低频超声对卵巢癌COC1细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察低频超声对人卵巢癌COC1体外生长的影响。方法 以低频超声 (频率 0 .2 4MHz,剂量 5 .12W /cm2 × 5s)辐照COC1细胞 ,采用MTT观察超声对COC1细胞增殖的抑制作用 ;流式细胞仪(FCM)、TUNEL法和光、电镜检测细胞凋亡。结果 超声波能够显著抑制卵巢癌COC1细胞增殖 ,辐照后 12h、2 4h、36h和 4 8h ,其MTT光吸收值与对照组相比显著降低 ;FCM检测超声辐照后 6h的COC1细胞凋亡率达 (2 5 .5 7± 4 .6 8) % ;同时TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡细胞 ;相差显微镜及电镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变。结论 低频超声辐照对人卵巢癌COC1细胞体外生长具有明显的抑制作用 ,并可诱导其凋亡。

聚焦超声对卵巢癌细胞株COC1细胞凋亡和Bcl-2/bax基因表达的影响

目的:研究低频脉冲的聚焦超声对人卵巢癌细胞株COC1的抗肿瘤作用,并探讨其诱导细胞凋亡的分子机制。方法:以低频脉冲聚焦超声(超声频率0.8MHz,声强83.6W/cm2,脉冲持续时间50μs)辐照卵巢癌COC1细胞10秒,采用MTT法观察超声对COC1细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪(FCM)、TUNEL法、荧光染色和光、电镜检测细胞凋亡;应用FCM免疫荧光技术观察Bcl-2、bax基因蛋白表达的变化。结果:低频脉冲聚焦超声可明显抑制存活卵巢癌COC1细胞株的增殖,辐照后12h、24h、36h和48h,COC1细胞MTT光吸收值与对照组相比显著降低;FCM检测超声辐照后6h的COC1细胞凋亡率达(23.57±4.62)%;Bcl-2蛋白的荧光指数(FI)降低,而bax蛋白FI升高。同时TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡细胞;荧光显微镜和电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变。结论:低频脉冲聚焦超声辐照对人卵巢癌细胞株COC1具有细胞毒作用,其机制为诱导辐照后存活的人卵巢癌细胞株COC1凋亡,bcl-2和bax蛋白可能参与了COC1细胞凋亡过程。

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用

目的观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72h)对COC1/DDP的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Westernblot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果GSPE对COC1/DDP具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变。流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高。Westernblot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加。结论原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关。

聚焦超声诱导卵巢癌细胞株COC1凋亡及其机制的初步研究

目的 :研究低频脉冲聚焦超声波对人卵巢癌细胞株COC1的抗肿瘤作用 ,并探讨其诱导细胞凋亡的分子机制。方法 :以低频脉冲聚焦超声 (超声频率 0 .8MHz ,声强 83.6W /cm2 ,脉肿持续时间 :5 0 μs)辐照卵巢癌COC1细胞 10s ,然后采用MTT法观察超声对COC1细胞增殖的抑制作用 ;流式细胞仪 (FCM )、TUNEL法、荧光染色和光、电镜检测细胞凋亡 ;应用FCM免疫荧光技术观察Bcl- 2、bax基因蛋白表达的变化。结果 :超声可明显抑制存活卵巢癌COC1细胞的增殖 ,辐照后 12h、2 4h、36h、4 8h ,COC1细胞MTT光吸收值与对照组相比显著降低 ;FCM检测超声辐照后 6h的COC1细胞凋亡率达 ( 2 3.5 7± 4 .6 2 ) % ;Bcl- 2蛋白的荧光指数 (FI)降低 ,而bax蛋白FI升高。同时TUNEL法观察到棕褐色着染的凋亡细胞 ;荧光显微镜和电镜下观察到凋亡小体形成等典型的形态学改变。结论 :低频脉冲聚焦超声辐照对人卵巢癌细胞株COC1具有细胞毒作用 ,其机制为诱导辐照后存活的人卵巢癌细胞株COC1凋亡 ,bcl- 2和bax蛋白可能参与了COC1细胞凋亡过程。

