基于线粒体tRNA^(leu)~COII和COI的贵州东方蜜蜂群体遗传分析

【目的】明确贵州省东方蜜蜂群体的遗传结构和遗传多样性,掌握其遗传现状,为贵州省东方蜜蜂的遗传资源评价及保护利用提供参考依据。【方法】基于线粒体tRNA^(leu)~COII和COI片段对贵州省内19个采样点的1282群东方蜜蜂进行遗传分析,计算单倍型多样性(Hd)、平均核苷酸差异数(K)和核苷酸多样性(π)等遗传多样性指数,采用中性检验(Tajima's D和Fu's Fs)评估群体扩张情况,通过计算遗传分化系数(Fst)、构建系统发育进化树和分子方差分析评估其遗传分化,并开展环境因子相关分析以明确遗传分化的作用因子。【结果】贵州东方蜜蜂在线粒体tRNA^(leu)~COII片段上的Hd介于0.5421~0.9167,π介于0.00174~0.00527,K介于0.611~1.854,其中台江、雷山、麻江、罗甸、紫云、晴隆和威宁等7个采样点发生过群体扩张;在线粒体COI片段上的Hd介于0.5710~0.9109,π介于0.00109~0.00261,K介于0.874~2.084,其中松桃、江口、印江、台江、石阡、雷山、罗甸、紫云、黔西、晴隆和威宁等11个采样点发生过群体扩张。贵州东、西部东方蜜蜂群体间存在中度遗传分化(在tRNA^(leu)~COII片段上的Fst=0.04±0.02,在COI片段上的Fst=0.07±0.04),贵州西部东方蜜蜂群体内也存在中度遗传分化(在tRNA^(leu)~COII片段上的Fst=0.04±0.02,在COI片段上的Fst=0.07±0.03)。相关分析结果显示,贵州西部东方蜜蜂组群的遗传分化程度与海拔呈弱相关,但与温度、湿度等环境因子呈显著正相关。【结论】贵州省东方蜜蜂在线粒体tRNA^(leu)~COII和COI片段上的遗传多样性处于较高水平,主要归功于蜂群数量大和饲养方式较原始;贵州东方蜜蜂整体上呈现中度遗传分化,且西部东方蜜蜂组群内部的遗传分化程度较东部东方蜜蜂组群更高,主要与温度和湿度等环境因子密切相关,是其为适应所处环境而进化产生,而非海拔因素造成。

五种真蝽(Pentatoma Olivier) mtDNA-COII基因序列分析及系统发育关系初探(半翅目:蝽科)

测定并比较分析了真蝽属(Pentatoma)5种昆虫:褐真蝽P.semiannulata、斜纹真蝽P.illuminata、红足真蝽P.rufipes、日本真蝽P.japonica和金绿真蝽P.metallifera以及益蝽亚科2种外群种类(并蝽Pinthaeushumeralis和蠋蝽Armacustos)mtDNA-COII基因部分序列,依据分子数据建立了该5种昆虫的系统发育关系。结果显示,5种真蝽COII基因A+T平均含量(73%)高于弹尾目、缨尾目和直翅目昆虫,低于双翅目、鳞翅目及膜翅目昆虫,而与缨翅目的蓟马和半翅目的突角长蝽Oncopeltusfasciatus非常接近。系统发育结果显示,红足真蝽与日本真蝽亲缘关系最近,形成一个姊妹群,斜纹真蝽与金绿真蝽亲缘关系较近,也形成一个姊妹群,褐真蝽为较早分化的种类。

