CMV-pp65抗原检测在乙肝相关性肝癌患者中的临床意义

目的:调查乙肝相关性肝癌患者CMV-pp65抗原血症情况,探讨CMV-pp65抗原检测的临床意义。方法:采用免疫组化二步法和酶联免疫吸附反应法(ELISA)检测30例乙肝相关性肝癌患者CMV-pp65抗原和CMV特异性IgM抗体;同时检测18例健康体检者的CMV-pp65抗原设为对照组,采用卡方检验进行统计分析。结果:30例乙肝相关性肝癌患者中CMV-pp65抗原血症阳性13例,阳性率43.3%(13/30);CMV特异性IgM抗体阳性2例,阳性率6.7%(2/30),经卡方检验,χ2=10.756,P<0.01,对比组之间的差异具有统计学意义。对照组18例健康体检者CMV-pp65抗原血症阳性0例,经卡方检验,χ2=10.697,P<0.01,对比组之间的差异具有统计学意义。结论:乙肝相关性肝癌患者CMV-pp65抗原血症阳性率高,提示活动性CMV感染;CMV-IgM抗体检测不适合肝癌患者活动性CMV感染的早期诊断。

CMV-PP65抗原检测在婴儿巨细胞病毒性肝炎治疗中的意义

目的观察婴儿巨细胞病毒性肝炎患者治疗前后CMV-PP65抗原的变化。方法共有84例患儿纳入研究,根据临床表现及CMV-IgM、CMV-PP65和肝功检查结果确诊后给予更昔洛韦抗病毒治疗,同时给予护肝、利胆、退黄等对症治疗,依据CMV-PP65转阴、肝功恢复等情况决定停用或减量使用更昔洛韦。结果治疗前后患儿的总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量差异均有统计学意义(P<0.05),治疗前CMV-IgM和CMV-PP65阳性率差异有统计学意义(P<0.05);治疗前后CMV-PP65阳性细胞数分别为(10.69±4.28)个/2×105白细胞和2.23±1.25个/2×105白细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在CMV肝炎诊断中,CMV-PP65抗原检测比CMV-IgM检测更灵敏,可供治疗时参考。

^(35)S标记重组人GAD_(65)抗原检测糖尿病患者GAD-Ab指数

目的 建立一种新的谷氨酸脱羧酶抗体 (GAD Ab)检测方法。方法 采用重组人GAD6 5质粒 ,经试管内转录与翻译 ,获得35S GAD6 5抗原 ,35S GAD6 5与血清在自制旋转孵育器上旋转保温 ,以蛋白质A 琼脂糖作为沉淀剂 ,用计数仪测沉淀物放射性计数 ,以GAD Ab指数 >0 .0 5作为阳性标准 ,并检测 4 3例 1型和 2 2 6例 2型糖尿病患者 ,以及 10 9例正常对照者的GAD Ab水平。结果 检测条件优化 :采用SJ15 15型35S 蛋氨酸进行试管内转录与翻译 ,自制旋转孵育器转速控制在 2 0～ 30r min ,操作环境温度为 4～ 2 5℃ ,缓冲液最佳pH值为 7.2～ 7.4 ,且新配制使用不宜超过 2周 ,以及采用水平转头离心机等。该方法批内变异系数 (CV)为 4 .9%～ 8.3% ,批间CV为 7.1%～ 10 .8% ,特异性为 98.2 % ,结果与国际标准化实验室GAD Ab检测一致率 98.3% ,Kappa值 0 .971,优于原放射配位体法。该方法检测 1型糖尿病患者阳性率为 5 8.1% (2 5 4 3例 ) ,2型糖尿病患者为 10 .2 % (2 3 2 2 6例 ) ,对照组为1.8% (2 10 9例 ) ,差异均有显著性 (P <0 .0 0 1)。结论 该方法检测GAD Ab灵敏、特异性强、重复性好 ,可望得到广泛应用。

检测pp65抗原和IgM抗体对移植患者CMV活动性感染监测价值比较

目的 比较血pp6 5抗原和IgM抗体检测对移植患者巨细胞病毒 (CMV)活动性感染的诊断价值。方法 收集 5 8位移植患者的血标本 (共 2 0 8份 ) ,分离血浆和多形核白细胞 ,血浆用于CMVIgM抗体检测 (ELISA) ,白细胞用于pp6 5抗原血症检测(荧光免疫组化 )。同时随机取部分血浆标本进行荧光定量PCR分析 ,检测CMVDNA。结果 pp6 5抗原阳性细胞数与CMVDNA拷贝数呈正相关 (r=0 .87) ,也与病人的临床症状密切相关 ,可用于监测移植患者CMV的活动性感染。IgM抗体与pp6 5抗原阳性的一致率为 2 1.2 % ,对CMV感染的敏感性为 2 2 .3% ,特异性为 95 .6 %。结论 pp6 5抗原阳性细胞数能反映CMV的数量 ,可监测CMV活动性感染 ,检测方法特异、灵敏、操作简单 ,适宜临床实验室应用。血清IgM抗体检测因为敏感性较低 ,不适用于移植患者CMV活动性感染的监测。

