

目的:探讨脑胶质瘤组织含CKLF样MARVEL跨膜结构域的蛋白1(CMTM1)、苹果酸酶2(ME2)表达与临床病理特征和复发的关系。方法:选取2018年1月~2021年1月徐州医科大学附属医院接受切除手术的92例脑胶质瘤患者,根据术后是否复发分为复发组和未复发组。采用免疫组化法检测脑胶质瘤组织和瘤旁组织CMTM1、ME2表达,分析二者与临床病理特征的关系,采用多因素Logistic回归分析脑胶质瘤患者术后复发的影响因素。结果:与瘤旁组织比较,脑胶质瘤组织中CMTM1、ME2阳性表达率升高(P<0.05)。不同分化程度、世界卫生组织(WHO)中枢神经系统肿瘤分类脑胶质瘤组织中CMTM1、ME2阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。随访2年,92例脑胶质瘤患者术后复发率为47.83%(44/92)。多因素Logistic回归分析显示,低分化、WHO中枢神经系统肿瘤分类Ⅲ~Ⅳ级、部分切除和CMTM1、ME2阳性表达为脑胶质瘤患者术后复发的独立危险因素(P<0.05)。结论:脑胶质瘤组织中CMTM1、ME2阳性表达率升高,与分化程度、WHO中枢神经系统肿瘤分类等级和术后复发有关,可能成为脑胶质瘤患者术后复发的辅助评估指标。

胶质瘤CMTM 1、CMTM 6的表达及其临床意义

目的探讨趋化素样因子超家族(CMTM)1、CMTM6表达水平与胶质瘤病人预后的关系。方法收集2016年1月~2019年6月手术切除的胶质瘤组织96例和颅脑损伤内减压术中切除的非肿瘤脑组织40例(对照组),采用免疫组织化学染色检测CMTM1、CMTM6的表达水平。随访24个月,记录胶质瘤病人生存情况。结果胶质瘤组CMTM1和CMTM6高表达率[分别为64.58%(62/96)、67.71%(65/96)]明显高于对照组[分别为25%(10/40)、20.00%(8/40);P<0.01]。胶质瘤组织CMTM1与CMTM6表达水平呈正相关(r=0.837,P<0.001)。本文96例随访2年,死亡37例,生存59例。多因素Cox比例回归风险模型分析显示,CMTM1过表达、CMTM6高表达是胶质瘤预后不良的独立危险因素(P<0.05)。生存曲线分析显示,CMTM1、CMTM6高表达组2年累积生存率(分别为50.15%、52.05%)明显低于表达组(分别为79.85%、84.95%;P<0.05)。结论胶质瘤组织CMTM 1、CMTM 6呈高表达,与病人的不良生存预后有关。