Caspase-3活性改变与人卵巢癌细胞系COC1/DDP耐药的关系

目的 探讨人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP中抗凋亡蛋白Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达及半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法:采用RT-PCR和Western Blot分析人卵巢癌顺铂敏感细胞株COC1和顺铂耐药株COC1/DDP中Bcl-XL、Bcl-2、细胞色素C的表达和caspase-3的活性。并用流式细胞术测定顺铂作用后COC1和COC1/DDP细胞株的凋亡率。结果:在COC1/DDP细胞中,Bcl-XL和Bcl-2的表达明显高于COC1细胞;顺铂作用后,在COC1/DDP细胞株中细胞色素C的表达明显减少,caspase-3活性明显降低(P<0.05);其凋亡率也明显低于COC1细胞株(P<0.05)。结论:人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂产生耐药可能与细胞内Bcl-XL、Bcl-2过度表达抑制了线粒体细胞色素C的释放及caspase-3活性有关。

川芎嗪对人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP的逆转作用研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨川芎嗪对COC1/DDP顺铂耐药性的逆转作用及其机制。方法采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8(cell counting kit-8)检测川芎嗪对COC1/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平,高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果历时5个月建立了在1.0μg/mL DDP作用下生长良好的耐药细胞株COC1/DDP,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素有不同程度的交叉耐药性;川芎嗪0.25 mg/mL对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.76倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH水平增高,顺铂含量下降,但经川芎嗪0.25 mg/mL干预后,COC1/DDP胞内的GSH水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论川芎嗪对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。

姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究

目的：探讨姜黄素对耐药卵巢癌细胞增殖、凋亡及对顺铂敏感性的影响并探讨其机制。方法：采用MTT法检测顺铂、姜黄素、顺铂与姜黄素合用对COC1/DDP细胞的生长抑制作用;用流式细胞仪检测2.5μg/ml顺铂、20μmol/L姜黄素、2.5μg/ml顺铂与20μmol/L姜黄素合用作用于COC1/DDP细胞48h后的细胞凋亡率;RT-PCR法检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在（15-35）μmol/L以内时对COC1/DDP有明显的增殖抑制作用,且呈一定的剂量-效应关系。顺铂的浓度在（1.25-5）μg/ml时加入姜黄素20μmol/L后耐药细胞生存率下降明显（P〈0.05）,尤以顺铂2.5μg/ml和姜黄素20μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加（P〈0.05）;顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Sur-vivin mRNA的表达明显降低（P〈0.05）,Caspase-3 mRNA的表达明显增高（P〈0.05）。结论：姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。

卵巢癌细胞株COC1/DDP多药耐药逆转对中性鞘糖脂表达的调控作用

为探讨逆转卵巢癌细胞株的多药耐药性 (MDR)对细胞表面中性鞘糖脂 (N GSLs)表达的调控作用 ,以三苯氧胺 (TAM )和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,用MTT法分析了TAM、VRP的逆转效应 ,采用改良的Hakamori方法提取、纯化了耐药亚株COC1/DDPMDR逆转前后及亲本株COC1细胞的N GSLs,高效薄层层析(HPTLC)分析了N GSLs的表达。结果显示 ,COC1/DDP和COC1的N GSLs表达有显著差异 ,COC1/DDP的CMH表达较COC1强 ;经TAM、VRP作用后 ,COC1/DDP的耐药性发生逆转 ,CMH表达降低。说明卵巢癌的多药耐药性与中性鞘糖脂CMH相关 ,CMH可能为卵巢癌MDR相关鞘糖脂抗原。

