特异性细胞毒T淋巴细胞治疗HCMV感染的研究进展

人巨细胞病毒 (HCMV)的感染是普遍的 ,所致的危害也很严重。目前药物防治已被普遍选择 ,尽管它能限制 HCMV感染的发展 ,但其副作用使临床把希望寄托于免疫预防和治疗。 HCMV的感染后果主要决定于宿主的免疫状况 ,其中特异性 CTL起着关键作用。大量资料已证明 ,HCVM特异性 CTL可用于预防和治疗HCMV的激活与疾病。

肝癌细胞抗原致敏树突状细胞体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞

目的:探讨原发性肝癌患者外周血树突状细胞(DC)体外经自体肝癌细胞抗原致敏后,对特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL) 的诱导作用. 方法:肝癌患者外周血经梯度密度离心法分离,获得DC前体细胞,用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM- CSF)和重组人白介素-4(rhIL-4)联合培养,诱导扩增DC. 制备自体肝癌细胞抗原,体外脉冲DC,检测DC诱导自体T细胞增生能力及特异性CTL在体外对自体肝癌细胞的杀伤活性. 结果:经自体肝癌细胞抗原致敏的DC能诱导较强的自体T 细胞增生,且能诱导特异性CTL,该CTL,对自体肝癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率明显高于DC、未经肝癌细胞抗原致敏的DC激活的CTL及T淋巴细胞的杀伤率,而对CT26细胞、BEL-7402细胞无明显的杀伤作用. 结论:肝癌患者外周血DC体外能诱导高效而特异的抗肝癌免疫,提示DC可能在肿瘤治疗及预防其复发与转移中发挥重要作用.

人类免疫缺陷病毒感染中的特异性细胞毒T淋巴细胞反应(二)

(接上期) 2.4粘膜中的细胞免疫由于HIV主要是通过性接触传播,病毒通过粘膜入侵机体,对于暴露部位局部的免疫功能的研究也是目前的一个热点.现在认为粘膜处抗HIV免疫反应主要有以下特点[9]:(1)经典的粘膜免疫反应是由特异性IgA介导的,但在HIV感染中,对病毒env特异性的IgG在口腔、鼻粘膜及生殖道处占了优势.但是,由于这类特异抗体并无中和保护作用,其出现于疾病的进展无一定的联系.(2)与体内其它部位相似,细胞免疫是粘膜处抗HIV的主要免疫反应.CTL反应对控制病毒数量起决定作用.(3)由于HIV在粘膜处的传播主要是通过嗜巨噬细胞毒株来实现的,妇女在暴露后仅有一部分入血.可能是由于这个原因,生殖道粘膜中的CTL反应可识别的病毒表位谱较血中窄,具有更强的限制性.(4)在人类唾液腺中存在一种称为唾液白细胞蛋白酶的抑制因子.该因子在体外可以有效地控制HIV,同时,在唾液中HIV通常呈阴性,这说明该物质可以有效地抑制HIV通过口腔粘膜传播,其机制可能是妨碍病毒与靶细胞的接触.

人类免疫缺陷病毒感染中的特异性细胞毒T淋巴细胞反应(一)

特异性细胞毒T淋巴细胞(Cytoxic T Lymphocyte,CTL)是一类可以杀伤表达特异性抗原靶细胞的T细胞亚群.CTL是抗细胞内感染(病毒、单核细胞增多性李斯特菌等)、急性同种异型移植物排斥反应和杀伤肿瘤的重要效应细胞[1].

乙肝病毒核心抗原特异性CD8^+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与HBV-DNA、ALT的相关性研究