中哈边境阿拉山口口岸输入性猫栉首蚤指名亚种线粒体COI和COII基因序列分析

目的分析阿拉山口口岸地区输入性猫栉首蚤指名亚种细胞色素C氧化酶Ⅰ(COI)和Ⅱ(COII)基因特征和系统进化关系。方法从2014年1月入境集装箱死猫体表采集蚤类样本,形态学鉴定完毕后提取DNA,PCR扩增COI和COII基因并测定序列,使用Mega 6.0通过ML法构建系统发育树。结果猫栉首蚤指名亚种COI和COII基因富含A+T,碱基突变多为置换突变,无移码,缺失和插入突变;Blast显示与澳大利亚猫栉首蚤指名亚种同源性较高(99%)。结论 COI基因序列存在足够的变异能够区分亲缘关系很近的种类,为外来或新发现的蚤种的鉴别提供了分子水平的技术依据。

基于COII全基因序列对蜻科部分昆虫的分子系统发育分析(蜻蜓目:差翅亚目)

通过设计蜻蜓目COII全基因的非特异性引物,获得蜻科5亚科15属21种蜻蜓的21条COII基因全序列.采用Clustal X(1.8),MEGA 2.1,Phylip 3.6以及MrBayes 3.0等生物学软件对其进行分子系统学研究,结果显示,①蜻科COII的A+T含量非常低(69%),这与蜻蜓目是一比较原始类群的观点相一致;②蜻科COII全序列均含有2个半胱氨酸,这一点有别于其他类群;③各属内的种类基本聚在一起,大黄赤蜻与红蜻近缘而远离赤蜻属,褐蜻属与赤蜻属近缘,曲缘蜻亚科与赤蜻亚科近缘;④斜痣蜻亚科的进化速度相对较慢,蜻亚科与赤蜻亚科的进化速度稍快.

云南师宗和江苏盱眙中华按蚊的分子鉴定及COII基因序列分析

为了了解云南省师宗县和江苏省盱眙县中华按蚊的分子鉴定及COII基因序列特征,2014年7月在云南省师宗县和江苏省盱眙县采集蚊虫标本,通过形态学鉴定出中华按蚊,再提取蚊虫基因组DNA,用COII基因特异引物和序列测定,然后采用生物信息学软件进行核苷酸序列同源性和遗传进化分析。结果在云南省师宗县县城周围采集蚊虫标本314只,其中按蚊234只(74.52%);在江苏省盱眙县桂五镇采集蚊虫标本212只,其中按蚊143只(67.45%)。经形态学鉴定,每个地方挑选了8只疑似中华按蚊进行序列分析,结果显示,16只蚊虫COII核苷酸序列同源性在98%-100%之间,遗传进化分析显示,16只蚊虫全部与中华按蚊位于同一进化分支内。表明了采用分子鉴定的方法可有效地进行蚊虫种类鉴定。

利用线粒体COII基因序列对中国尾蛱蝶属系统分化的研究(鳞翅目:蛱蝶科)

利用线粒体COII基因序列分析法 ,研究了我国尾蛱蝶属 5种蝴蝶的系统分化。结果表明 ,在尾蛱蝶属 5个种的 12个样品中 ,4 0 5bp长的COII片段有 11 4 %的位点为多态性位点 ,大部分的碱基改变是转换。各物种内不同个体间的差异明显小于不同物种间的差异 ,种内个体间的差异一般为 0 5 %～ 1 5 % ,各物种间的差异绝大多数在 4 %以上。利用最大似然性法构建的尾蛱蝶属聚类关系图显示 ,尾蛱蝶属蝴蝶分为两大分支 ,一支包括大二尾蛱蝶、二尾蛱蝶和忘忧尾蛱蝶 ,另外一个分支包括窄斑凤尾蛱蝶和黑凤尾蛱蝶聚在一起。在大二尾蛱蝶、二尾蛱蝶和忘忧尾蛱蝶这一分支中 ,大二尾蛱蝶和忘忧尾蛱蝶的亲缘关系较近 ,而二尾蛱蝶较远。这些分子系统学的结果均与形态学的结果相一致 。