姜黄素对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的增敏作用及其机制的研究

目的：探讨姜黄素对卵巢癌耐药细胞系COC1／DDP的增敏作用并探讨其机制。方法：采用MTT法检测姜黄素对COC1／DDP细胞的增敏作用；用流式细胞仪检测单用顺铂、单用姜黄素、顺铂与姜黄素合用作用于COC1／DDP细胞48h后的细胞凋亡率；Westernblot法检测单用顺铂及顺铂与姜黄素合用后各组细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达。结果：姜黄素浓度在15～35μmol／L以内时以一定的剂量一效应关系对COC1／DDP有明显的增殖抑制作用。顺铂的浓度在1．25～5mg／L时加入20μmol／L姜黄素后耐药细胞生存率下降明显（P〈0．05），尤以2．5mg／L顺铂和20μmol／L姜黄素联合作用时，耐药细胞生存率下降最明显；COC1／DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂及单用姜黄素相比，凋亡率明显增加（P〈0．05）；顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比Bcl-2、Survivin蛋白的表达明显降低（P〈0．05），Caspase-3蛋白的表达明显增高（P〈0．05）。结论：姜黄素能够显著抑制COC-／DDP增殖，并能增强该细胞系对顺铂的敏感性，其机制可能与降低Bcl-2、Survivin蛋白的表达，增加CasDase-3蛋白的表汰有关。

葡萄籽原花青素对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用

目的观察葡萄籽来源的原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP在体外的增殖抑制作用,并初步探讨其作用机制。方法以MTT法检测不同浓度的GSPE(0、20、40、80、160、320μg/ml)不同时间(12、24、36、48、72h)对COC1/DDP的增殖抑制作用,HE染色观察细胞形态变化,流式细胞仪和TUNEL检测细胞周期和凋亡,Westernblot检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果GSPE对COC1/DDP具有明显的增殖抑制作用,且呈剂量-时间依赖性,不同浓度GSPE能引起细胞形态明显的凋亡改变。流式细胞术和TUNEL表明GSPE可以诱导细胞凋亡,且随着药物浓度增加,凋亡率升高。Westernblot检测显示随着药物浓度增加,Caspase-3蛋白表达增加。结论原花青素可以在体外抑制人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关。

姜黄素增强卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP对顺铂敏感性的研究

目的:探讨姜黄素的使用与卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP对顺铂化疗敏感性的关系。方法:采用MTT法和TUNEL法检测姜黄素、顺铂单独和联合作用时对COC1/DDP细胞增殖和凋亡的影响;RT-PCR检测上述各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Smac的表达。结果:顺铂的浓度在1.25～5μg/mL时与姜黄素合用后耐药细胞生存率下降明显(P<0.05),尤以2.5μg/mL顺铂和20μmol/L姜黄素联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显;顺铂与姜黄素联合用药与单独用药相比,凋亡率明显增加(P<0.05);联合用药与单独用药相比Bcl-2 mRNA的表达明显降低(P<0.05),Smac mRNA的表达明显增高(P<0.05)。结论:姜黄素能够显著抑制COC1/DDP增殖,并能增强该细胞系对顺铂的敏感性,机制可能与降低Bcl-2基因的表达,增加Smac基因的表达有关。

卵巢癌耐药细胞亚株(coc1/DDP)中DNA定量分析

卵巢癌的死亡率在女性生殖道恶性肿瘤中占首位，其５年生存率仅为３０％～４０％。其耐药性的产生是导致治疗失败的主要原因之一。本研究对卵巢癌耐药细胞株（ＣＯＣ１／ＤＤＰ）进行ＤＮＡ相对定量分析，探讨ＤＮＡ含量与耐药性之间的关系。１材料与方法１．１材料亲代细...

不同剂量的顺铂-紫杉醇对卵巢癌COC1/DDP细胞的影响

目的:探讨不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞的生长、细胞周期及诱导细胞凋亡的影响。方法:培养细胞,加入不同剂量的紫杉醇和顺铂,采取四唑盐(MTT)比色法、倒置显微镜观察法、Annexin法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪(FCM)检测不同剂量紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞对细胞生长周期和凋亡的百分率的影响。结果:紫杉醇和顺铂显著抑制卵巢癌COC1/DDP细胞生长,能够显著阻滞细胞于S期,细胞核浓缩,DNA断裂片段增加,细胞凋亡明显。结论:通过对卵巢癌COC1/DDP细胞生长实验研究和形态学观察,证明紫杉醇和顺铂对卵巢癌COC1/DDP细胞的影响细胞具有毒性作用,可通过相关途径诱导DU145细胞凋亡和坏死,抑制细胞生长。