目的探讨乙型肝炎(乙肝)病毒核心抗原特异性CD8^+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)、谷丙转氨酶(ALT)的相关性。方法选择47例急性乙肝患者作为急性乙肝组,同期39例慢性乙肝活动期患者作为慢性乙肝组,同期28例健康体检者作为对照组,比较三组核心抗原特异性CD8+细胞毒性T淋巴细胞及相关因子(Core18-27、Env335-343、Pol575-583)、HBV-DNA、ALT、谷草转氨酶(AST)、谷氨酰基转移酶(GGT)、总胆红素(TBIL)水平,分析乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关因子与HBV-DNA、ALT的相关性。结果急性乙肝组Core18-27、Env335-343、Pol 575-583水平分别为(1.24±0.51)%、(0.09±0.01)%、(0.09±0.02)%,高于对照组的(0.09±0.02)%、(0.06±0.02)%、(0.07±0.02)%和慢性乙肝组的(0.05±0.01)%、(0.04±0.01)%、(0.03±0.01)%,且对照组均高于慢性乙肝组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。急性乙肝组HBVDNA、ALT、AST、GGT及TBIL水平分别为(21.59±4.32)×10^3 copies/ml、(85.35±5.49)U/L、(120.59±12.19)U/L、(125.98±13.42)U/L、(40.39±1.32)μmol/L,均高于慢性乙肝组的(13.21±3.29)×10^3 copies/ml、(62.14±5.05)U/L、(87.56±6.87)U/L、(102.12±10.06)U/L、(25.49±1.21)μmol/L和对照组的0、(32.21±3.25)U/L、(30.29±3.41)U/L、(33.49±3.09)U/L、(12.59±0.14)μmol/L,且慢性乙肝组高于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Core18-27、Env335-343和Pol 575-583与HBV-DNA、AST、ALT、GGT及TBIL水平均呈正相关(P<0.05)。结论乙肝病毒核心抗原特异性CD8+细胞毒T淋巴细胞及相关细胞因子与HBV-DNA、ALT存在相关性,加强其表达水平测定反映疾病严重程度,有助于指导临床治疗。

特异性细胞毒T淋巴细胞治疗慢性乙型肝炎

近年来HBV免疫病理学研究提示:HBV抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)在清除肝内HBV的免疫反应过程中起着关键性的作用。因此,增强特异性CTL的功能,可能有助于清除肝内HBV,从而起到治疗作用。1992笔者在中国医学科学院基础医学研究所单克隆抗体研究室朱力平教授的帮助和指导下,建立了体外制备HBV特异性CTL的方法,并自1992～1995进行了3期前瞻性、多中心临床试验,现报告如下:1 资料与方法1.1 病例选择标准

人细胞毒T淋巴细胞杀伤胃癌细胞及诱发凋亡的实验研究

目的 测定特异性细胞毒 T淋巴细胞 (CTL )对胃癌细胞的体外杀伤活性及观察形态学改变。方法 用分离胃腺癌患者的癌细胞经丝裂霉素 C处理后 ,作为抗原与抗CD3单克隆抗体、重组白细胞介素 - 2刺激患者自体外周血单个核细胞 ,体外诱导 CTL,用 MTT比色法测定 CTL 对自体癌细胞、人胃癌细胞株 (BGC- 82 3和 MGC- 80 3)的体外杀伤活性。将 CTL与 BGC- 82 3共同温育 ,通过透射和扫描电镜观察杀伤靶细胞的形态改变。结果 CTL对自体胃癌细胞有特异性杀伤作用 ,可使靶细胞凋亡或溶解坏死。结论 体外混合细胞培养诱导出的 CTL。

不同剂量HBV疫苗接种产生的细胞毒T淋巴细胞反应

目的 研究不同剂量HBV疫苗接种产生的细胞毒T淋巴细胞 (cytotoxicTlymphocytes ,CTL)反应。。方法 10 0只BALB/c小鼠随机分为 5组 :0 . 65、1 . 2 5、2 . 5、5组小鼠腹腔分别接种 0 . 65、1 . 2 .5、2 . 5、5 μg的HBV疫苗 ,其中一半小鼠 2周后加强免疫1次 :对照组小鼠同时按种 5 μg佐剂。分别在初次免疫后 4周或加强免疫后 2周 ,分离小鼠脾T淋巴细胞 ;体外用HBV疫苗特异性CTL表位多肽S2 8 3 9 刺激 ;用特异性多肽S2 8 3 9、51 Cr标记的P815细胞作为靶细胞 ;4小时51 Cr释放实验检测CTL反应。结果 开始时随接种剂量增大CTL反应逐步增强 ,至 1 . 2 5 μg达到最大 ,以后又逐步减弱 ;加强免疫显著增强CTL反应。 结论 不同剂量HBV疫苗接种产生的CTL反应强弱不同 ,而且加强免疫能够提高CTL反应。