基于COII序列的云南东方蜜蜂遗传分化研究

【目的】研究云南东方蜜蜂群体的遗传多样性及其遗传分化,为其种质资源保护和有效利用提供参考依据。【方法】对云南不同地理东方蜜蜂群体线粒体的COII部分序列（1-259 bp）进行测序,并分析其遗传分化情况。【结果】在6个云南东方蜜蜂群体的线粒体COII部分序列中发现有5个变异位点,并确定存在7种单倍型,其单倍型多样度为0-0.644,核苷酸多样度为0-0.00420,群体间的遗传分化系数（Fst）为0.00966-0.69753。从基于mt DNA COII单倍型的东方蜜蜂NJ系统发生树可以看出,云南东方蜜蜂群体mt DNA COII序列的7种单倍型与我国境内其他地区及邻国日本的单倍型聚为一类,而与其他国家或地区的单倍型分开。【结论】云南东方蜜蜂群体遗传多样性丰富,不同地理群体间遗传分化明显,尤其是武定东方蜜蜂群体的整齐度较差、遗传结构较复杂。

缘蝽科部分种类线粒体COII基因的分子系统学研究(半翅目:异翅亚目)

测定分析了缘蝽科18种昆虫COII基因部分片段,结果显示,T、C、A、G的平均含量分别为33.6%、16.4%、36.3%和13.7%.A+T平均含量达到69.9%,表现出较强的A+T含量偏向性.碱基替换中转换频率是颠换的1.1倍;转换的发生以T与C之间为主,颠换以T与A之间为主.从GenBank下载长蝽总科的Oncopeltus fasciatus和猎蝽总科的Triatoma dimidiata作为外群,建立缘蝽科17属18种间的系统发育关系.结果证明狭义巨缘蝽族为一个单系群,竹缘蝽族的两个属为一单系群,鼻缘蝽属与同缘蝽属亲缘关系非常近,环胫黑缘蝽(沟缘蝽亚科)和竹缘蝽族亲缘关系比较近,叶足特缘蝽和怪缘蝽亲缘关系较近.

COIIS的构想

1、COIIS 是什么? 中国兵器工业信息系统是一个为兵器工业服务的、广域分布的、多层次、多传媒的综合应用信息系统,它主要由三大部分构成: 总公司机关和直属公司构成的上层管理决策及办公自动化系统,它包括以信息中心的计算机主机——卫星通信网中心站——程控电话总机三位一体的核心设备,各厅、局、直属公司的局域网(LAN)及京内企事业单位的局域网,并通过北京城域网连为一体。

手法复位石膏外固定、手术切开复位内固定治疗CoIIes骨折的效果对比

对比分析手法复位石膏外固定、手术切开复位内固定治疗CoIIes骨折中的应用与效果。方法:纳入我院2019年2月至2020年6月期间收治的CoIIes骨折患者62例为研究对象,通过随机数字表法分为研究组及对照组(n=31例),两组患者分别接受手法复位石膏外固定治疗、手术切开复位内固定治疗,就两组患者复位后早期血清炎性因子水平、复位后3个月关节功能恢复情况等进行评定对比。结果:复位后7d两组患者IL-6、TNF-α、CRP等炎性因子水平均较之复位后1d显著降低(P<0.05),研究组患者各指标均显著低于对照组(P<0.05),复位后3个月两组患者Cooney腕关节功能评分量表及Mayo肘关节功能评分均显著升高(P<0.05),研究组评分显著高于对照组(P<0.05)。结论:对CoIIes骨折患者开展手法复位石膏外固定治疗,与手术切开复位内固定相较,但促进复位后炎性状况改善、促进关节功能恢复方面的价值突出。