醋酸甲羟孕酮对卵巢癌CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转的影响

目的:探讨醋酸甲羟孕酮(MPA)对人卵巢卵巢癌耐药细胞株CoC1/cDDP细胞增殖和耐药逆转作用影响及机理。方法:采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度MPA对CoC1/cDDP不同作用时间的细胞生长抑制率,以及MPA与顺铂(DDP)合用与单独应用时生长抑制率;采用流式细胞技术行细胞周期时相及凋亡分析。结果:MPA明显抑制CoC1/cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间-剂量依赖性(P<0.01);MPA与DDP合用对CoC1/cDDP细胞的增殖抑制作用较单独应用时明显增强,且合用后G0/G1期、G2/M期细胞增加,而S期细胞减少凋亡率增高(P<0.01)。结论:MPA能明显抑制CoC1/cDDP细胞的生长,并能逆转细胞对顺铂的耐药性。

不同剂量的顺铂-紫杉醇对卵巢癌COC1/DDP细胞的影响

目的:探讨不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞的生长、细胞周期及诱导细胞凋亡的影响。方法:培养细胞,加入不同剂量的紫杉醇和顺铂,采取四唑盐(MTT)比色法、倒置显微镜观察法、Annexin法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪(FCM)检测不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞对细胞生长周期和凋亡的百分率的影响。结果:紫杉醇和顺铂显著抑制卵巢癌COC1/DDP细胞生长,能够显著阻滞细胞于S期,细胞核浓缩,DNA断裂片段增加,细胞凋亡明显。结论:通过对卵巢癌COC1/DDP细胞生长实验研究和形态学观察,证明紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞的影响细胞具有毒性作用,可通过相关途径诱导DU145细胞凋亡和坏死,抑制细胞生长。

顺铂诱导人卵巢癌细胞株COC1及COC1/DDP细胞凋亡的观察

目的:在体外细胞水平从细胞凋亡角度探讨卵巢癌多药耐药的发生机制,可以对找到治疗肿瘤耐药找到证据,对患者的治疗进行预后的判断,成为用药的指导原则。方法:对所有患者进行流式细胞仪的检测。结果:其都有凋亡的功效,和耐药细胞株进行对比可以得知敏感细胞株明显比其高很多,有统计学意义。结论:DDP作用后,COC1、COC1/DDP细胞对凋亡的敏感性存在显著性差异,提示获得性耐药可能与凋亡减少有关。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古抑菌素A对卵巢癌顺铂耐药细胞中hMLH1表达及DNA甲基化的影响

背景与目的:顺铂能造成细胞内DNA的损伤,而DNA错配修复蛋白能发现顺铂导致的DNA损伤,产生损伤信号,诱导细胞凋亡,从而摧毁肿瘤细胞。hMLH1是DNA错配修复系统的一个重要成员,其缺失能导致肿瘤对顺铂的耐受。本研究目的在于探讨卵巢癌顺铂耐药细胞中hMLH1表达及其基因启动子区DNA甲基化状态,同时探讨去甲基化制剂—5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'——deoxycytidine,5-Aza-dC)和组蛋白脱乙酰化酶抑制剂——曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对hMLH1表达及DNA甲基化的逆转作用。方法:应用5-Aza-dC和TSA作用于卵巢癌细胞COC1与其顺铂耐药细胞COC1/DDP,应用甲基化特异性PCR、RT-PCR和Western blot检测上述两种细胞中hMLH1基因启动子区DNA甲基化、hMLH1 mRNA和hMLH1蛋白表达的变化。MTT法检测药物对细胞增殖的影响。结果:COC1细胞存在hMLH1 mRNA和蛋白的表达,其启动子区域表现为DNA非甲基化。单独应用5-Aza-dC、TSA及联合应用5-Aza-dC和TSA对COC1细胞中hMLH1 mRNA、hMLH1蛋白表达和DNA甲基化均没有影响(P>0.05),细胞形态变化不明显。COC1/DDP细胞中hMLH1 mRNA和蛋白表达缺失,启动子区域表现为DNA甲基化。5-Aza-dC不但能使COC1/DDP细胞中hMLH1基因发生DNA去甲基化,而且能使表达缺失的hMLH1 mRNA和hMLH1蛋白重新表达。TSA对COC1/DDP细胞中hMLH1 mRNA、hMLH1蛋白表达和DNA甲基化均没有影响(P>0.05)。联合应用5-Aza-dC和TSA不但能使hMLH1基因发生DNA去甲基化,而且与单独应用5-Aza-dC相比较,对hMLH1 mRNA和hMLH1蛋白表达的影响更明显(P<0.05)。5-Aza-dC单用及联合应用TSA对COC1/DDP细胞生长抑制率明显高于COC1组、阴性对照组(P<0.05)。结论:COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性与hMLH1mRNA和蛋白的表达缺失有关,而hMLH1基因和蛋白的表达缺失与其基因启动子区DNA甲基化相关,5-Aza-dC单用及联合TSA使hMLH1基因发生DNA去甲基化,促进hMLH1的表达,逆转COC1/DDP细胞对DDP的耐药性。

