生孢噬纤维菌CMcase基因的分离与表达

从生孢噬纤维菌中分离完整的基因组DNA,经过PstI限制性内切酶部分酶切后,在T4DNA连接酶作用下,将酶切的片段连接到载体pUC18的PstI位点中,然后转化到E.coli DH5α中,构建了基因组文库,经过筛选获得4.2x103个重组子。经过刚果红平板筛选获得了含有CMCase基因片段的重组子,在E.coli中进行表达,E.coli在37℃培养25~30h,培养液中CMCase活力达到22.8U/mL。

野油菜黄单胞菌S-152内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

以质粒ｐＵＣ９为载体，大肠杆菌ＪＭ８３为宿主菌，用鸟枪法克隆到纤维素降解细菌野油菜黄单胞菌Ｓ－１５２的内切葡聚糖酶（ＣＭＣａｓｅ）基因，克隆到的ＣＭＣａｓｅ基因位于２７ｋｂ的ＨｉｎｄⅢ片段上，该重组质粒命名为ｐＵＣ９Ｈ－１。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交分析结果显示所克隆到的内切葡聚糖酶基因与野油菜黄单胞菌染色体ＤＮＡ有亲和性。对克隆株的酶学性质分析表明，其ＣＭＣａｓｅ活力为０３１０μｍｏｌＧｌｕ／ｍｇ蛋白·分钟，最适作用ｐＨ为６４，最适作用温度为５５℃。