急性期电针对面神经损伤模型兔CNTFR表达的影响

目的:探讨急性期电针对面神经损伤模型兔CNTFR表达的影响。方法:将80～85日龄日本大耳白兔面神经用特制止血钳压榨5min,损伤长度约3cm,造成面神经损伤模型,电针组在术后第2天立即进行治疗,模型组术后不进行任何治疗。于电针治疗后5天、运用酶联免疫分析技术检测血清样本中睫状神经营养因子受体(CNTFR)的含量。结果:电针治疗后5天,两组CNTFR表达水平t检验,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:急性期电针可以通过调节CNTFR表达来促进面神经损伤的修复。

大鼠视神经损伤后视网膜CNTF及CNTFRα mRNA的表达

目的研究视神经损伤后睫状神经营养因子及其受体在大鼠视网膜中的表达变化。方法采用钳夹法制作大鼠视神经损伤模型。分别于伤后1、3、7、14、28d取眼球,以正常大鼠视网膜为对照,提取视网膜组织RNA,运用RT-PCR检测视神经损伤后CNTF和CNTFRαmRNA的表达变化。结果在正常视网膜中存在CNTF和CNTFRαmRNA的表达,视神经损伤后CNTF和CNTFRαmRNA表达量逐渐增加,第7d达到最高,第14d下降,具有统计学意义(P<0.01)。28dCNTF表达仍高于正常组(P<0.01)。结论视神经损伤刺激了视网膜细胞表达CNTF和CNTFRα增加,可能是视网膜神经元自我保护的一种反应。

CNTFR在面神经再生的表达变化及TGF-β、BMP-2的调控

目的 : 探讨睫状神经营养因子受体CNTFR在面神经切断后的蛋白表达及转化生长因子 (TGF - β)及重组骨形成蛋白 - 2 (rhBMP - 2 )对其的表达影响。方法 :将面神经切断后分别注入TGF - β、rhBMP - 2及生理盐水。取不同时期的面神经核组织切片标本 ,采用免疫组化染色和计算机图像分析仪对不同时期中面神经核CNTFR的表达进行定量分析。结果 :面神经切断后 ,CNTFR在术后一天开始表达 ,一周后面神经元中CNTFR的含量达到最大。术后二周出现下调。术后一个月又有所提高 ,从而出现第二个高峰。此后逐渐下降。TGF - β处理组在面神经损伤后期CNTFR的表达高于生理盐水组。结论 :面神经运动神经元损伤及再生过程中 ,内源性CNTFR的表达提高使神经元损伤后增加CNTF的摄入 ,减少了面神经元的死亡 ,为神经元的恢复及神经轴突的延伸具有促进作用。而TGF - β对CNTFR的表达具有一定的促进作用。

大鼠脊髓组织CNTFRα mRNA的表达及其坐骨神经损伤后表达的变化

目的：通过对大鼠脊髓组织中睫状神经营养因子受体α（ＣＮＴＦＲα）的分布与细胞定位及其在坐骨神经损伤后表达变化的研究，来探讨ＣＮＴＦ在脊髓组织中的可能作用。方法：利用原位杂交和点杂交的方法，对ＣＮＴＦＲα在大鼠脊髓组织中的分布与坐骨神经损伤后的表达变化进行研究。结果：ＣＮＴＦＲαｍＲＮＡ几乎存在于所有脊髓神经元与胶质细胞中；坐骨神经损伤后１ｄ表达增加，以后降到较低水平，到１４ｄ再次升高，但第２峰较第１峰为低。结论：ＣＮＴＦＲαｍＲＮＡ在大鼠脊髓组织中的广泛分布，表明ＣＮＴＦ对脊髓组织各类神经元与胶质细胞均有神经营养作用。坐骨神经损伤后１ｄ，ＣＮＴＦＲαｍＲＮＡ表达的增加，可能与损伤应激相关；１４ｄ的再次升高是否由于再生过程中，雪旺细胞大量增殖，ＣＮＴＦ大量表达所诱导，还有待进一步的研究；ＣＮＴＦＲα表达的改变，可能是损伤神经元在损伤与再生修复过程中。

