PI3K/Akt/FoxO3a信号通路对人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨FoxO3a对体外培养的人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞增殖及凋亡的影响是否是通过PI3K/Akt信号通路。方法通过使用LY294002特异性抑制PI3K的活性,免疫印迹法检测FoxO3a及p-Akt蛋白在人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞的表达,免疫荧光化学检测FoxO3a在鼻咽癌细胞中的亚细胞定位,实时荧光定量PCR检测FoxO3a的mRNA表达水平,MTT法检测鼻咽癌细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测鼻咽癌细胞的凋亡率。结果通过使用PI3K特异性抑制剂LY294002,FoxO3a在实验组人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞中的蛋白和mRNA表达水平均高于对照组(P<0.05),且在CNE-1(P=0.004)、CNE-2(P=0.001)细胞核内的表达量高于对照组,FoxO3a的上调可抑制人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞的增殖(P<0.05),促进其凋亡(P<0.01)。结论通过抑制PI3K/Akt信号通路的活性可上调人鼻咽癌CNE-1、CNE-2细胞FoxO3a基因的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与其对FoxO3a的调控有关。

紫杉醇联合热疗对鼻咽癌CNE-1细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨紫杉醇(Paclitaxel)联合热疗对鼻咽癌细胞株CNE-1增殖及凋亡的影响,为临床紫杉醇与热疗联合应用提供实验依据。方法将不同温度(39℃、41℃和43℃)及不同浓度(0.01、0.10、1.00、10.00和100.00nmol/L)紫杉醇采用分组设计(共15个组),各浓度组设37℃为对照组(共5个组)。在紫杉醇对CNE-1细胞作用48h后加热30min,使用MTT法、克隆形成能力试验、细胞形态学、超微结构观察及琼脂糖凝胶电泳等方法测定紫杉醇联合热疗对CNE-1细胞体外增殖抑制及细胞凋亡的影响。结果加热41℃组细胞增殖率与其他不同温度同剂量组比较均降低,差异有显著性。与其他各组比较均降低,差异均有显著性(P<0.05);39℃和43℃组细胞增殖率与37℃对照组比较均升高,差异有显著性(P<0.05)。琼脂糖凝胶电泳显示紫杉醇作用48h后便可出现DNA梯带,并呈时间剂量性增强。最低0.10nmol/L浓度可见DNA梯带。倒置显微镜和电镜下可见细胞损伤及凋亡细胞。结论加热41℃时不同浓度紫杉醇对CNE-1细胞均有增殖抑制及诱导细胞凋亡作用;39℃或43℃热疗联合0.01nmol/L紫杉醇化疗时CNE-1细胞增殖能力最强。

新藤黄酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡以及对p-p38和p-ERK1/2蛋白的影响

目的探讨新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡的作用以及对磷酸化p38、p-ERK1/2蛋白的影响。方法倒置显微镜观察新藤黄酸不同时间和不同浓度处理CNE-1细胞形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度新藤黄酸(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0μmol.L-1)处理24 h、48 h和72 h对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用;新藤黄酸作用CNE-1细胞24 h后的IC50为2.34μmol.L-1,再结合倒置显微镜观察的结果故选用2.0μmol.L-1作为药物作用浓度。Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,并应用透射电子显微镜检测细胞凋亡形态改变及线粒体损伤;Western blot检测p-p38、p38、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白和线粒体凋亡相关蛋白Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达。结果新藤黄酸对人鼻咽癌细胞CNE-1生长和增殖有抑制作用,并随着新藤黄酸浓度的增加或作用时间的延长细胞活力明显下降。通过电镜可见2.0μmol.L-1新藤黄酸作用CNE-1细胞后细胞体积皱缩变圆,细胞核发生典型核染色质固缩等细胞凋亡形态学的变化;与control组相比包括对线粒体的损伤。Western blot表明p-p38蛋白表达有所上调,特别是在短时间(120 min)内,p-ERK1/2蛋白表达呈现时间依赖性下降;而p38和ERK1/2表达则基本不变。Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达也呈现时间依赖性增加。结论新藤黄酸能诱导人鼻咽癌细胞CNE-1凋亡,增强Cytochrome C和Caspase-3蛋白表达,同时对p-p38和p-ERK1/2蛋白也有影响。