负载乳腺癌细胞冻融抗原的DC对CTL体外特异性杀伤活性的影响

目的:研究乳腺癌患者腋下淋巴结单个核细胞来源的DC,经自体肿瘤细胞冻融抗原刺激后,对CTL体外特异性杀伤活性的影响。方法:以细胞因子分别诱导、培养乳腺癌腋下淋巴结单个核细胞中的DC及TDLNC,用自体癌细胞冻融抗原刺激DC,并和TDLNC共培养,诱导成为肿瘤抗原特异性CTL;检测特异性CTL对自体乳腺癌细胞及MCF-7细胞的体外杀伤活性。结果:DC-Ag-TDLNC、DC-TDLNC和TDLNC对自体乳腺癌细胞的杀伤率分别为67.64%、31.25%和26.36%,P<0.001;三种TDLNC细胞对MCF-7细胞的杀伤率无明显差异(P>0.05)。结论:乳腺癌患者腋下引流淋巴结中的单个核细胞在细胞因子的诱导、活化及自体肿瘤抗原刺激下,可分化为成熟DC,DC可促进TDLNC增殖、分化为特异性CTL,后者对自体肿瘤细胞有较高的杀伤活性。

乳腺癌患者腋下淋巴结来源的DC诱导自体特异性CTL的实验研究

目的:研究乳腺癌患者腋下淋巴结单个核细胞来源的树突状细胞(DC)诱导抗原特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)的能力。方法:以多种细胞因子联合诱导腋下淋巴结单个核细胞中的贴壁细胞为DC,非贴壁细胞与IL-2共培养后诱导成为肿瘤区域引流淋巴结细胞(TDLNC),用自体乳腺癌细胞冻融抗原刺激DC,并和TDLNC共培养,以诱导肿瘤抗原特异性CTL。结果:淋巴结细胞经体外培养后,贴壁细胞在DC诱导前,其特异性表面标志物CD1a、CD83、CD86的百分比(%)分别为11.0±2.4、26.6±5.2和33.0±6.1,经与rhGM-CSF、rhIL-4共同培养,并经自体肿瘤冻融抗原加TNF-α诱导后3种标志物的水平升高,其百分比(%)分别为50.2±5.7、60.5±16.5和56.2±16.4(P<0.01)。TDLNC中CD3+和CD8+细胞含量(%)分别为73.9±2.2和32.8±3.2;经DC和肿瘤抗原诱导后,DC-Ag-TDLNC中的CD3+和CD8+细胞含量升高,其百分比(%)分别为82.7±2.8和62.5±2.5(P<0.01)。结论:乳腺癌患者腋下引流淋巴结中的单个核细胞在rhGM-CSF和rhIL-4刺激活化和自体肿瘤抗原及TNF-α的诱导下,可以分化为典型的DC。成熟的DC具有较强的抗原提呈功能,可以促进TDLNC增殖、分化为抗原特异性CTL。

乙型肝炎病毒特异性T细胞治疗慢性乙型肝炎的临床研究

据62例慢性乙型肝炎分组治疗观察,治疗组HBV DNA阴转率33.3％,对照组为11.1％,HBeAg阴转率和抗-HBe阳转率分别为44.4％和33.3％,对照组分别为13.3％和10.0％。治疗结束后半年随访HBV DNA、HBeAg阴转率和抗-HBe阳转率分别为50.0％、55.6％和44.4％。故认为HBV特异性细胞毒T淋巴细胞治疗,对慢性乙型肝炎可获满意临床效果。

乙型肝炎病毒感染者特异性细胞免疫的研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界流行趋势,是一个全球关注的健康问题,HBV作为一种非侵袭性嗜肝病毒,感染人体后并不直接损害肝脏,而是由其表达的抗原系统及其抗体所介导的特异性免疫反应和非特异性的以细胞因子为主的炎性介质导致的肝细胞损伤。特异性细胞免疫是清除机体内病毒的重要因素,针对HBV各类抗原表位的特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)作为主要的效应细胞,与病毒清除和细胞损伤有关,是当前研究的热点。本文就近年乙型肝炎病毒感染者特异性细胞免疫的研究现状作一综述。