顺铂诱导人卵巢癌细胞株COC1及COC1/DDP细胞凋亡的观察

目的:在体外细胞水平从细胞凋亡角度探讨卵巢癌多药耐药的发生机制,可以对找到治疗肿瘤耐药找到证据,对患者的治疗进行预后的判断,成为用药的指导原则。方法:对所有患者进行流式细胞仪的检测。结果:其都有凋亡的功效,和耐药细胞株进行对比可以得知敏感细胞株明显比其高很多,有统计学意义。结论:DDP作用后,COC1、COC1/DDP细胞对凋亡的敏感性存在显著性差异,提示获得性耐药可能与凋亡减少有关。

葛根汤通过下调THRB表达逆转COC1/DDP细胞顺铂耐药

目的研究葛根汤对THRB表达的影响,探究该方逆转人卵巢癌细胞株COC1/DDP顺铂耐药的机制。方法采用血清药理学方法制备含药血清,MTT比色法筛选剂量。不同浓度顺铂联合含药血清处理COC1、COC1/DDP细胞后,计算IC 50、耐药指数,将COC1/DDP细胞随机分为对照组、DDP组及葛根汤低、中、高剂量组,对应药物干预48 h后,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测THRB mRNA转录水平,Western blot检测THRB、MRD-1、P-gp蛋白表达。结果适宜剂量为10%低剂量含药血清作用48 h。低剂量葛根汤含药血清联合作用能逆转COC1/DDP细胞肿瘤耐药,降低COC1/DDP细胞对顺铂的耐药指数。在COC1细胞株中,THRB mRNA为低水平转录表达;在耐药COC1/DDP细胞中,THRB mRNA均为高水平转录。葛根汤干预后,COC1/DDP细胞内高水平转录的THRB mRNA转录下调,THRB蛋白表达降低,葛根汤低、中、高剂量组THRB mRNA及蛋白表达与DDP组比较均降低(P<0.05)。葛根汤作用于卵巢癌COC1/DDP细胞48 h后,MRD-1、P-gp耐药相关蛋白表达降低,并呈一定的剂量依赖性,葛根汤剂量越高,肿瘤细胞的耐药相关蛋白表达降低程度越明显(P<0.05)。结论葛根汤能有效增加人卵巢癌细胞株COC1/DDP对顺铂的敏感性,其机制可能与降低THRB基因转录和蛋白表达有关。

马蔺子素对COC1/DDP的逆转作用研究

目的:建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨马蔺子素对COC1/DDP的逆转作用。方法:采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;以CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测马蔺子素对COC1/DDP细胞增殖的抑制作用;以GSH和GSSG试剂盒检测细胞内GSH的水平;以高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果:历时5个月建立COC1/DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9.44,对卡铂、长春新碱和阿霉素均有不同程度的交叉耐药性;马蔺子素对COC1/DDP的顺铂耐药性有逆转作用,逆转倍数达到3.44倍;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降,但经马蔺子素干预后,COC1/DDP胞内的GSH的水平降低,顺铂的含量增加(P<0.01)。结论:马蔺子素对COC1/DDP有逆转作用,其机制可能与干预COC1/DDP细胞内GSH/GST-π解毒系统,增加细胞内顺铂的含量有关。