低渗诱导高分化鼻咽癌细胞CNE-1容积激活性氯电流

目的:研究细胞外低渗诱导的高分化鼻咽癌细胞CNE-1的容积激活性氯电流。方法:全细胞膜片钳记录氯电流,通过应用氯通道阻断剂、离子置换和改变细胞容积方法研究该电流的特性。结果:当细胞在等渗环境中背景电流微弱且稳定,细胞外给予47%低渗刺激后电流迅速增大,呈外向优势,对阴离子通透性的大小为:I->Br->Cl->葡萄糖酸。氯通道阻断剂ATP和NPPB可逆性地抑制此电流,ATP的抑制作用在外向电流显著强于内向电流。此电流对细胞容积改变敏感,细胞肿胀时被激活,细胞发生皱缩时则被抑制。结论:细胞外低渗诱导CNE-1细胞产生氯电流,此电流对细胞容积的改变敏感,在CNE-1细胞容积调节中起重要作用。

人鼻咽癌细胞株CNE-1放射生物学参数的测定

目的：测定人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ－１的各项放射生物学参数Ｄ０，Ｄｑ，ｎ，α／β，ＳＦ２。方法：应用集落形成法检测人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ－１在不同放射剂量照射下的细胞存活率，通过单击多靶模型和线性二次模型拟合绘制细胞存活曲线，求出Ｄ０，Ｄｑ，ｎ，α／β比值，以及ＳＦ２等放射生物学参数。结果：（１）由单击多靶模型求出Ｄ０＝０．８４Ｇｙ，Ｄｑ＝２．１９ Ｇｙ，ｎ＝１３．５７，ＳＦ２＝０．７３２；（２）曲线性＝次模型求出α＝０．２６０ ＧＹ－１，β＝０．０７５ Ｇｙ－２，α／β＝３．４４ Ｇｙ，ＳＦ２＝０．４４。结论：人鼻咽癌细胞株ＣＮＥ－１ Ｄ０值及 ＳＦ２值较大，其对放疗相对不敏感。

紫杉醇对鼻咽癌CNE-1细胞株作用的研究

目的探讨紫杉醇对鼻咽癌细胞株CNE-1生长抑制及诱导凋亡作用。方法应用肿瘤细胞培养技术,随机分组和空白对照设计,观察紫杉醇对CNE-1生长抑制的剂量和时间效应;培养不同时间后,用MTT法、集落形成能力测定、流式细胞仪检测分析观察细胞周期分布和凋亡发生率。结果紫杉醇为1.0×10-9低浓度时细胞生长受到明显影响,1.0×10-8浓度组的细胞生长受到明显抑制(P<0.05)。并且存在时间关系和一定范围内的剂量依赖关系。细胞周期分析结果显示;在中等或低浓度紫杉醇作用下,CNE-1细胞被阻止于G0/G1期,并能诱导细胞发生凋亡。在紫杉醇的短时间作用去除后再培养比持续作用培养更易促使细胞凋亡。结论鼻咽癌细胞株CNE-1对紫杉醇是高度的敏感,能使细胞生长阻止于G0/G1期,并诱导细胞凋亡,为紫杉醇治疗鼻咽癌提供实验依据。

重组促凋亡蛋白TFAR19对CNE-1细胞凋亡影响的初步研究

目的探讨重组凋亡蛋白TFAR19对鼻咽癌细胞株CNE-1的促凋亡效应。方法将不同浓度的高纯度重组凋亡蛋白TFAR19分别和人类鼻咽癌细胞株CNE-1共同培养,通过细胞形态学观察,TUNEL检测及DNA片断化分析,观察TFAR19对细胞的促凋亡效应。结果不同浓度TFAR19蛋白均可促进细胞凋亡,加入5、10、15、20、30 mg/L的TFAR19蛋白后,鼻咽癌细胞株CNE-1的凋亡率分别是:15.26%、29.48%、37.11%、54.20%、72.36%。阴性对照组的细胞凋亡率为12.40%。结论TFAR19蛋白可直接进入CNE-1细胞并明显促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性。

烟酰胺对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡与迁移作用机制研究

目的探讨烟酰胺对人鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡及迁移的影响和机制。方法将人鼻咽癌CNE-1细胞株分为烟酰胺处理组(10、20、40、80μmol/L烟酰胺)及对照组。CCK-8法检测不同浓度烟酰胺作用48、72 h后CNE-1细胞增殖率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测40μmol/L烟酰胺作用48 h后CNE-1细胞凋亡率和细胞周期,Transwell小室实验检测CNE-1细胞迁移及侵袭能力的变化,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测CNE-1细胞中p53蛋白和基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA和蛋白水平。结果与对照组相比,CCK-8法检测结果显示,烟酰胺处理组CNE-1细胞增殖抑制率升高(P<0.01),且随着烟酰胺处理浓度的升高和处理时间的延长而升高,呈浓度和时间依赖性;40μmol/L烟酰胺处理CNE-1细胞48 h(即40μmol/L实验组)后,CNE-1细胞凋亡率升高(P<0.01);40μmol/L实验组G2/M期细胞比例增加,G_(0)/G_(1)期细胞比例降低(P<0.05);CNE-1细胞经40μmol/L烟酰胺处理后其侵袭及迁移能力均下降(P<0.01);40μmol/L实验组p53蛋白表达水平升高,MMP-9蛋白表达水平下降。结论烟酰胺可通过上调p53蛋白的表达、恢复细胞周期从而抑制人鼻咽癌CNE-1细胞增殖,促进其凋亡,同时亦可影响MMP-9蛋白的表达进而降低CNE-1细胞迁移和侵袭能力。

