10q24.3缺失导致全面性发育迟缓的诊断方法探讨

[目的]探讨10q24.3缺失导致全面性发育迟缓患儿的诊断方法。[方法]通过回顾性分析1例全面性发育迟缓患儿的临床资料以及患儿和患儿父母家系低深度全基因组拷贝数变异测序(CNVseq)和家系全外显子组测序(WES)的检测结果。[结果]患儿为10月龄男性,四大能区均有发育落后,并伴有特殊面容(眼距增宽、斜视、鼻梁低平、前额凸出、腭裂、高腭弓等),四肢肌张力低下等表现,CNVseq和WES基因检测发现患儿存在10q24.3新发杂合缺失,该区间包含基底细胞痣综合征基因SUFU和低镁血症、癫痫及智力发育迟滞关联基因CNNM2,局灶性节段性肾小球硬化伴神经发育综合征TRIM8基因,推测患儿发病的原因与SUFU基因和CNNM2基因以及TRIM8基因缺失高度相关。[结论]对全面性发育迟缓、特殊面容表现的患儿应尽早完善基因检测,以明确诊断,有利于判断预后。

低镁血症、癫痫和智力障碍综合征患儿1例的CNNM2基因变异分析

目的探讨1例儿童低镁血症、癫痫和智力障碍(HSMR)综合征患者的分子遗传学病因。方法选取2021年7月9日因"反复抽搐2个月"收治于山东大学附属儿童医院的HSMR综合征患儿作为研究对象,并收集其临床资料。采集患儿及父母的外周血样,提取基因组DNA,应用全外显子组测序技术进行基因检测,确定候选变异位点,Sanger测序家系验证。应用生物信息学分析软件SWISS-MODEL对蛋白质结构模型进行预测。结果患儿为男性,就诊时为1岁7月龄,临床表现为癫痫发作、全面性发育迟缓,血清学检测提示低血清镁。基因检测结果提示患儿CNNM2基因存在c.1448delT(p.Val483GlyfsTer29)杂合变异,考虑为新发变异。该变异使CNNM2基因第1448位核苷酸T发生缺失,导致第483位氨基酸由缬氨酸变成甘氨酸,且下游第29位氨基酸变为终止密码子。SWISS-MODEL软件分析提示该变异位点导致蛋白结构发生改变,产生截短蛋白。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异与分类指南,c.1448del T(p.Val483GlyfsTer29)评级为致病性变异(PVS1+PS2+PM2Supporting+PP4)。结论CNNM2基因c.1448delT杂合变异考虑为HSMR综合征患儿的致病原因,该变异的发现丰富了CNNM2基因表型-基因型。

CNNM2基因杂合突变致低镁血症-癫痫-精神发育迟滞一例报告并文献复习

目的分析1例CNNM2基因杂合突变致低镁血症-癫痫-精神发育迟滞(HOMGSMR1)[MIM:616418]患儿的临床特点,探讨基因型与表型之间的关联。方法随访并回顾性分析浏阳市妇幼保健院诊治的1例CNNM2基因杂合突变致HOMGSMR1病例临床特点,通过家系全外显子测序,对原始数据进行生物信息学分析,查阅人类孟德尔遗传(OMIM)、ClinVar、gnomAD、GeneReviews、Pubmed、中国知网等数据库及文献资料,采用美国医学遗传学和基因组学学会(ACMG)指南对锁定CNNM2基因杂合缺失变异进行评级。结果患儿,男,3个月18 d,母亲孕1产1,反复抽搐10余天,多次查血镁均低于正常水平,波动于0.51~0.55 mmol/L,予以口服"奥卡西平""硫酸镁"治疗后抽搐好转,血镁浓度有提高,但仍低于正常,最高为0.61 mmol/L。家系全外显子测序结果显示:患儿携带CNNM2基因外显子区域(c.838843delATGGCCp.M280A281del)杂合缺失突变,该变异未在其父母体内检出,提示为新发突变,大规模人群频率数据库gnomAD未收录该变异,未见文献报道该变异,根据ACMG指南,评级为疑似致病变异。该基因的致病变异可导致常染色体显性HOMGSMR1,符合遗传模式。结论CNNM2基因c.838843delATGGCC(p.M280A281del)是该患儿的疑似致病性变异,基因型与表型相符、杂合突变符合遗传模式,常染色体显性遗传是该患儿临床表现的分子病因,为未报道过的新突变。

利用CRISPR/Cas9敲除斑马鱼细胞周期蛋白M2(CNNM2)基因

细胞周期蛋白M2（CNNM2）是参与体内镁离子平衡的重要候选基因,实验采用的CRISPR/Cas9系统是近几年发展起来的一类新型基因打靶技术。在斑马鱼CNNM2基因的一号外显子处选取打靶位点,构建sgRNA表达载体。随后将体外转录的sgRNA和Cas9 mRNA混合物分别以约30 pg和300 pg的剂量显微注射到斑马鱼单细胞期的受精卵中实现对目的靶基因CNNM2的敲除。24~48 h后PCR产物回收,限制性酶切法初步检测基因打靶情况,最后进行测序分析确定突变类型。为进一步验证突变的稳定遗传性,选择了具有敲除效率的F0与野生型斑马鱼进行外交,对获得的F1进行逐一剪尾,提取DNA进行PCR和测序分析。结果显示F0和F1均获得了不同程度插入、缺失和移码突变类型,且F0突变效率为88%。本研究获得了能稳定遗传的CNNM2基因敲除斑马鱼个体,并为将来进一步研究CNNM2基因和机体镁离子稳态之间的关系打下了基础。