负载肾癌肿瘤裂解物的树突状细胞诱导产生抗原特异性细胞毒T淋巴细胞

目的 利用树突状细胞呈递肿瘤抗原的特性提高细胞毒T淋巴细胞 (CTLs)对肾癌细胞的杀伤活性。 方法 肾细胞癌患者骨髓来源的有核细胞体外经GM CSF和IL 4诱导产生树突状细胞 ,负载肿瘤裂解物后诱导自体CTLs产生。用细胞毒试验和ELISA测定CTLs杀伤活性和细胞因子的分泌。 结果 肾癌患者自体来源的DC Tuly能 (1)增加CTLs增殖 ,16d时使T细胞增殖达 4 3倍 ;(2 )上调CTLs中CD3+ 和CD8+ T细胞群 ;(3)诱导产生的CTLs对自体肾癌细胞具有高杀伤率 ,显著高于异体肾癌和异种肿瘤细胞 (P <0 .0 5 ) ;(4)上调TNF α分泌。 结论 DCs能呈递Tuly抗原。诱导产生抗原特异性CTLs,提示DC

应用MAGE-1抗原肽体外诱导特异性细胞毒T淋巴细胞形成

目的探讨应用MAGE 1抗原肽治疗肝细胞肝癌 (HCC)的可行性。方法接受MAGE 1抗原九肽NYKCRFPEI孵育的外周血单个核细胞 (PBMC)经 30 0 0rad的射线照射后用作抗原呈递细胞 (APC) ,每隔 7d刺激HCC病人自体的PBMC 1次 ,进行混合淋巴细胞培养 (MLCs) ,共 4次后作为细胞毒T淋巴细胞 (CTL) ,应用乳酸脱氢酶 (LDH)释放分析法检测CTL对靶细胞的杀伤效应。结果从培养的第 1周至第 4周 ,淋巴细胞共增加至原细胞数的 32倍 ;在效应细胞∶靶细胞 (E∶T)为10∶1时 ,CTL对MAGE 1抗原九肽NYKCRFPEI孵育的自体淋巴母细胞的杀伤效应为 6 2 5 % ,对MAGE 1阳性、HLA A2 4阳性的HCC细胞株BEL740 5的杀伤效应为 40 2 % ,两者均明显高于对自体淋巴母细胞的杀伤效应 (17 9% )、和对MAGE 1阳性 ,HLA A2 4阴性的HCC细胞株HLE的杀伤效应(19 6 % ) ,及对MAGE 1阴性、HLA A2 4阴性的HCC细胞株QGY 770 1的杀伤效应 (1 6 % ) ;在E∶T为3 3∶1时 ,CTL对肽孵育的自体淋巴母细胞的杀伤效应为 5 3 6 % ,明显高于对自体淋巴母细胞的杀伤效应 (15 6 % )、对HLE的杀伤效应 (13% )和对QGY770 1的杀伤效应 (1% )。结论本实验结果表明 ,应用MAGE 1抗原肽NYKCRFPEI,能在体外从HCC病人的PBMC中有效地诱导出具有特异性杀伤能力的CTL。

HBV组织相容性复合物-抗原肽五聚体在特异性细胞毒T淋巴细胞检测中的应用

组织相容性复合物（MHC）-抗原肽五聚体（Pentamer）复合物是目前检测特异性细胞毒T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocytes，CTL）最为敏感而特异的方法之一，正被广泛应用于多种病毒感染性疾病发病机制的研究以及作为临床感染转归的预测指标。但由于外周血淋巴细胞中特异性CTL的数量非常低，对于如何确定特异性CTL频数存在相当大的困难。