人巨细胞病毒pp65抗原血症检测方法的建立和初步临床应用

目的 建立人巨细胞病毒抗原 pp6 5 (HCMVpp6 5 )血症特异、灵敏和低成本的酶免组化和荧光免疫组化方法 ,以利于临床推广应用。方法 以HCMV AD16 9感染的人胚肺成纤维细胞 (HELF)爬片作阳性对照 ,选择试剂和材料组建试剂盒 ,并与商品化的同类试剂盒作比较 ,建立人外周血多形核白细胞 (PMNLs)中HCMVpp6 5抗原阳性细胞的检测方法 ,然后再用荧光定量PCR(FQ PCR)方法做相应考评。 结果 我们建立的HCMVpp6 5抗原血症检测法能成功地检出PMNLs中的 pp6 5阳性细胞。其可检测限分别为 10 2 pfu/ml的AD16 9攻击 2 4h后的HELF细胞爬片和 3～ 5个 pp6 5阳性细胞 / 2× 10 5PMNLs ;用高相对分子质量 (5 0 0 0 0 0 )的葡聚糖能快速、有效地分离PMNLs ;用 4 %中性多聚甲醛固定的细胞片 ,于 - 2 0°C或以下可长期保存 (≥ 6个月 ) ,而且 pp6 5抗原性稳定。 结论 自建的试剂盒与同类进口试剂盒相比 ,检测 pp6 5的结果差异无显著性 ,并与FQ PCR的检测结果相一致 ,其检测特异、灵敏、操作简单、费用低廉 ,适宜临床实验室推广应用。

外周血白细胞HCMV PP65抗原检测结果分析

目的分析外周血白细胞巨细胞病毒(HCMV)PP65抗原检测结果,总结儿科常见疾病的HCMV感染情况及HCMV感染所致临床疾病的分布情况。方法采用间接免疫荧光法检测了1016例儿童外周血白细胞HCMVPP65抗原,对检测结果及阳性病例进行分析。结果所有送检标本总阳性检出率为25.2%,以肝炎、婴儿肝炎综合征组患儿阳性检出率最高,分别为37.8%、32.4%。CMV感染可累及全身各个系统,引起疾病多样,但以婴儿肝炎综合征最多见(37.1%),其次为高胆红素血症(12.9%)、急性呼吸道感染(10.9%)、腹泻(9.4%)、发热待查(6.6%)、肝炎(5.5%)等。结论HCMV感染临床上常见,症状多样,临床医生对可疑病例应及早作相应的实验室检查,以助于早期临床诊断,并指导有效的治疗。

肾移植受者外周血白细胞CMV抗原阳性细胞数及意义

【目的】探讨肾移植受者外周血白细胞巨细胞病毒 (CMV)PP 6 5抗原阳性细胞数的变化及意义。【方法】用免疫细胞化学法检测外周血白细胞CMV PP6 5抗原 ,术后头 3个月每周 1次。【结果】 2 73例肾移植受者中 12 4例术后检出CMV PP6 5抗原阳性 ,初次检出CMV PP6 5抗原的平均时间为 ( 2 4 1± 11 3)d ,每 5万白细胞中CMV抗原阳性细胞数均值为 7 1± 5 8,其中 5例CMV抗原阳性细胞数超过 10 /5万白细胞。无症状性和症状性CMV感染受者初次检出CMV抗原阳性细胞数分别为 ( 6 7± 5 6 ) /5万白细胞、( 10 1± 9 3) /5万白细胞 (P >0 0 5 ) ;峰值水平为 ( 8 1± 4 2 ) /5万白细胞、( 2 6 3± 5 7) /5万白细胞 (P <0 0 5 ) ;分别有 17例 ( 15 % )、12例 ( 10 0 % )患者其峰值超过 10 /5万白细胞 (P <0 0 5 )。抗病毒治疗中 90例( 72 6 % )患者CMV抗原阳性细胞数进一步升高。【结论】肾移植受者在CMV感染早期病毒复制能力强 。