云南边境地区果实蝇属种类DNA条形码鉴定

【目的】果实蝇属Bactrocera中有国际上重要的检疫性害虫,基于形态的物种鉴定有一定的局限性。另一方面,云南边境地区为东南亚地区实蝇入侵我国的重要通道。因此,对该地区实蝇分子鉴定方法的研究对于该属物种的快速准确鉴定具有重要意义。本研究旨在探讨DNA条形码技术在果实蝇属物种鉴定中的有效性。【方法】使用线粒体基因COI和COII序列的通用引物对果实蝇属20个物种60份样品进行PCR扩增、测序和序列分析;采取距离方法和建树方法评价2种序列的鉴别能力。【结果】COI和COII序列平均长度分别为682 bp和339 bp,种内和种间遗传差异较大,有较明显的遗传距离间隔(barcoding gap),鉴定成功率分别为91.2%和90.7%。另外,分子系统树表明华实蝇亚属Sinodacus不是单系群。【结论】COI和COII序列均能够将绝大多数果实蝇属物种进行准确鉴别,应用COI或COII序列进行果实蝇属物种鉴定具有一定的可行性。

中国南方双斑长跗萤叶甲地理种群遗传结构及Wolbachia感染

【目的】双斑长跗萤叶甲Monolepta hieroglyphica为多食性害虫,可取食为害多种农作物。本研究旨在探究中国南方地区分布的双斑长跗萤叶甲地理种群的遗传多样性、遗传结构及种群间的遗传分化程度与基因流水平,探究共生菌Wolbachia在中国南方双斑长跗萤叶甲地理种群中的多样性和感染情况。【方法】以线粒体COII基因作为分子标记,对中国南方双斑长跗萤叶甲14个地理种群403头个体的COII基因片段进行PCR扩增及测序,分析单倍型多样性(Hd)、种群间遗传分化指数(Fst)和基因流(Nm),并进行分子方差分析(AMOVA)以及Tajima’s D和Fu’s Fs中性检验,构建单倍型中介网络关系图及系统发育树。PCR扩增Wolbachia的wsp基因,对供试种群进行Wolbachia感染率检测,并利用获得的wsp基因序列进行Wolbachia株系区分和系统发育分析。【结果】在供试的双斑长跗萤叶甲403头个体中共检测到23种COII基因单倍型,在系统进化上分成两大分支。总种群Hd为0.748,各种群的Hd在0.394~0.782间。中性检验结果表明种群在进化上遵循中性模型,在较近的历史时期内没有经历明显的群体扩张事件。总种群的Fst为0.2481,Nm为0.76,AMOVA结果表明种群间的遗传分化主要来自种群内部,占方差比率的73.75%。种群间的遗传距离与地理距离间无显著相关性(R=0.2898,P=0.0640)。14个地理种群的Wolbachia感染率在92.59%~100%之间,平均感染率为97.60%;基于wsp基因序列,在检测的感染个体中共发现6种Wolbachia株系(wMhie1~wMhie6),均属于A大组,这6种株系与已知的代表性株系区别明显而在系统发生树中单独聚为一个分支。【结论】中国南方双斑长跗萤叶甲种群遗传多样性较高,多数种群间存在明显的遗传分化,种群间基因交流较低,遗传分化与地理隔离之间无显著相关性。Wolbachia在中国南方双斑长跗萤叶甲种群中具有很高的感染率及丰富的感染类群。

用mtDNA COⅡ基因序列确定我国北部湾红树植物白骨壤虫灾虫源

从我国近年来遭受特大虫灾的北部湾沿海红树植物白骨壤上采集害虫标本,测定其线粒体DNA细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ(COⅡ)基因序列,并与采自深圳湾白骨壤上的害虫标本以及相关类群的COⅡ基因序列进行同源性比较,结果表明来自北部湾与深圳湾白骨壤的虫源均为瘤斑螟属Ptyomaxia,而不是细斑螟属Oligochroa.分子系统发育分析为纠正以前普遍认为广州小斑螟引发我国红树林特大虫灾的观点提供了新的证据.