吉西他滨对人鼻咽癌细胞系CNE-1的放射增敏作用

目的:观察吉西他滨对鼻咽癌细胞CNE-1的放射增敏作用并探讨其作用机理。方法:用克隆形成法制作不同处理条件的细胞存活曲线,用流式细胞仪分析测定细胞周期分布。结果:单纯用药0.1μmol/L和2μmol/L吉西他滨短时间作用时(12小时)未见到肿瘤细胞毒性作用。两个浓度的吉西他滨处理CNE-1鼻咽癌细胞12小时和24小时后均见到放射增敏作用,放射增敏比(SERD0)及2Gy时的放射增敏比(SERSF2)分别为1.36,1.83;1.56,2.16及1.55,1.36,1.43,1.40。0.1μmol/L和2μmol/L的吉西他滨作用24小时后照射均见到G1期细胞阻滞。准阈剂量(Dq)值在2μmol/L中比较低,特别是在作用24小时后照射组。结论:吉西他滨对CNE-1鼻咽癌细胞具有明显的放射增敏作用,并且在高剂量照射时(Gy)随着剂量的增加及作用时间的延长增敏作用愈加明显,其作用机制可能与该药能阻止细胞由G1期进入S期及在高浓度、长时间作用时亚致死性损伤修复比较少有关。

埃克替尼对人鼻咽癌CNE-1细胞的放射增敏作用

目的探讨埃克替尼对人鼻咽癌离体细胞系CNE-1的放射增敏作用及机制。方法通过实验室对人鼻咽癌CNE-1进行细胞培养,对不同浓度埃克替尼及不同剂量放疗治疗进行实验分组。利用多靶单击数学模型拟合放射剂量-细胞存活曲线,用MTT法观察药物对体外培养的鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的影响,用荧光染色法检测凋亡细胞。采用流式细胞术分析药物对CNE-1细胞周期的影响,高倍光镜下观察细胞形态。结果埃克替尼作用后,0.094μmol/L,0.188μmol/L,0.376μmol/L的放射增敏比分别为1.095,1.433,1.639,呈药物浓度依赖性。通过流式细胞仪检测,在药物浓度增加情况下,在4 Gy照射下可使周期中G0/G1有所增高(P<0.05),S期所占比率降低(P<0.05)。药物与放射联合的情况下,细胞凋亡比率增加明显,差异具有统计学意义(P<0.05)。凋亡指数与药物剂量及放射剂量具有明显相关性(P<0.05),并且在两者联合的情况下,凋亡的程度有叠加(P<0.05)。结论埃克替尼对鼻咽癌离体细胞系CNE-1有明显的放射增敏效益,放射增敏机制与埃克替尼抑制肿瘤细胞的再修复能力,改变细胞分裂周期中分布,从而增加细胞凋亡率有关。

照射诱发 CNE-1 细胞株凋亡观察

照射诱发ＣＮＥ－１细胞株凋亡观察陈晓品何少琴冯炎（上海医科大学肿瘤医院放疗科２０００３２）凋亡是细胞死亡的形式之一，在许多生理和病理过程中出现并发挥重要作用［１，２］。近年的研究发现，凋亡与肿瘤的发生、发展和治疗有密切关系，肿瘤接受细胞毒药物、照射、...