异基因骨髓移植中巨细胞病毒的临床检测

在异基因骨髓移植中 ,巨细胞病毒 (CMV)感染常可引起致命危险及移植失败 ,因而探索早期准确检测CMV感染的有效实验手段至关重要。本文介绍了传统的CMV的培养法及近年来发展起来的抗原检测方法和分子生物学方法。

CMV-DNA和IgM抗体检测对慢性重型乙型肝炎患者活动性巨细胞病毒感染的诊断价值评估

目的评估CMV-DNA和IgM抗体检测对慢性重型乙型肝炎患者活动性巨细胞病毒感染的诊断价值。方法 100例慢性重型乙型肝炎(CSHB)患者采用免疫组化二步法检测CMV-pp65抗原、荧光定量PCR法检测CMV-DNA及酶联免疫吸附反应法(ELISA)检测CMV-IgM抗体,以CMV-pp65抗原为对照,分析比较不同检测方法的差异性。结果 100例CSHB患者CMV-DNA阳性27例,阳性率为27%(27/100);CMVpp65抗原阳性45例,阳性率为45%(45/100);差异有统计学意义(P<0.05)。CMV-IgM抗体阳性4例,阳性率为4%(4/100),明显低于CMV-pp65抗原和CMV-DNA阳性率(均P<0.05)。CMV-pp65与CMVDNA诊断一致性分析采用Kappa检验,Kappa值为0.483,在0.4~0.7之间,表示吻合程度一般。CMVDNA诊断巨细胞病毒感染的灵敏度为0.486,特异度为0.906;CMV-IgM抗体诊断巨细胞病毒感染的灵敏度为0.064;特异度为0.981。CMV-DNA诊断巨细胞病毒感染的ROC曲线下面积(AUC)为0.687,P=0.001;IgM抗体诊断巨细胞病毒感染的AUC为0.522,P=0.699。结论 CMV-DNA诊断慢性重型乙型肝炎患者合并活动性巨细胞病毒感染的价值不如CMV-pp65抗原,但CMV-DNA可作为CMV-pp65抗原诊断的对照和补充,而CMV-IgM抗体无诊断价值。

器官移植后巨细胞病毒的院内感染:检测与监测

背景:巨细胞病毒是器官移植患者最易感染的机会性病毒之一,严重者可导致移植器官失去功能甚至危及生命,因此早期准确诊断巨细胞病毒感染是临床治疗的关键。目的:对器官移植后巨细胞病毒感染的检测方法、准确程度、检测时间和临床意义分析。方法:通过计算机分别检索维普数据库、Pub Med数据库和中国知网数据库2007年1月至2014年12月有关器官移植和巨细胞病毒感染的文献,以及通过手工查阅书籍,以"transplantation,cytomegalovirus"为英文检索词,"器官移植,巨细胞病毒"为中文检索词。共检出中文31篇,英文1 894篇,选择代表性好、相关领域权威杂志的文献共35篇做进一步分析。结果与结论:对巨细胞病毒活动性感染的无创检测仍然是以巨细胞病毒-pp65抗原为主,该方法可以准确反映巨细胞病毒感染的状况,敏感性和特异性均较好,也是临床上最具诊断价值的方法。对巨细胞病毒的分子进行生物学检测可以从可以帮助检出潜在的感染人群,而且其检出时间比巨细胞病毒-pp65抗原早,适用于巨细胞病毒感染的早期诊断和抢先给药治疗。定量核酸检测技术可通过定量的分析巨细胞病毒-DNA的拷贝数判断患者体内的病毒含量,为判断隐性感染的患者提供了更为灵敏的监测方案。血清中巨细胞病毒-IgG和巨细胞病毒-IgM可以判断器官移植受者是否感染过巨细胞病毒以及后期的发病风险。病毒培养以及组织学的检测已经沿用数年,这两者是检测巨细胞病毒的金标准,但这些方法对于早期发现感染和诊断活动性感染意义不大。免疫学检测方法为诊断巨细胞病毒感染提供了新的思路,巨细胞病毒特异性的细胞的监测可以从早期、动态、准确的监测巨细胞病毒在体内的发展,评估巨细胞病毒发病风险,为巨细胞病毒感染的诊断发展提供新途径。