基于线粒体COⅡ基因部分序列的中国斑腿蝗科部分属种系统发育研究

基于斑腿蝗科切翅蝗亚科6属11种蝗虫的COⅡ基因585bp序列进行系统发育分析,为该类群的系统发育提供分子生物学方面的证据。通过MEGA5.0软件分析显示这些序列具有明显的高A+T偏向性和R值与距离依赖性特征。分别采用邻接法(Neighbor Joining,NJ)、最大似然法(Maximum Likelihood,ML)和最大简约法(Maximum Parsimony,MP)构建系统树,结果显示:凸额蝗属、黑纹蝗属与其它各属关系较远;斜翅蝗与南方十字蝗关系较近;越北胸斑蝗与广东斜翅蝗和大斜翅蝗关系较近;异角胸斑蝗与奇冠蝗关系较近;切翅蝗亚科各属种间的关系还需要进一步研究。

检疫性有害生物枣咔实蝇的快速分子鉴定

枣咔实蝇Carpomya vesuviana Costa是枣树果实的一种重要检疫性害虫,其寄主枣树在我国种植广泛,该虫一旦传入和扩散,将对我国新疆红枣产业造成严重危害。本研究以枣咔实蝇蛹和成虫为对象,通过提取枣咔实蝇蛹和成虫样品的基因组DNA,借助生物信息学分析软件挖掘枣咔实蝇ITS2、16S rRNA、CYT-B-D、CYT-B-C、COI-5'、COI-3'、COII等分子鉴定靶点序列并设计扩增引物,以建立枣咔实蝇的快速分子鉴定技术。PCR扩增、测序和序列相似性结果显示,从枣咔实蝇蛹和成虫中获得的16条序列(含14条新序列),分析表明其中CYT-B、COI、COII可作为枣咔实蝇分子鉴定序列。该技术可应用于枣咔实蝇的识别鉴定、实时监测、早期防治等项工作。

产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌的耐药性及相关耐药机制

目的了解安徽省35所医院2005年随机月份临床分离402株大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶及对常用抗菌药物的耐药情况,揭示其相关耐药机制,指导临床合理用药方法三维试验筛选产AmpC酶株;多重PCR检测产质粒介导AmpC酶菌株,对产质粒介导AmpC酶菌株用PCR方法检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因、Ⅰ类整合子基因盒插入序列和主动外排系统acrAB-tolC基因结果检出产质粒介导AmpC酶菌株28株(7.0%),其中2株经测序证实为新的质粒ampC基因型(GenBank登录号分别为EF054895,EF417572)产酶菌株对12种常用抗菌药物,除亚胺培南、美罗培南全部敏感外.对其他大多数抗菌药物耐药率均高于非产酶株28株产酶菌株中有23株表现为多重耐药,20株检测出各型ESBLs基因,21株扩增出Ⅰ类整合子基因盒插入序列,20株主动外排系统acrAB-tolC基因阳性结论产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌对临床常用抗菌药物的耐药率均较高,多重耐药现象普遍,同时存在多种耐药机制,其中以产生灭活酶和Ⅰ类整合子介导的耐药机制为主对产酶株临床经验用药可选用碳青霉烯类、阿米卡星及第四代头孢菌素类抗菌药物。