miR-21a-5p对PHEV复制的影响及其靶基因Cntfr的验证

为研究猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)感染过程中宿主miR-21a-5p对PHEV复制的影响,利用荧光定量PCR方法对PHEV感染过程中细胞内miR-21a-5p的表达变化进行了检测;之后,将化学合成的miR-21a-5p模拟体或抑制剂转染N2a细胞,接种PHEV后利用荧光定量PCR方法检测PHEV基因组RNA的含量。通过TargetScan、Microcosm和Miranda数据库预测miR-21a-5p的靶基因,并利用双荧光素酶报告系统对预测的靶基因进行验证。结果显示,PHEV感染N2a细胞后,miR-21a-5p的表达量明显升高。而有效抑制N2a细胞中miR-21a-5p的表达会使PHEV复制增殖显著下降;反之,miR-21a-5p过表达能使PHEV表达量升高。此外,生物信息学分析表明,miR-21a-5p可能在PHEV感染致病过程中参与了细胞免疫、神经损伤等过程。而预测靶基因Cntfr为CNTF受体,具有维持神经细胞形态和功能完整性的作用,并进一步利用双荧光素酶报告系统证实Cntfr为miR-21a-5p的靶基因。总之,miR-21a-5p在PHEV致病过程中具有极其重要的调控作用,影响PHEV的复制增殖,并具有直接靶向Cntfr基因维持神经细胞稳态的作用。研究结果不仅为miRNA参与调控PHEV复制提供数据支持,也为深入研究PHEV的致病机制提供新的思路。

CNTFRα在ALV自然重组FJ15HT0株感染宿主过程中的表达

本团队之前分离到一株天然重组禽白血病病毒(ALV)毒株FJ15HT0,经RNA-seq分析发现该毒株感染会引起鸡胸腺组织中睫状神经营养因子受体α(CNTFRα)基因表达量上调。为进一步探究CNTFRα在ALV FJ15HT0株感染过程中的表达及作用,本研究在构建ALV先天感染模型的基础上,通过RT-qPCR和免疫组织化学染色(IHC)探究不同时间点CNTFRα在感染鸡肝脏和胸腺中的表达量变化;以RT-qPCR和Western Blot检验病毒的复制水平对DF-1细胞CNTFRα在转录水平和蛋白表达水平的影响。结果表明,感染组与空白组相比,鸡胚出壳率明显降低,鸡只体重极显著降低(P<0.01);RT-qPCR和IHC结果显示同一时间点感染组胸腺和肝脏组织中CNTFRα转录水平及蛋白表达量均极显著高于空白组(P<0.01),胸腺组织中CNTFRα基因相对表达量与病毒gp85基因相对表达量呈极显著正相关关系(r=0.633,P<0.01);14 d、21 d感染组鸡只血清CNTF含量显著高于空白组(P<0.05)。RT-qPCR和Western Blot检测结果表明84 h感染组DF-1细胞CNTFRα表达量随病毒复制水平增加而显著提高(P<0.05),CNTFRα基因与病毒gp85基因相对表达量呈极显著正相关关系(r=0.73,P<0.01),CNTFRα蛋白与p27蛋白的表达量呈极显著正相关关系(r=0.973,P<0.01)。研究表明CNTFRα可能参与ALV FJ15HT0株致病过程。

大鼠视神经夹伤后CNTF CNTFR及OMgpmRNA表达的研究

目的观察大鼠视神经夹伤后对闪光视觉诱发电位（F—VEP）的影响及睫状神经营养因子（ciliaryneurotrophic factor，CNTF）、睫状神经营养因子受体（ciliary neurotrophic factor recepter，CNTFR）、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白（oligodendrocyte myelin glycopmlein，OMgp）在视网膜中的表达变化。方法采用夹持视神经方法建立大鼠视神经不完全损伤模型，在夹伤后1、3、7、14和28d剥离视网膜，提取总RNA用半定量逆转录聚合酶反应（rt—PCR）方法测定视网膜中CNTF，CNTFR，OMgpmRNA的表达，同时观测术后1、7、14和28dF—VEP波形改变。结果大鼠视神经损伤后视网膜中CNTF，CNTFR，OMgpmRNA有所增加，正常大鼠视网膜中CNTF，CNTFR，OMgp少量表达。视神经损伤后F—VEP潜伏期延长，波幅降低，波形低而宽，14d后有所恢复。结论大鼠视神经损伤后，CNTF，CNTFR，OMgp表达均增加，而CNTFR的增加可为外源性CNTF治疗视神经损伤提供依据。F—VEP的振幅，潜时伤后变化与时间相关，伤后14d变化最明显，以后有恢复迹象。

睫状神经营养因子研究进展

睫状神经营养因子（ciliary neurotrophic factor，CNTF）自70年代发现以来备受重视，最早由Helfand等在1976年发现，1984年Barbin等从鸡睫状神经元提取获得，并于1989年获得CNTFcDNA，是一种在体外能促进鸡胚睫状神经元存活的蛋白质，属白细胞介素26（inter-leukin26，IL26）细胞因子家族成员。CNTF具有多种功能，能促进多种神经细胞的存活，是第1个被发现的能维持在体和离体脊髓运动神经元的存活及突起生长的神经营养因子。CNTF可诱导多种神经细胞分化，