蟛蜞菊提取物对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和细胞周期的影响

目的通过体外实验研究蟛蜞菊提取物(WE)对人鼻咽癌细胞株CNE-1细胞的增殖抑制作用,并进一步研究其作用机制。方法蟛蜞菊70%乙醇提取物,通过硅胶柱梯度洗脱,100%甲醇洗脱部位即为WE。采用噻唑蓝(MTT)比色法测定WE对CNE-1细胞生长增殖的影响;采用Hoechst33528染色观察WE对细胞凋亡的影响;采用流式细胞仪技术检测WE对CNE-1细胞周期及细胞凋亡的影响;采用p38特异性抑制剂SB203580干预的方法检测p38活性与WE处理后CNE-1细胞周期变化的关系。结果随着WE质量浓度的增加和作用时间的延长,CNE-1细胞存活率显著降低(P<0.05)。随着WE质量浓度的增加,CNE-1细胞出现明显的G2/M期阻滞。形态学观察可见WE处理CNE-1细胞48h后细胞数量减少,部分细胞细胞核发生皱缩。p38特异性抑制剂SB203580干预后,CNE-1细胞周期分布恢复正常。结论 WE通过p38蛋白使CNE-1细胞发生G2/M期阻滞,从而抑制CNE-1细胞的增殖。

抑制Polo样激酶1对鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2辐射敏感性的影响

目的分析讨论Polo样激酶1(PLK1)抑制后对鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2辐射敏感性的具体影响。方法 30只荷瘤小鼠,随机分为对照组、观察1组和观察2组,各10只。对照组荷瘤小鼠不做任何处理,观察1组荷瘤小鼠采用放射治疗,观察2组荷瘤小鼠采用放射治疗。对比三组荷瘤小鼠Polo样激酶1和肿瘤生长情况,分析Polo样激酶1和肿瘤生长相关性。结果观察2组Polo样激酶1(0.9±0.2)μg/ml和肿瘤生长(0.4±0.1)cm低于对照组的(2.5±0.4)μg/ml、(1.0±0.2)cm和观察1组的(1.4±0.5)μg/ml、(0.7±0.2)cm,差异有统计学意义(P<0.05)。Polo样激酶1和肿瘤生长呈正相关(r=0.836,P<0.05)。结论采用剂量3 Gy/次,1次/3 d的放射治疗能显著降低小鼠Polo样激酶1水平,并限制肿瘤生长,并且可以发现肿瘤生长与Polo样激酶1呈正相关。

葛根素对人鼻咽癌CNE-1细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨葛根素对人鼻咽癌CNE-1细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其与氧化应激的关系。方法以不同浓度葛根素(0、25、50、100μM)处理CNE-1细胞48 h,采用CCK-8法及流式细胞仪分别检测细胞增殖及凋亡,同时检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性。结果不同浓度葛根素均可抑制CNE-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并增加细胞ROS及MDA含量,抑制T-SOD活性,且葛根素对CNE-1细胞的以上作用随其浓度的增加而增强。结论葛根素可抑制CNE-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,作用机制可能与其促氧化应激有关。

雷公藤甲素促进人鼻咽癌CNE-1细胞凋亡及机制

目的探讨雷公藤甲素促进人类鼻咽癌CNE-1细胞凋亡的机制。方法 MTT法检测雷公藤甲素对CNE-1的细胞毒作用;Hoechst 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变;Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果雷公藤甲素对CNE-1有强大的细胞毒作用,IC50为0.029±0.007μmoL/L;该化合物可浓度依赖性地诱导CNE-1细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体及细胞凋亡相关蛋白Caspase-3的裂解活化。结论雷公藤甲素可浓度依赖性地诱导人鼻咽癌CNE-1细胞发生凋亡,且与Caspase-3的裂解活化有关。

鹅不食草提取物对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖抑制和凋亡诱导作用

考察鹅不食草提取物对人高分化鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用,初步探讨其抗鼻咽癌分子机制。95%乙醇提取鹅不食草全草,噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度提取物在不同时间对人高分化鼻咽癌细胞CNE-1增殖的抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察CNE-1凋亡情况及形态学变化,Western Blot检测CNE-1细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax的表达。结果表明:鹅不食草醇提物能显著抑制CNE-1增殖(P<0.01),并呈现明显的时间-剂量依赖性,其中诱导48和72 h的IC50分别为30.0和25.0μg/mL。阳性对照药顺铂的IC50为0.79μg/mL。Hoechst 33258荧光染色观察发现给药组CNE-1细胞出现不同程度细胞核变圆变亮,核染色质浓缩,产生核小体等明显的凋亡特征。Bcl-2蛋白相对表达量随醇提物浓度的增大而下降,Bax蛋白相对表达量随醇提物浓度的增大而上升,二者与对照组相比均有显著性差异(P<0.01)。鹅不食草醇提物对体外人高分化鼻咽癌细胞CNE-1具有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,其分子作用机制可能与Bcl-2蛋白表达下调、Bax蛋白表达上调有关。