长链非编码RNA FTH1P3靶向miR-218降低人肺癌顺铂耐药细胞对顺铂的化疗敏感性

目的:研究长链非编码RNA铁蛋白重链1假基因3(ferritin heavy chain 1 pseudogene 3,FTH1P3)对人肺癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株(A549/DDP)DDP化疗敏感性的影响,并探究其潜在的分子机制。方法:采用荧光定量PCR检测FTH1P3与miR-218在A549和A549/DDP细胞中的表达。采用MTT法、流式细胞术、Hoechst 33258染色及CASP3活性试验评估细胞对DDP化疗敏感性的影响。采用荧光素酶报告基因和RNA蛋白免疫沉淀试验分析FTH1P3对miR-218的调控作用。结果:与A549细胞相比,A549/DDP细胞中FTH1P3表达上调,而miR-218表达下调(P<0.05)。与si-NC相比,si-FTH1P3增加A549/DDP细胞对DDP的化疗敏感性,表现为半抑制浓度(IC_(50))降低,多药耐药关联蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)和ATP结合家族亚家族B成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)mRNA表达下调,细胞生长能力降低、凋亡增加及CASP3活性升高(P<0.05)。FTH1P3直接结合miR-218并抑制其表达(P<0.05)。与NC抑制物相比,miR-218抑制物能够逆转经si-FTH1P3处理的A549/DDP细胞对DDP的化疗敏感性(P<0.05)。结论:FTH1P3在A549/DDP细胞中表达上调,FTH1P3降低A549/DDP细胞对DDP的化疗敏感性,其机制与miR-218表达下调有关。

LINC00536靶向miR-17-5p对卵巢癌细胞顺铂药物耐药性的影响

目的研究LINC00536对卵巢癌细胞增殖、凋亡和顺铂(DDP)敏感性的影响及潜在作用机制。方法qRT-PCR检测卵巢癌组织和卵巢癌细胞系COC1和COC1/DDP中LINC00536的水平,然后在COC1/DDP细胞中转染si-LINC00536和/或anti-miR-17-5p表达,用2.5μg/mL DDP处理COC1/DDP细胞,MTT法和流式细胞术测定COC1/DDP细胞存活率、凋亡率和细胞周期;Western blot检测细胞中Ki67和clv-caspase-3蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证LINC00536和miR-17-5p的靶向关系。结果与癌旁组织相比,卵巢癌组织中LINC00536的水平显著上调(P<0.05);与卵巢癌细胞COC1相比,耐顺铂细胞COC1/DDP中LINC00536的水平也显著上调(P<0.05);2.5μg/mL DDP处理COC1/DDP细胞后,COC1/DDP细胞G0期细胞百分比升高,S期细胞百分比降低,细胞存活率显著降低,细胞凋亡率升高;抑制LINC00536可提高COC1/DDP细胞凋亡率、clv-caspase-3蛋白表达量和G0期细胞百分比;降低COC1/DDP细胞存活率、Ki67蛋白水平及S期细胞百分比;LINC00536靶向负调控miR-17-5p的表达;抑制miR-17-5p能逆转抑制LINC00536对DDP处理的COC1/DDP增殖、凋亡的作用。结论LINC00536可靶向miR-17-5p调控卵巢癌COC1/DDP细胞增殖、凋亡及其对顺铂的敏感性。LINC00536有望成为卵巢癌顺铂增敏靶点。

凋亡相关基因及蛋白的表达与人卵巢癌细胞顺铂耐药的关系

目的探讨COC1/DDP和COC1中凋亡相关基因及凋亡相关蛋白的表达与人卵巢癌顺铂耐药的关系。方法采用流式细胞仪检测不同浓度顺铂作用于COC1及COC1/DDP细胞48h后细胞凋亡率;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关基因及蛋白Bcl-2、Caspase-3、Smac和Survivin在COC1和COC1/DDP中的表达。结果DDP作用于COC1和COC1/DDP细胞48h后细胞随着DDP浓度的升高,凋亡率也相应增高。COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的表达明显高于COC1。COC1/DDP中促进凋亡的基因及蛋白Smac、Caspase-3的表达明显低于COC1。结论在COC1/DDP中抗凋亡基因及蛋白Bcl-2、Survivin的高表达以及促进凋亡的基因及蛋白Smac和Caspase-3的低表达可能参与COC1/DDP对DDP耐药的发生机制。

