CMTM1-v17/CKLFSF1-v17多克隆抗体的制备、亲合纯化与鉴定

目的：CMTM1-v17是我室克隆的人类新基因，为进一步研究CMTM1-v17的功能，需制备高纯度的CMTM1-v17的抗体。方法：根据生物信息学分析的结果，用PCR法扩增人CMTM1-v17分子C端的cDNA片段（编码118～149位氨基酸），亚克隆到GST融合蛋白表达载体pGEX-4T-2上。将重组质粒pGST-CMTM1-v17导入大肠杆菌BL21，诱导表达GST-CMTM1-v17 C端融合蛋白，经GST亲合层析、凝血酶切割后获得CMTM1-v17 C蛋白作为抗原免疫家兔制备抗血清。抗血清经抗原亲合层析后用Western blot和免疫组化方法进行鉴定。结果：通过重组表达获得抗原蛋白，免疫家兔并纯化抗血清得到特异的抗CMTM1-v17抗体，该抗体能检测到CMTM1-v17超表达和细胞内源性的蛋白。结论：成功制备了抗CMTM1-v17的多克隆抗体，对进一步研究CMTM1-v17的功能提供了一个有用的工具。