流式细胞术检测PP65抗原血症在诊断巨细胞病毒感染上的应用

目的 探讨流式细胞技术检测PP6 5抗原血症对巨细胞病毒 (CMV)感染的诊断价值。方法 对 136例CMV感染患儿流式细胞技术检测血PP6 5抗原、实时荧光定量PCR(RFQ PCR)检测尿CMVDNA及血清ELISA法检测CMVIgM ,比较 3种方法的检测结果 ,并以 35例非CMV感染的患儿作为PP6 5检测的阴性对照。对 18例PP6 5抗原阳性患儿进行短期随访。结果 136例CMV感染患儿从血单个核细胞 (MNC)中检出PP6 5抗原 118例 (118/ 136 ,阳性率 86 8% )。其中 5 3例患儿分别作MNC和多形核白细胞 (PMNL)检测 ,从MNC中检出PP6 5抗原 4 5例 (45 / 5 3,阳性率 84 9% ) ,PMNL中检出PP6 5抗原 4 3例 (43/ 5 3,阳性率 81 1% ) ,MNC与PMNL阳性率差异无统计学意义 (χ2 m=0 2 5 ,P >0 0 5 )。PP6 5与尿CMVDNA2种方法所检测的结果间差异无统计学意义 (χ2 m=1 78,P >0 0 5 ) ;但PP6 5与血CMVIgM检测结果间差异有统计学意义 (χ2 m=5 2 92 ,P <0 0 1)。PP6 5抗原水平与CMV感染的病情程度有明显相关性 ,全身性感染通常伴高水平抗原血症 ,单脏器感染抗原水平相对较低或阴性(χ2 =38 5 1,P <0 0 0 5 )。PP6 5在感染恢复期转为阴性或低水平 ,病情恶化时明显增高。结论 流式细胞技术检测PP6 5抗原血症是诊断活动性CMV感染的有效手段 ,量化结?

pp65抗原血症检测法诊断婴儿巨细胞病毒感染的研究

目的 探讨pp6 5抗原血症检测方法 (AA)对新生儿和小婴儿巨细胞病毒 (CMV)感染的诊断价值。方法 对 2 1例有典型CMV感染症状患儿及 42例无典型症状的患儿 ,进行外周血AA、尿PCR及血清ELISA法IgM检测 ,比较 3种方法的检测结果 ,结合抗原血症的量化结果及对部分患儿的短期随访 ,分析AA的临床应用价值。结果 (1) 6 3例中CMV症状性感染 15例 ,亚临床型感染 8例。症状性感染组AA、PCR、ELISA阳性检出率分别为 93% (14/ 15 )、10 0 % (15 / 15 )和 80 % (12 / 15 ) ;亚临床型感染组阳性检出率分别为 5 0 % (4/ 8) ,75 % (6 / 8)和 38% (3/ 8)。AA相对于PCR的敏感性为 86 %(18/ 2 1) ,特异性为 10 0 %。 (2 )症状性感染通常伴高水平抗原血症 [(4～ 2 0 6 )个 / 1 5× 10 5多形核白细胞 (PMNL) ],亚临床型感染通常抗原血症水平较低 [(0～ 3)个 / (1 5× 10 5)PMNL],症状性感染组抗原血症水平明显高于亚临床型感染组 (P <0 0 1)。 (3)症状性感染组中 4例婴儿肝炎患儿恢复期AA转为阴性或低水平。结论 pp6 5抗原血症检测方法是一种敏感、特异的检测方法 ,量化结果有助于诊断活动感染及监测病情。

巨细胞病毒pp65抗原血症检测

目的 评估巨细胞病毒 (CMV) pp6 5白细胞抗原血症在骨髓移植或外周血干细胞移植后活动性CMV感染早期诊断和CMV病的预测、指导CMV亚临床期感染的抗病毒治疗及抗病毒疗效判断中的价值。方法 1999年 9月～ 2 0 0 0年 4月共收集 2 10份乙二胺四乙酸 (EDTA)抗凝血 ,骨髓移植或外周血干细胞移植患者 36例。移植前用ELISA法检测患者CMV特异性抗体IgG和IgM ,移植后 3周起采用CMVBrite试验盒每周检测 1次CMV pp6 5抗原血症 ,并计数抗原阳性细胞 ,直到移植后 10 0d或治疗后抗原阴转、死亡或出院。移植后患者第 1次检测到 pp6 5抗原阳性细胞即开始更昔洛韦抗病毒治疗。结果 36例骨髓移植或干细胞移植患者于移植前CMV特异性抗体IgG均阳性 ,IgM均阴性 ;移植后 16例出现CMVpp6 5抗原血症 ,其中 15例出现有症状的CMV感染或CMV病 ,14例接受更昔洛韦抗病毒治疗 ,12例治疗后抗原血症阴转、症状消失 ,死亡 2例 (病死率 14.2 % ) ,未经抗病毒治疗者 2例均死亡 (P <0 .0 1)。 16例 pp6 5抗原阳性患者中 ,仅 2例CMV特异性抗体IgM阳性。 10名健康对照组的CMV特异性抗体IgG均阳性 ,IgM均阴性 ,pp6 5抗原血症检测均阴性。结论 本研究结果提示 ,人CMV pp6 5白细胞抗原血症检测可作为骨髓移植后CMV病的预测指标 。