顺铂联合热疗对卵巢癌铂敏感细胞株COC1和铂耐药细胞株COC1/DDP的影响

目的探讨热疗联合化疗对卵巢癌铂敏感细胞株COC1和铂耐药细胞株COC1/DDP增殖、凋亡的作用、逆转耐药细胞的耐药性及其可能机制。方法采用MTT法检测热疗及联合不同浓度的顺铂(1.25、2.5、5、10、20μg.mL-1)对卵巢癌细胞株COC1,COC1/DDP生长的抑制作用;RT-PCR法检测两种细胞株中Survivin基因及ERCC1基因mRNA表达的差异。结果细胞株COC1/DDP在42℃联合顺铂作用下凋亡率增加明显,细胞半数致死量由4.98μg.mL-1(37℃)降至1.82μg.mL-1(42℃),对顺铂的敏感性增加了2.78倍(P<0.01),COC1半数致死量无明显差异(P>0.05);42℃时细胞株中ERCC1基因和survivin基因的mRNA表达量均低于37℃时的表达(P<0.05)。结论热疗本身具有杀灭肿瘤细胞的作用,联合化疗可增强耐药株对顺铂的敏感性,一定程度上逆转了铂耐药性,其机制可能与降低survivin基因和ERCC1基因mRNA的表达有关。

姜黄素促卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制探索

目的研究姜黄素对耐药卵巢癌细胞的促凋亡作用及其可能的机理。方法用MTT法检测不同浓度姜黄素、化疗药物〔顺铂(DDP),紫杉醇〕及姜黄素联合化疗药物(姜黄素+顺铂,姜黄素+紫杉醇)作用于卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞48h后各组的细胞抑制率,并用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡率。RT-PCR技术检测姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂作用于COC1/DDP细胞48h后各组的磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基(PI3KCA)mRNA的表达。结果不同浓度姜黄素作用COC1/DDP 48h后,细胞的抑制率和凋亡率随着姜黄素浓度的升高相应增高,姜黄素联合化疗药物作用组比单用化疗药物组的细胞抑制率及细胞凋亡率高(P<0.05)。顺铂与姜黄素联合用药与顺铂单独作用相比PI3 KCA mRNA的表达降低(P<0.05)。结论姜黄素能够促进卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的凋亡,这一作用可能与姜黄素和化疗药物协同诱导该细胞系的凋亡有关,其机制可能为降低PI3 KCA基因的表达。

人卵巢癌顺铂耐药细胞株的建立及耐药机制研究

目的:建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP,探讨其耐药的机制。方法:采用逐步递增DDP浓度、体外间歇诱导法诱导卵巢癌细胞系COC1,建立卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP;CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测各种抗癌药对COC1和COC1/DDP细胞增殖的抑制作用,并计算耐药指数;GSH和GSSG试剂盒检测细胞内谷胱甘肽(glutathione,GSH)的水平;高效液相色谱测定细胞内顺铂的含量。结果:历时5个月建立COC1/DDP,对顺铂耐药性稳定,耐药指数为9.44;与COC1比较,COC1/DDP细胞内GSH的水平增高,顺铂含量下降(P<0.01)。结论:人卵巢癌顺铂耐药细胞株COC1/DDP耐药性稳定,耐药机制可能与GSH/GST-π解毒系统活性增强,减少细胞内顺铂含量有关。

索拉菲尼对COC1DDP细胞增殖凋亡及血管形成影响的研究

卵巢癌是女性生殖器管发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌的常见肿瘤之一，但是其死亡率却占女性各类生殖器官疾病之首。目前的综合治疗手段有化疗、手术、放疗、靶向治疗等。手术及化疗对进展期的卵巢癌治疗效果并不理想，而目前靶向治疗正逐渐成为抗肿瘤药物治疗的重点和热点。索拉菲尼是一种新型的多靶点的生物靶向药物，临床前研究和临床试验的结果都提示索拉菲尼具有抗肿瘤的作用。我们观察索拉菲尼对人体卵巢癌细胞株COC1／DDP的抑制作用，以期为使用索拉菲尼等靶向型药物治疗女性卵巢癌提供试验依据。