青蒿对鼻咽癌细胞CNE-1、SUNE-1生长的影响

目的研究青蒿对鼻咽癌细胞系CNE-1、SUNE-1的生长抑制作用。方法①采用血清药理学的方法提取中草药青蒿的含药血清;②采用MTT法检测青蒿对CNE-1、SUNE-1细胞生长的抑制作用。结果 MTT法证实青蒿含药血清对鼻咽癌细胞CNE-1、SUNE-1细胞生长均有抑制作用;在SUNE-1细胞中无剂量-效应关系和时间效应关系;在CNE-1细胞中有剂量-效应依赖关系,无时间-效应依赖关系;结论青蒿含药血清对SUNE-1、CNE-1细胞的生长有抑制作用。

姜黄素对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和周期的影响

目的讨论姜黄素对鼻咽癌CNE-1细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测增值抑制率,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度的姜黄素作用细胞48h时,抑制率随浓度的增加而增加,流式细胞仪分析证实姜黄素能使CNE-1细胞阻滞在G2/M期,并出现亚二倍体凋亡峰。结论 姜黄素对CNE-1细胞具有增殖抑制作用,并阻滞细胞于G2/M期和诱导细胞凋亡。

组蛋白H3K27甲基化对人高分化鼻咽癌细胞系CNE-1增殖的抑制效应

目的分析特异性阻断组蛋白H3K27me3/2去甲基化反应对人高分化鼻咽癌CNE-1细胞增殖能力的调控作用及其分子机制。方法体外培养人鼻咽癌细胞系CNE-1,运用组蛋白H3K27me3/2去甲基化酶抑制剂GSK-J4特异性阻断组蛋白H3K27me3/2去甲基化反应。用含0.25、0.5、1.0、2.0和4.0 mmol/L的GSK-J4培养基(10%FBS的RPMI-1640培养液)作用于CNE-1细胞作为实验组,同时设溶剂对照(DMSO,二甲基亚砜)。激光共聚焦技术和流式细胞计量术分析细胞内组蛋白H3K27me3的表达水平;实时荧光定量PCR技术检测细胞内cyclinD1和Ki-67 mRNA的表达水平;用CCK-8法检测细胞的增殖活性;平板集落实验检测细胞集落形成能力;流式细胞计量术检测细胞周期的分布。结果实验组细胞内组蛋白H3K27me3表达水平较对照组明显增高(P<0.05);实验组细胞内cyclinD1和Ki-67 mRNA表达水平较对照组明显下调(P<0.05);CNE-1细胞活力随GSK-J4作用浓度的增加逐渐降低,呈浓度依赖性;实验组细胞增殖活力和集落形成能力较对照组明显下降(P<0.05);实验组G0/G1期细胞百分数较对照组增多,S期减少(P<0.05)。结论上调CNE-1细胞内组蛋白H3K27的甲基化修饰水平可以诱导细胞周期阻滞,抑制细胞增殖,作用机制可能与下调cyclinD1和Ki-67 mRNA水平相关。

二甲双胍抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖并诱导其凋亡的作用机制

目的二甲双胍可抑制鼻咽癌细胞的增殖,但作用机制尚不清楚。文章研究二甲双胍对鼻咽癌细胞CNE-1增殖与凋亡的效应,并探讨miR-let-7a、IGF-1R在其中的作用。方法分别以不同浓度二甲双胍(0、5、10、20、40、80mmol/L)干预鼻咽癌细胞CNE-124h后,采用CCK8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪技术分析细胞凋亡率;实时荧光定量PCR(qPCR)检测bcl-2、bax、IGF-1RmRNA表达水平,miR-let-7a的表达水平;Westernblot方法检测IGF-1R蛋白的表达。结果CCK8结果显示,各浓度组二甲双胍处理细胞24h后,二甲双胍可抑制CNE-1细胞的增殖活性,随药物浓度增高抑制作用呈增强趋势,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪凋亡分析结果显示,0、5、10、20、40mmol/L二甲双胍处理后总凋亡率分别为(6.17±0.74)%、(8.11±1.29)%、(11.97±3.82)%、(13.94±2.98)%、(24.2±2.79)%;与0mmol/L二甲双胍处理比较相比,10、20、40mmol/L二甲双胍处理后凋亡率随浓度升高而呈上升趋势(P<0.05)。qPCR结果显示,0、5、10、20mmol/L浓度二甲双胍作用后24h后,CNE-1细胞的bcl-2、bcl-2/bax、IGF-1R、miR-let-7amRNA表达水平随二甲双胍浓度增加而逐渐下调,而bax基因表达水平则上调,与0mmol/L二甲双胍作用后相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论二甲双胍有抑制鼻咽癌细胞CNE-1增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与miR-let-7a表达上调、IGF-1R表达下调有关。