有氧运动经CNPY2调控PERK-CHOP信号通路改善小鼠非酒精性脂肪肝的机制研究

目的:采用冠层同源物2(CNPY2)基因敲除,结合运动干预,探讨CNPY2和有氧运动在高脂膳食诱导非酒精性脂肪肝(NAFLD)中的作用及机制。方法:(12±1)周龄SPF级C57BL/6J雄性CNPY2基因敲除(KO)小鼠及其同系同龄同窝野生型(WT)小鼠适应性喂养1周后,随机分为对照组、模型组和模型运动组。对照组予普通饲料喂养,模型组和模型运动组予高脂饲料喂养,连续17周。模型运动组从第10周开始进行连续有氧运动干预,直至第18周实验结束。HE和油红O染色观察肝组织病理形态;全自动生化仪检测小鼠血清高密度脂蛋白(HDL-c)、低密度脂蛋白(LDL-c)、血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸转氨酶(ALT)水平;Western Blot法检测肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2α、CHOP蛋白表达;qRT-PCR法检测肝组织PERK mRNA和eIF2αmRNA表达;Tunel法检测肝细胞凋亡。结果:WT小鼠模型组CNPY2表达较对照组显著升高(P<0.05),WT小鼠模型运动组CNPY2表达较模型组显著降低(P<0.05)。同时,与对照组比较,KO和WT小鼠模型组均可见明显肝细胞脂肪性变和脂滴,其血清ALT、AST、TC、TG和LDL-c水平、肝组织PERK、p-eIF2α、CHOP、PERK mRNA和eIF2αmRNA表达、肝细胞凋亡显著升高(P<0.05),血清HDL-c水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,KO和WT小鼠模型运动组上述指标得到显著改善(P<0.05)。与WT小鼠比较,KO小鼠肝组织脂肪性变减轻,肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2α、CHOP、PERK mRNA和eIF2αmRNA表达显著降低(P<0.05)。结论:CNPY2基因缺失和有氧运动均可有效改善NAFLD,其机制可能与其下调CNPY2表达,抑制PERK-CHOP信号通路活性,降低PERK-CHOP信号通路相关分子表达,减少肝细胞凋亡有关。

有氧运动对非酒精性脂肪肝小鼠肝脏CNPY2-PERK通路的影响

目的:探讨有氧运动对高脂诱导小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)的影响及其肝脏冠层成纤维细胞生长因子信号调节器2(CNPY2)-PKR样内质网激酶(PERK)机制。方法:8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(C)、对照+运动组(CE),NAFLD模型组(M)和NAFLD模型+运动组(ME),每组10只。C组和CE组小鼠给予普通饲料,M组和ME组小鼠给予高脂饲料(脂肪供能占比为60%),连续喂养18周至实验结束,取小鼠血清和肝脏。CE组和ME组从第10周起进行有氧跑台训练(12 m/min,每次60 min,每周5 d)。检测小鼠血清总胆固醇(TC)、总甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平;观察小鼠肝组织病理学形态;检测肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2a、CHOP、CNPY2 mRNA、PERK mRNA表达和CNPY2、PERK的阳性表达。结果:与C组比较,M组小鼠的血清LDL-c、TC、TG、ALT和AST水平显著升高(P<0.05),HDL-c水平显著降低(P<0.05);小鼠肝组织可见明显的肝脂肪性变,肝细胞脂滴数量增加,肝组织的CNPY2、CNPY2 mRNA、PERK、PERK mRNA、p-eIF2a、CHOP表达、CNPY2和PERK阳性表达均显著升高(P<0.05);而CE组的上述指标均没有显著性差异(P>0.05)。与M组比较,ME组小鼠的血清LDL-c、TC、TG、ALT和AST水平显著降低(P<0.05),小鼠肝组织脂肪性变明显减轻,肝细胞脂滴数量显著减少,肝组织的CNPY2、CNPY2 mRNA、PERK、PERK mRNA、p-eIF2a、CHOP表达、CNPY2和PERK阳性表达均显著降低(P<0.05)。结论:CNPY2-PERK通路参与NAFLD的形成。有氧运动可有效改善NAFLD,其机制可能与有氧运动降低CNPY2-PERK通路相关分子表达有关。

CNPY2增强非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化作用

目的探讨CNPY2激活AKT/GSK3β途径增强非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞侵袭和迁移作用的机制。方法采用qRT-PCR和Western blot法检测AKT/GSK3β途径在CNPY2诱导下上皮、间质标志物以及上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关转录因子的表达变化。通过Transwell侵袭实验和细胞划痕修复实验观察过表达CNPY2对NSCLC细胞侵袭和迁移能力的影响。结果CNPY2和E-cadherin在mRNA水平的表达呈负相关。细胞划痕修复实验和Transwell侵袭实验表明CNPY2促进NSCLC细胞的侵袭和迁移能力。进一步分析发现CNPY2可以激活AKT/GSK3β途径,导致GSK3β失活,增加Snail的水平,进而降低E-cadherin的表达,促进细胞发生EMT。结论CNPY2促进NSCLC细胞的EMT过程,在NSCLC侵袭和迁移中发挥重要作用,CNPY2可作为治疗NSCLC的新型靶点。