经树突状细胞递呈的HBcAg特异性细胞毒T淋巴细胞的体外研究

目的 从人的外周血树突状细胞 (DC)的抗原递呈方面研究慢性乙型肝炎的发病机制 ,并诱导出针对HBcAg特异性的细胞毒T淋巴细胞 (CTL)。方法 取健康人DC和患者DC ,比较两组的抗原递呈功能是否存在差异。以HBcAg体外冲击致敏DC ,与自体T淋巴细胞共育 ,诱导出HBcAg特异性CTL ;以HepG2细胞为对照靶细胞 ,转染HBVDNA的HepG2 2 15细胞为靶细胞 ,分别测定CTL在效靶比为 2∶1、6∶1和 2 0∶1时对HepG2细胞的非特异性杀伤率及对HepG2 2 15细胞的特异性杀伤率 ,并比较患者组与正常组特异性杀伤率的差异。结果 患者DC的抗原递呈功能(10 99.2 6 7± 2 39.12 ,1374 .8± 36 4 .15 5 ,2 717.78± 15 89.72 )较健康人 (314 7.933± 72 6 .5 7,384 3.0 0 0±10 6 0 .85 ,5 4 86 .86 7± 1790 .6 4 )弱 ;健康组与患者组CTL对HepG2各效靶比的非特异性杀伤作用差异无显著性。健康组与患者组CTL对HepG2 2 15的特异性杀伤作用差异有显著性 ;患者组CTL的活性 (7.1± 4 .33,15 .6 8± 3.3,2 7.6 6± 4 .5 9)较健康组 (2 0 .76± 6 .0 8,33.97± 8.0 0 ,4 9.6 3± 9.4 8)弱。结论 用HBcAg体外负载患者DC ,能诱导出抗原特异性的CTL ,这些CTL能特异性地杀伤相应靶细胞。

EBV-CTL治疗异基因造血干细胞移植后难治性EB病毒感染的分析

目的研究EB病毒特异性细胞毒T淋巴细胞(EBV-CTL)治疗异基因造血干细胞移植后难治性EBV感染的疗效。方法报道4例EBV-CTL治疗异基因造血干细胞移植后难治性EBV感染病例并结合文献分析。结果 3例取得了较好疗效,分别于治疗后1、2、3个月转阴,分别随访8、12、6个月未复发,仅有1例在EBV-DNA转阴后第6个月复发,再次EBV-CTL治疗后,迅速进展为移植后淋巴细胞增殖性疾病(PTLD),治疗无效死亡。结论 EBV-CTL是治疗难治性EBV感染的一种有效手段,但仍有部分病例治疗无效,值得进一步探讨和研究。

激发型CD40单克隆抗体联合特异性细胞毒T淋巴细胞对B细胞淋巴瘤的免疫治疗作用

目的 研究激发型CD40单克隆抗体5C11联合特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）对B细胞淋巴瘤的免疫治疗作用。方法 人B细胞淋巴瘤Daudi细胞株经5C11刺激24或48h，Annexin V／PI结合实验测定凋亡率，流式细胞术检测Fas表达率。外周血单个核细胞来源的树突状细胞（DC），经凋亡Daudi细胞负载、5C11诱导成熟后，与自体T细胞混合培养，激发特异性CTL，JAM法检测5C11、CTL或5C11联合CTL对Daudi细胞的杀伤效应。皮下注射Daudi细胞，建立人源化SCID小鼠B细胞淋巴瘤模型；接种肿瘤细胞1周、3周后，分别经腹腔注射5C11、CTL、5C11＋CTL进行治疗，通过肿瘤生长曲线、荷瘤小鼠生存期评价疗效。结果 5C11作用后，Daudi细胞表面Fas的表达率显著上调，但细胞凋亡率没有明显改变。特异性CTL能有效杀伤靶细胞，且与5C11联合应用后，Daudi细胞DNA片段形成率显著增高，8h为71．9％±4．0％，12h达82．6％±4．4％。经5C11、CTL、5C11联合CTL治疗后，荷瘤小鼠体内肿瘤生长速度均显著减缓，而且在低肿瘤负荷小鼠中，CTL、5C11联合CTL治疗分别取得了30．0％和70．0％的完全缓解率，与对照组相比，各治疗组小鼠生存期显著延长。结论 激发型CD40单抗5C11可显著上调细胞表面Fas的表达，增强Daudi细胞对诱导凋亡的敏感性，从而促进肿瘤特异性CTL的体外杀伤和体内治疗效应。