探讨姜黄素通过NF-κB对鼻咽癌CNE-2Z细胞的生长抑制作用、诱导凋亡作用及其机制研究

目的:探讨姜黄素通过NF-κB对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响。方法:MTT法测定姜黄素对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响,采用流式细胞仪测定姜黄素不同浓度下的CNE-2Z细胞凋亡情况,Western Blot测定NF-κB蛋白的表达。结果:姜黄素能影响CNE-2Z细胞的NF-κB蛋白表达,使NF-κB蛋白表达水平降低,说明姜黄素对CNE-2Z的增殖和转移有一定的影响。姜黄素对CNE-2Z的作用效果受作用时间和浓度影响,其对CNE-2Z细胞24 h的IC50数值为(43.514~45.435)μmol/L,48 h的IC50数值为(8.366~13.11)μmol/L,72 h的IC50数值为(5.658~8.469)μmol/L。结论:姜黄素能够通过NF-κB蛋白的表达,来抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖与侵袭。姜黄素浓度越高,作用时间越长,CNE-2Z细胞增殖抑制效果越好。

三氧化二砷诱导鼻咽癌CNE-2Z细胞凋亡及其作用机制的初步研究

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人鼻咽癌CNE2Z细胞的生物学效应及其作用机制。方法:台盼蓝计数法计算As2O3的IC50;CNE-2Z细胞经As2O3处理后,通过流式细胞仪、荧光染色及DNA电泳检测细胞凋亡;流式细胞仪测定bcl2和bax阳性细胞百分率;罗丹明123染色后进行线粒体膜电位分析。结果:As2O3在一定浓度范围内以浓度依赖的方式抑制CNE2Z细胞生长,其IC50为(1.35±0.30)μmol/L;0.5～2.0μmol/LAs2O3处理CNE2Z细胞后,流式细胞仪检测出凋亡峰,荧光显微镜下可见明显的细胞凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳出现DNA梯形条带;As2O3对bcl2的表达没有影响(P>0.05),但能显著增加bax的表达(P<0.01)及降低线粒体膜电位(P<0.01)。结论:As2O3在体外可诱导鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡,其机制可能与上调bax表达和降低线粒体膜电位有关。

脂质体介导bcl-x_L反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的影响

背景与目的:实验证明bcl-xL在鼻咽癌CNE-2Z细胞中存在高表达,它可能在鼻咽癌的发生发展中发挥着重要的作用。本研究以脂质体(lipofectin)为载体,将人工合成的bcl-xL反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)片段导入CNE-2Z细胞,拟探讨ASODN对CNE-2Z细胞的影响。方法:以bcl-xL的编码区为靶点,人工合成20个碱基全硫代修饰的反义寡核苷酸,脂质体转染反义寡核苷酸进入CNE-2Z细胞后,用MTT法检测细胞成活率;用琼脂糖凝胶电泳、荧光染色、流式细胞术等方法检测细胞凋亡。结果:MTT结果发现,ASODN在Lip介导下即可显著抑制CNE-2Z细胞株细胞增殖(P<0.01),ASODN对细胞增殖的抑制作用随其浓度增加而增强;ASODN作用细胞36h后,经Hoechst33258/PI双染在荧光显微镜下可见细胞缩小、染色质固缩、核断裂;流式细胞仪分析发现在G1峰前出现一个亚二倍体峰即凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳分析可见ASODN/Lip处理组出现明显的“梯状”外观等凋亡特征性改变。结论:ASODN脂质体转染CNE-2Z细胞后可促进CNE-2Z的细胞凋亡;在肿瘤研究中,bcl-xL可作为一个有用的靶基因,为开发鼻咽癌基因治疗药物提供实验依据。