亚洲部分地区东方蜜蜂mtDNA多态性研究

就云南省7个不同样点共7群东方蜜蜂蜂群开展mtDNA内切酶位点测试和分析研究,并与菲律宾的东方蜜蜂作对比分析。内切酶DraI分析7个蜂群,共发现4个内切酶位点;云南东方蜜蜂mtDNA的tRNAleu-COII基因的序列没有长度多态性,EcoRI内切酶位点共有4个,与菲律宾的吕宋岛的东方蜜蜂属于同一单倍型。另外,对来自尼泊尔、泰国、越南、老挝以及我国北京、云南等地的共13群蜜蜂mtDNACOII基因的420个碱基对进行测序分析,发现13群东方蜜蜂分析的420个碱基序列里,位点变异从0个到5个不等,变异率从0到1 19% 用邻接法(neighbor-joining)构建的分子系统树可以看出分枝树主要分为两个类群:高纬度或高海拔的蜂群为一个类群,它们主要来自撒营盘(2)(China4)、丽江(China7)、北京(1)(China1)、尼泊尔(Nepal)、北京(2)(China2)、河口(1)(China8)和越南(2)(Vietnam2)。另一个类群的主要来自低纬度或低海拔的蜂群,它们主要来自撒营盘(1)(China3)、景洪(China5)、越南(1)(Vietnam1)、泰国(Thailand)、河口(2)(China6)和老挝(Laos)。该实验为我国东方蜜蜂资源的保护和开发研究提供了重要的信息和手段。

中国斑腿蝗科线粒体基因的分子系统学研究(英文)

使用线粒体基因COⅠ,COⅡ,Cytb分析并建立中国斑腿蝗科部分种属的系统发育关系,其中对7个新种(Apalacris eminifronta,Caryanda pseudodentata,Caryanda bannaensis,Caryanda ruiliensis,Longchuanacris fui,Longchuanacris xiaoheis-hanensis,Podismodes dabieshanensis)的归属从分子角度也做了讨论。本研究将实验所获得的56条序列与NCBI中所收录的斑腿蝗科序列进行联合分析,采用最大似然法、贝叶斯推论等系统分析方法并综合P距离进行分析,最终得出以下几点结论:①龙川蝗属Longchuanaceis Zheng et Fu划归卵翅蝗亚科Caryandinae;②蹦蝗属Sinopodisma Chang、云秃蝗属Yunnanacris Chang均为华秃蝗属Podismodes Ramme的同物异名;③不支持Storozhenko将豫蝗属Yupodisma Zhang et Xia并入安秃蝗属AnapodismaDovnar-Zapolskii,从本研究所建的系统发育树来看,豫蝗属仍应作为秃蝗亚科Podisminae的一个独立属;④前人利用形态特征鉴定的七个新种与分子系统发育分析结果一致,新种独立有效。

5-巯基-2-(2-吡啶基)-1,3,4-噁二唑双核Co(Ⅱ)配合物的合成研究

以2-吡啶甲酰肼为起始原料合成了5-巯基-2-（2-吡啶）-1,3,4-噁二唑（L）,以此为配体与CoCl_2·6H_2O反应得到双核Co^Ⅱ配合物Co2（L）_2（DMSO）_2Cl_4,并对该配合物的结构进行研究.X-ray单晶衍射结果表明该配合物结构属于三斜晶系,空间群为P_1,由2个配体分子、2个CoCl_2和2个DMSO分子组成.

中国麦红吸浆虫Sitodiplosis mosellana(Gehin)地理种群mtDNA COⅡ序列的遗传变异

对麦红吸浆虫Sitodiplosismosellana(Gehin)11个地理种群线粒体DNA(mtDNA)细胞色素C氧化酶亚基II(COII)的部分片段进行了测序,分析了核苷酸的组成,构建了NJ分子系统树。结果表明,在用于分析的447bp序列中,A+T平均含量为78.6%,其中7个位点存在变异。NJ树显示,麦红吸浆虫各种群间的亲缘关系与地理分布关系密切:11个地理种群可明显地聚为两大族群,所有来自春麦区的种群(NH、QX、GT、GW、GG)和冬麦区(陕西长安SC)种群聚为族群Ⅰ,其它冬麦区种群(HT、HL、HX、AS、AF)聚为族群Ⅱ;陕西长安种群(SC)虽处于冬麦区,但与春麦区种群具有很高的遗传相似性。该结果支持将我国麦红吸浆虫的发生区域分为三个,即春麦发生区、冬春麦发生区、冬麦发生区。各地理种群间的遗传距离为0～0.016,表现为种下的遗传变异,这与RAPD分析得出的结果相一致。