抗人巨细胞病毒pp65抗原单克隆抗体的制备及检测方法

巨细胞病毒（CMV）属疱疹病毒科，其中使人致病的为人巨细胞病毒（HCMV），又名人疱疹病毒5型（HHV5）。CMV在人群中的感染非常普遍，人感染病毒后，多数可长期带毒成为潜伏感染。在免疫缺陷患者和接受免疫抑制治疗的器官移植患者，可产生广泛的CMV复发性感染。因此，建立快速、特异的早期检测方法具有重要意义。

婴儿巨细胞病毒肺炎3例及文献回顾

目的探讨婴儿巨细胞病毒肺炎的临床特点。方法总结3例巨细胞病毒肺炎的临床症状并进行文献回顾。结果均表现为不同程度的气促、呼吸困难伴或不伴有发热、无咳嗽、咳痰或仅有轻度咳嗽。3例CMV-lgM(+),2例CMV-P65抗原检测(+),1例尿找到巨细胞包涵体,同时伴有肝功能损害,胸部CT显示特征性弥漫分布的磨玻璃样影像学改变,1例出现中枢神经系统的损害。结论应提高对巨细胞病毒肺炎的认识,早期诊断,及时治疗。

巨细胞病毒-PP65抗原监测在预防肾移植术后巨细胞病毒病中的应用

目的 探讨巨细胞病毒（ＣＭＶ）－ＰＰ６５抗原检测在肾移植术后ＣＭＶ病预防中的应用。方法采用免疫过氧化物酶法检测肾移植受者外周血白细胞ＣＭＶ－ＰＰ６５抗原，术后３个月内每周１次。结果１００例肾移植受者中４２例检出ＣＭＶ－ＰＰ６５抗原阳性，初次检出ＣＭＶ－ＰＰ６５抗原的平均时间为（２３．６±１６．７）ｄ，平均抗原阳性细胞数为（７．８±５．３）个／５ ×１０４白细胞。抗病毒治疗中１８例抗原阳性细胞数进一步升高，平均峰值为（１６．４０±３．１）个。５８例抗原血症阴性的受者仅１例发生ＣＭＶ病。４２例ＣＭＶ－ＰＰ６５抗原血症阳性受者抗病毒治疗后抗原血症均阴转，１例发展为ＣＭＶ病，平均阴转时间为（２４． ６±１１． ３） ｄ，平均疗程为（３４． ２±７．１） ｄ。结论 ＣＭＶ－ＰＰ６５抗原监测可指导肾移植术后ＣＭＶ病的预防性治疗。

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65重组抗原酶联免疫吸附法的建立与两种方法的比较分析

目的用我们研制的一种新人巨细胞病毒(HCMV)重组被膜磷蛋白pp65为抗原,建立快速、简便和特异的检测HCMVIgM的间接酶联免疫吸附法(RECELISA)。方法用自行设计、表达的新的HCMVpp65重组抗原,建立RECELISA,并检测100份临床疑似为HCMV感染者血清中HCMVIgM,同时与全病毒为抗原的间接ELISA法(简称全病毒ELISA法)和美国BioCheck试剂盒(简称BioCheck法)检测结果进行比较。结果RECELISA法重组抗原最适量为3.5μg/孔,HRP标记二抗为1∶800,血清稀释度为1∶100;稳定性试验阳性变异系数(CV)为9.5%,重复性试验平均CV值:批内CV4.5%,批间CV9.6%。RECELISA法、全病毒ELISA法和BioCheck法检测HCMVIgM的阳性率分别为44%、50%和45%;RECELISA法的敏感性为95.6%,其特异性(98.2%)高于全病毒ELISA法(90.9%);正确指数为92.8%,与BioCheck法一致性为97.0%。结论用pp65重组抗原建立的RECELISA法具有高度特异性与敏感性,且操作简单、快速,重复性好;与全病毒抗原相比,重组抗原可规模化、标准化生产,且更安全、经济,具有良好的临床应用前景。