三氧化二砷对卵巢癌细胞的生长及化疗敏感性的影响

目的：研究三氧化二砷（As2O3）对人卵巢癌COCl细胞顺铂（cDDP）化疗敏感性的影响，As2O3与cDDP联合作用的效应以及As2O3对COCl细胞的生长抑制效应及机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测不同浓度As2O3、cDDP作用72h对卵巢癌细胞生长的抑制作用，As2O3对顺铂化疗敏感性的影响及两药联合作用的效应。逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫印迹技术（Westernblot）分别检测PIK3CAmRNA和AKT、ERK、MMP-2蛋白表达的变化。结果：单独应用As2O3或cDDP和联合用药时卵巢癌COCl细胞生长均受到抑制，并呈浓度依赖关系，联合用药组抑制率明显高于单独用药组（P〈0．05）；0．08～0．15μmol／LAs2O3无明显细胞毒性，不能提高COCl细胞对顺铂的敏感性。各浓度（1、3、8、16μmol／L）As2O3作用24h可以下调AKT、MMP-2蛋白水平（P〈0．05），并呈浓度依赖效应，但对ERK蛋白的表达无显著影响。0．5、1、2、4μmol／LAs203作用4h，PIK3CAmRNA表达分别降低45．03％、53．05％、61．67％和72．91％（P〈0．05）。结论：As：03抑制COCl细胞增殖具有浓度依赖性，与顺铂联用有相加效应，可能与As2O3下调PIK3CAmRNA、AKT、MMP-2蛋白水平等有关。

蜕膜细胞条件培养液对卵巢癌细胞株COCl侵袭相关基因表达的影响

目的 研究蜕膜细胞条件培养液(DCM)对卵巢癌相关侵袭基因表达的影响。方法 原代培养早孕蜕膜细胞及晚孕蜕膜细胞并提取DCM,用DCM处理卵巢癌细胞株COCl,利用RT-PCR法对卵巢癌侵袭相关基因的表达进行分析。结果卵巢癌细胞株COC1表达基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)及纤溶酶原抑制剂(PAI-1),而不表达MMP-9、TIMP-1及尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)。早孕及晚孕DCM能显著下调卵巢癌细胞株COC1 MMP-2的表达(P<0.01);早孕及晚孕DCM处理的卵巢癌细胞株COC1也表达TIMP-2、PAI-1 mRNA,且有显著差异(P<0.01)。结论DCM可以通过改变卵巢癌细胞株COCl侵袭基因MMP-2/TIMP-2以及B-PA/PAI-1之间的平衡,从而降低卵巢癌细胞株COCl的侵袭能力。

索拉菲尼对COC1DDP细胞增殖凋亡及血管形成影响的研究

卵巢癌是女性生殖器管发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌的常见肿瘤之一，但是其死亡率却占女性各类生殖器官疾病之首。目前的综合治疗手段有化疗、手术、放疗、靶向治疗等。手术及化疗对进展期的卵巢癌治疗效果并不理想，而目前靶向治疗正逐渐成为抗肿瘤药物治疗的重点和热点。索拉菲尼是一种新型的多靶点的生物靶向药物，临床前研究和临床试验的结果都提示索拉菲尼具有抗肿瘤的作用。我们观察索拉菲尼对人体卵巢癌细胞株COC1／DDP的抑制作用，以期为使用索拉菲尼等靶向型药物治疗女性卵巢癌提供试验依据。