橙皮苷提取物对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和细胞周期的影响

目的探讨赣南脐橙果皮提取物橙皮苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和细胞周期的作用及其机制。方法 MTT法检测橙皮苷对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响;流式细胞术检测橙皮苷处理CNE-2Z细胞后细胞周期的变化。结果不同浓度橙皮苷分别处理CNE-2Z细胞24,48,72 h后,均能抑制CNE-2Z细胞体外增殖;不同时间对CNE-2Z细胞增殖具有高度显著性差异(F=1898.865,P<0.001),不同药物浓度对CNE-2Z细胞增殖具有高度显著性差异(F=5454.040,P<0.001),时间和药物浓度两个因素对CNE-2Z细胞增殖有交互作用(F=118.909,P<0.001)。在1～100μmol/L浓度范围内,随着药物浓度的增加,其抑制率逐渐增大,且随着时间的延长,抑制率也逐渐升高。当浓度大于100μmol/L后,其抑制作用不再随药物浓度增加而进一步增强(P>0.05)。100μmol/L橙皮苷作用CNE-2Z细胞24,48,72 h,随着时间延长G0/G1期细胞比例下降(P<0.01),S期细胞比例增加(P<0.01),G2/M期细胞为0,细胞阻滞于S期。结论橙皮苷能有效动员人鼻咽癌CNE-2Z细胞从细胞周期的G0/G1期进入S期,干扰细胞从S期进入G2期,导致大量细胞堆积于S期解旋复制,阻滞了细胞周期,从而抑制细胞的分裂增殖,诱导细胞周期特异性的细胞凋亡。

芹菜素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞化疗敏感性的增强作用

目的观察芹菜素(AP)能否增强人鼻咽癌CNE-2Z细胞对顺铂(DDP)的化疗敏感性。方法采用MTT法对CNE-2Z细胞的增殖抑制率进行检测,中效原理法对联合用药的相互作用进行分析判断;采用流式细胞术和PI/Ho-echst33258荧光双染法检测细胞凋亡;RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2、bax mRNA表达的改变。结果 AP、DDP单用及合用均明显抑制CNE-2Z细胞的生长,且呈剂量依赖性关系,两药合用时在中、高浓度呈协同效应;流式细胞术和荧光双染法结果表明低浓度AP联合DDP更能明显促进肿瘤细胞的凋亡;与单独用药组比较,RT-PCR结果显示联合用药组bcl-2 mRNA表达明显降低,而bax mRNA表达明显增高。结论芹菜素可增强顺铂对CNE-2Z细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡作用,其机制可能与上调bax和下调bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax比值下降有关。

PKC-α、PKA-Ⅰ反义核酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞生长增殖的影响

目的 :探讨PKC -α和PKA -Ⅰ反义核酸 (asODN)对鼻咽癌CNE - 2Z细胞生长增殖的影响。方法 :分别用脂质体 (lipofectin ,LP)介导asODN转染鼻咽癌CNE - 2Z细胞。实验组 :① 0 0 1- 1 0 0 μmol/LPKC -αasODN ;②0 0 1- 1 0 0 μmol/LPKA -ⅠasODN ;③ 0 5 0 μmol/LPKC -αasODN +0 5 0 μmol/LPKA -ⅠasODN。对照组 :相应浓度的随机序列 (rODN)。用免疫组化法检测CNE - 2Z细胞PKC -α和PKA -Ⅰ的表达 ,MTT法检测其生长指数 (growthin dex ,GI) ,软琼脂克隆形成率检测其体外增殖能力。结果 :PKC -αasODN或 /和PKA -ⅠasODN均可阻断其相应PKC-α或PKA -Ⅰ的表达 (P <0 0 5 )。PKC -αasODN或PKA -ⅠasODN均能显著降低CNE - 2Z细胞GI和软琼脂克隆形成率 (P <0 0 5 ) ,且具有量效依赖关系。PKC -αasODN +PKA -ⅠasODN共同作用可使其GI和软琼脂克隆形成率非常显著降低 (P <0 0 1) ,无明显量效依赖关系 ,两者对CNE - 2Z生长抑制作用强于PKC -αasODN或PKA -Ⅰa sODN(P <0 0 5 ) ,对其软琼脂克隆形成率的抑制作用与PKC -αasODN或PKA -ⅠasODN无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 :PKC -αasODN和PKA -ⅠasODN均可抑制CNE - 2Z细胞体外生长和增殖 ,两者具有协同作用。