CNPY2调控内质网应激PERK/eIF2α通路在有氧运动干预非酒精性脂肪性肝病中的作用

目的:探讨有氧运动通过冠层成纤维细胞生长因子信号调节器2(CNPY2)调控内质网应激在PKR样内质网状激酶(PERK)/真核细胞翻译起始因子2α(eIF2α)通路改善非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的可能机制。方法:30只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为普通饮食组(普饮组)、高脂饮食组(高脂组)和高脂饮食运动组(高脂运动组),每组10只。普饮组给予普通饲料喂养,高脂组和高脂运动组给予高脂饲料喂养,连续喂养18周,直至实验结束,取小鼠肝脏。从第10周开始,高脂运动组小鼠进行有氧跑台训练干预(12 m/min,60 min/次,5 d/周),普饮组和高脂组小鼠静置于没有开机的跑步机上,静置时间和频率与高脂运动组相同。HE染色观察各组小鼠肝组织病理学形态,Western Blotting法检测肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2α蛋白表达。另培养人肝癌细胞系HepG2细胞,使用棕榈酸孵育肝细胞,在诱导NAFLD体外模型后,采用腺苷磷酸活化蛋白激酶(AMPK)激动剂模拟细胞水平运动效应,通过AMPK激动剂、CNPY2重组蛋白和(或)PERK抑制剂干预,Western Blotting检测各组肝细胞CNPY2、PERK、peIF2α、血红素加氧酶-1(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、NADPH氧化酶-1(NOX-1)蛋白表达、qRT-PCR检测各组肝细胞CNPY2 mRNA和PERK mRNA表达,ELISA检测各组肝细胞上清液白介素-1α(IL-1α)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度。结果:(1)与普饮组比较,高脂组小鼠肝脏有明显脂肪性变,肝组织CNPY2、PERK、p-eIF2α蛋白表达显著升高(P<0.05);与高脂组比较,高脂运动组小鼠肝脏脂肪性变显著改善,肝组织CNP Y2、PERK、p-eIF2α蛋白表达显著降低(P<0.05)。(2)棕榈酸诱导肝细胞CNPY2、PERK、p-eIF2α、HO-1、Nrf2、NOX-1蛋白表达、CNPY2 mRNA、PERK mRNA表达和肝细胞上清液IL-1 α、IL-6、TNF-α浓度显著升高;CNPY2重组蛋白干预显著上调肝细胞以上指标水平,加重棕榈酸作用效应;AMPK激动剂和(或)PERK抑制剂干预显著下调肝细胞以上指标水平,抑制棕榈酸和CNPY2重组蛋白作用效应。结论:有氧运动可有效改善NAFLD,其机制可能与其通过下调CNPY2表达,抑制PERK/eIF2α通路活性,从而降低PERK/eIF2α通路相关分子表达,减少肝细胞氧化应激和炎症有关。

CNPY2在胃癌中的表达及其与侵袭转移微血管密度的关系

目的:研究新型的分泌型促血管生成因子CNPY2在胃癌组织中的表达情况,分析其表达与侵袭、转移及微血管密度之间的关系。方法:收集山西医科大学第一医院手术切除的胃癌组织及癌旁组织标本50例,采用western-blot检测CNPY2的表达情况,免疫组织化学CD34染色计数微血管密度,分析CNPY2的表达与患者临床病理特征及微血管密度之间的关系。结果:与癌旁组织相比,胃癌组织中CNPY2的表达显著增高(P<0.05);CNPY2在有淋巴结转移肿瘤组织中的表达高于无淋巴结转移(P<0.05),CNPY2在Ⅲ期+Ⅳ期肿瘤组织中的表达高于Ⅰ期+Ⅱ期(P<0.05);CNPY2高表达的胃癌组织中肿瘤微血管密度显著增高(P<0.05);与肿瘤原发灶相比,CNPY2在转移性淋巴结组织中的表达显著增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CNPY2在胃癌组织中表达上调,可能在胃癌血管生成、侵袭转移中发挥重要作用。

CNPY2在结直肠癌中的作用机制研究进展

结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是最常见的消化道恶性肿瘤之一,据统计CRC在恶性肿瘤中发病率居第三位,仅次于肺癌和乳腺癌,给公众健康造成严重威胁。CNPY2是一种新型的分泌型促血管生成因子,可能通过促血管生成作用参与肿瘤的发生发展。而P53作为肿瘤抑癌因子在各种类型的癌症中都进行了研究,本综述从缺氧诱导因HIF-1a子入手,深入了解CNPY2和P53在结直肠癌中的作用机制。

含Coiled-coil结构的PML结构域与CNPY2蛋白相互作用的胞内外验证

目的通过胞内外试验验证含Coiled-coil结构的PML结构域(PML-C)与CNPY2蛋白的相互作用。方法将质粒pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C共转化入酵母菌AH109,通过酵母双杂交技术检测CNPY2蛋白和PML-C在AH109细胞内的相互作用;构建重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2,共转染HEK293细胞,采用Western blot法检测细胞中CNPY2蛋白的表达;免疫共沉淀技术从胞外验证两种蛋白的相互作用。结果 pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C质粒共转化入AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2共转染的HEK293细胞的全细胞裂解液可与鼠抗c-MYC单抗特异性结合;经免疫共沉淀可检测到与PML-C相互作用的蛋白复合体。结论通过酵母双杂交试验和免疫共沉淀技术证实,PML-C与CNPY2蛋白存在相互作用。

CNPY2在肿瘤中的表达及作用

肿瘤在生长过程中为满足营养供给,需形成大量新生血管,目前抗肿瘤血管生成是抗肿瘤药物研发的重要方向之一。CNPY2是一种新型的分泌型促血管生成因子,通过促血管生成作用参与肿瘤的发生发展。CNPY2在多种肿瘤中异常表达,可能成为肿瘤诊断和治疗的新靶点。