反义c-fos、c-jun对CNE-2Z细胞增殖及PKC-α表达的影响

为探讨反义c-fos、c-jun对CNE-2Z细胞生长的影响及与PKC-α表达的关系.本研究联合应用反义c-fos和c-jun寡核苷酸作用于CNE-2Z细胞,MTT法检测细胞生长指数,流式细胞仪(FCM)检测细胞PKC-α表达.结果显示,c-fos、c-jun反义寡核苷酸在Lipofectin(LP)最低有效浓度为1.7×10^(-6)μg/ml作用下,对CNE-2Z细胞抑制作用随浓度增大而增强,最低有效浓度为1.7×10^(-5)μg/ml;在一定时间内,对细胞生长的抑制作用,随作用时间延长而增强,最大抑制作用时间为20小时,其生长指数为63.9±5.0,较对照组明显降低(P<0.01).在以上浓度的LP和反义寡核苷酸作用于细胞20小时后,FCM检测发现PKC-α荧光强度明显低于各对照组,阳性细胞数百分比为10.40±5.23,较对照组29.87±7.41及其它各组均显著降低(P<0.01).结果表明,反义c-fos、c-jun寡核苷酸可抑制CNE-2Z细胞生长增殖,并呈明显的浓度和时间效应依赖关系,且明显抑制PKC-α蛋白的表达.

蛋白激酶C对鼻咽癌CNE-2Z细胞端粒酶活性的影响

为进一步探讨蛋白激酶 C(PKC)调控人低分化鼻咽癌 CNE- 2 Z细胞生长的机制 ,观察了 PKC对 CNE- 2 Z端粒酶活性的影响。结果显示 :CNE- 2 Z细胞有较高的端粒酶活性 ;PKC的抑制剂 Staurosporine显著降低细胞端粒酶活性 (P<0 .0 0 1)。提示抑制 PKC可以抑制 CNE- 2 Z细胞的端粒酶活性 ,PKC可能通过调控端粒酶活性从而影响 CNE- 2

JAK激酶抑制剂AG490对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和凋亡的影响

背景与目的:目前研究表明,JAK-STAT3信号通路的异常激活与细胞恶性转化密切相关。本实验观察JAK激酶抑制剂AG490对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖、凋亡及凋亡相关基因Survivin、Mcl-1表达的影响,探讨JAK-STAT3信号通路在CNE-2Z细胞凋亡调控中的作用。方法:AG490作用于体外培养的CNE-2Z细胞。MTT法检测细胞增殖,Hoechst33342荧光活染、流式细胞术检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测STAT3、Survivin和Mcl-1 mRNA表达,Western blot检测STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、Survivin和Mcl-1蛋白表达。结果:100μmol/LAG490作用24、48h后对CNE-2Z细胞增殖抑制率分别为37.95%和52.99%。流式细胞术显示,经50μmol/L和100μmol/LAG490作用24h后,细胞凋亡率由处理前的1.37%分别提高到9.30%和9.00%(P<0.01)。荧光显微镜下可见到典型的细胞凋亡形态学改变。细胞STAT3活化程度降低,Survivin、Mcl-1基因表达下调。结论:阻断JAK-STAT3信号通路可抑制CNE-2Z细胞增殖,并可能通过下调凋亡抑制基因Survivin、Mcl-1表达诱导细胞凋亡。

反义PKCα对CNE-2Z细胞端粒酶活性的影响

目的 观察反义PKCα对鼻咽癌CNE 2Z细胞生长及端粒酶活性的影响。方法 脂质体转染反义PKCα ,MTT法检测细胞生长 ,TRAP ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果 CNE 2Z细胞端粒酶活性为阳性 ,转染反义PKCα可使细胞生长指数 (P <0 .0 1)及端粒酶活性 (P <0 .0 5 )降低。结论 反义PKCα可以抑制CNE 2Z细胞的生长及端粒酶活性 ,PKCα可能通过调控端粒酶活性影响CNE 2Z细胞的生长。

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞膜电位的影响

目的 :观察蝎毒多肽 (APBMV)对鼻咽癌CNE 2Z细胞株细胞膜电位的影响。方法 :细胞经培养传代 ,分组处理。空白对照组加生理盐水 ,其他 3组分别加入浓度为 8,12和 16mg/L的APBMV。采用玻璃微电极细胞内记录法测定CNE 2Z细胞膜电位 ,MTT法观察APBMV对CNE 2Z细胞的毒性作用。结果 :CNE 2Z细胞经APBMV处理48h后 ,细胞膜负电位 (13 0 0± 3.5 8)mV明显小于空白对照组 (2 3 0 0± 8.2 1)mV ,P <0 .0 1,细胞膜呈去极化状态 ;CNE 2Z细胞代谢MTT的能力下降 ,显示明显的毒性反应。结论 :APBMV可能具有膜毒素的作用 ,通过降低CNE 2Z细胞膜电位 。

白细胞介素24对鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖的影响

目的探讨白细胞介素24(IL-24)对鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖的影响。方法取鼻咽癌CNE-2Z细胞株,进行细胞培养;用细胞计数、四甲基偶氮唑蓝(MTT)抑制试验,以IL-240 pg/L为对照组,检测不同浓度、不同时间的IL-24对鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖的影响。结果细胞计数及MTT比色法检测得出:体外培养的鼻咽癌CNE-2Z细胞株在培养的48 h增殖状况最差,并且随着IL-24浓度的增加,其活细胞数也随着减少,当IL-24为50 pg/L时,其增殖状况最差;当IL-24为100 pg/L时,其增殖状况反而好转。结论 IL-24可呈时间和剂量依赖性地抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞株增殖。

口虾蛄提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨口虾蛄乙酸乙酯提取物对鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖及凋亡相关蛋白表达的影响。方法用MTT比色法检测药物对细胞增殖的作用,流式细胞术和PI/Hoechst33258荧光双染法检测细胞凋亡,Western Blot法检测用药前后凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的改变。结果口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞的增殖有显著抑制作用,且可诱导细胞凋亡;随着口虾蛄乙酸乙酯提取物浓度升高,Bax蛋白的表达逐渐增多,而Bcl-2蛋白表达改变不明显。结论口虾蛄乙酸乙酯提取物对CNE-2Z细胞有显著抗增殖及诱导凋亡作用,其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制与凋亡相关基因Bcl-2/Bax蛋白比值下降有关,但诱导凋亡不是主要机制。

槲皮素对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响及机制研究

目的探讨槲皮素对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响及机制,为槲皮素在抗肿瘤临床应用提供理论基础。方法应用MTT法检测槲皮素对人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响,RT-PCR检测槲皮素对CNE-2Z细胞,COX-2、p65和Survivin mRNA表达的影响。结果 MTT结果显示槲皮素对CNE-2Z细胞的生长抑制作用呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性(P<0.01)。槲皮素能呈时间依赖性的抑制CNE-2Z细胞COX-2、p65和Survivin mRNA的表达(P<0.01)。结论槲皮素呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性抑制CNE-2Z细胞的增殖,其作用机制与下调COX-2、p65和Survivin mRNA的表达密切相关。

蝎毒抗癌多肽对CNE-2Z细胞生长周期移行和p53表达的影响

目的 :观察蝎毒抗癌多肽 (APBMV)对CNE 2Z细胞生长周期和p5 3表达的影响。方法 :采用流式细胞仪双标法。结果 :APBMV处理CNE 2Z细胞 48h后 ,进入S期的细胞明显减少 ,处于G1期和G2期的细胞明显增多 ,APBMV 16mg/L处理CNE 2Z细胞 48h后 ,G1期、S期和G2期细胞的百分比分别为 5 9.7%、32 .3 %和 7.9% ,空白对照组的百分比分别为 5 3 .3%、45 .2 %和 1.5 % ,二者比较差异有显著性 (P <0 .0 1或P <0 .0 0 1)。空白对照组CNE 2Z细胞P5 3蛋白 2 4h和 48h表达量处于较高水平 (2 7.2 3± 0 .93)和 (31.6 7± 1.75 ) ,经APBMV处理 2 4h或 48h后 ,P5 3蛋白表达量明显下降 ,与空白对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论 :APBMV能够阻止CNE 2Z细胞周期的移行 ,并抑制抑癌基因p5

大蒜素对CNE-2Z细胞增殖及端粒酶活性的影响

目的研究大蒜素对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于CNE-2Z细胞后,MTT法检测细胞的增殖抑制作用,TRAP-PCR-ELISA法研究细胞端粒酶活性的变化。结果大蒜素对CNE-2Z细胞的增殖具有一定程度的抑制作用,并呈时间、浓度依赖性;不同浓度的大蒜素能下调CNE-2Z细胞的端粒酶活性,且同样呈时间、浓度依赖性。结论大蒜素可抑制CNE-2Z细胞的增殖及端粒酶活性,可能是其抗肿瘤的重要机制之一。

一个编码4个不同基因RNAi的shRNA质粒的构建及其对CNE-2Z细胞增殖、凋亡和小鼠鼻咽癌移植瘤的影响

目的:构建同时表达VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因的shRNA真核表达质粒,研究其对人鼻咽癌细胞系CNE-2Z的干扰作用。方法:根据VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因序列,各设计2条寡核苷酸序列,合成互补DNA链,插入真核表达质粒pGenesil-1中,同时构建单基因(VEGF)质粒pGenesil-2。分别转染CNE-2Z细胞,分为多基因质粒(P-1)组和单基因质粒(P-2)组,并设空白对照(BC)组和阴性对照(NC)组。采用MTT法检测细胞增殖活性。采用实时定量PCR和Western-blot检测4种基因在人鼻咽癌细胞系CNE-2Z中的表达。体内裸鼠成瘤实验观察单基因和多基因质粒干预对肿瘤的抑制作用。结果:通过酶切和测序证实重组真核表达载体构建正确。MTT显示细胞增殖受到抑制,且多基因质粒对细胞增殖的抑制作用明显强于单基因质粒。目的基因在mRNA和蛋白水平上表达均下降。裸鼠实验显示P-1组抑制肿瘤细胞增长的作用要强于P-2组。结论:成功构建一个载体编码4个不同基因的shRNA质粒载体系统。转染鼻咽癌细胞后,与单独沉默VEGF相比,同时干扰VEGF、c-myc、survivin和hTERT基因可以更好地抑制细胞增殖。

Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞的影响

目的 :探讨阳离子脂质体Lipofectin对bcl xL反义寡核苷酸进入CNE 2Z细胞的影响。方法 :采用阳离子脂质体Lipofectin介导bcl xL反义寡核苷酸转染CNE 2Z细胞 ,应用MTT法观察Lipofectin介导前后对CNE 2Z增殖的影响 ;RT PCR检测处理前后bcl xLmRNA表达水平。结果 :Lipofectin介导bcl xl反义核酸可提高反义核酸对细胞的增殖抑制率 ;Lipofectin介导bcl xL反义核酸可增强反义核酸下调bcl xLmRNA表达水平的能力。 结论 :Lipofectin可促进反义核酸转染进入细胞。

脂质体转染反义PKCα对CNE-2Z细胞生长的影响

目的 :观察脂质体转染反义 PKCα对 CNE- 2 Z细胞生长的影响。方法 :用脂质体法转染反义 PKCα,以 MTT法测细胞生长。结果 :(1)脂质体浓度为 2 .0 0 0～ 8.0 0 0 mg· L- 1时 ,随着脂质体浓度增加 ,细胞生长指数逐渐降低 (P<0 .0 5 ) ;但当浓度为 1.0 0 0 mg·L- 1时 ,其对细胞生长似无影响。 (2 )在 4.0 0 0～ 16 .0 0 0 mg· L- 1的范围内增加转染的反义PKCα的浓度 ,细胞生长指数逐渐降低 (P<0 .0 0 1)。结论 :小剂量脂质体转染反义 PKCα可抑制 CNE- 2 Z生长 ,反义PKCα的剂量与细胞生长抑制呈量效关系。

蛋白激酶C对鼻咽癌CNE-2Z细胞蛋白酪氨酸磷酸化的影响

利用细胞培养、蛋白激酶C(PKC)的抑制剂和免疫细胞化学法 ,探讨PKC对人低分化鼻咽癌细胞CNE 2Z中磷酸化酪氨酸蛋白分布的影响。结果发现 :磷酸化酪氨酸蛋白主要在胞膜 (6 5 2 % )与胞浆 (85 % )表达。作用于PKC调节区的抑制剂sphingosine(SS) (2× 10 -5mol/L)与作用于催化区的staurosporine(ST) (2× 10 -6mol/L)使其表达减弱、胞膜阳性率分别降低至 12 8%和 9 0 %。提示PKC对CNE