抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾纤维化小鼠模型不同时期ColⅠ、α-SMA、FN的影响

目的观察抗纤灵对5/6肾切除诱导的慢性肾纤维化小鼠模型不同时期I型胶原(ColⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)的影响。方法小鼠随机分为假手术组、模型组、雷帕霉素和抗纤灵组,前2组给予生理盐水、后2组分别给予雷帕霉素(0.16 mg/100 g)、抗纤灵(2 g/100 g),灌胃8周和12周后取材,采用Western blot和RT-PCR法检测各组小鼠肾组织ColⅠ、α-SMA、FN的变化。结果第12周与8周比较,假手术组各指标无明显变化,模型组上述指标明显增高;与模型组比较,第8、12周时,雷帕霉素,抗纤灵组指标均有所下降;雷帕霉素与抗纤灵比较,8周时,在ColⅠ、α-SMA蛋白及mRNA表达方面,雷帕霉素优于抗纤灵,第12周时组间无显著性差异。结论随着造模后时间的延长,纤维化指标ColⅠ、α-SMA、FN蛋白和mRNA表达水平逐步升高,雷帕霉素、抗纤灵能够降低上述指标的表达水平,第8周时,抗纤灵稍差于雷帕霉素;第12周时,抗纤灵和雷帕霉素具有相似的作用。

人参水溶性总蛋白对BALB/3T3细胞增殖以及对COLⅠ和TGF-β1基因表达的影响

目的观察不同质量浓度的人参水溶性总蛋白对小鼠胚胎成纤维(BALB/3T3)细胞增殖以及对Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达的影响。方法应用细胞培养技术,对BALB/3T3细胞进行培养,以不同质量浓度的人参水溶性总蛋白加入BALB/3T3细胞中,采用噻唑蓝(MTT)法检测人参水溶性总蛋白对BALB/3T3细胞的增殖影响,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测COLⅠ和TGF-β1 mRNA的表达,采用蛋白印迹(Western blot)法检测COLⅠ和TGF-β1的蛋白表达。结果 MTT法显示,人参水溶性总蛋白能够促进小鼠BALB/3T3细胞的增殖,并且随着人参水溶性总蛋白质量浓度的增加,细胞的增殖率逐渐增加;RT-PCR显示,与对照组比较,随着给药质量浓度的增加,COLⅠ和TGF-β1的mRNA表达逐渐增加;Western blot显示,经过处理的BALB/3T3细胞,随着给药质量浓度的增加,COLⅠ和TGF-β1的蛋白表达量逐渐增加。结论人参水溶性总蛋白能够促进小鼠BALB/3T3细胞的增殖,其增殖作用在分子水平上与可能与调控COLⅠ和TGF-β1蛋白的表达有关。

Apocynin通过TGF-β1/Smad信号通路对脂多糖心肌纤维化小鼠的作用及其对ColⅠa1、ColⅢa1的影响

目的探讨Apocynin通过TGF-β1/Smad信号通路对脂多糖(LPS)心肌纤维化(MF)小鼠的作用及其对ColⅠa1、ColⅢa1的影响。方法将40只C57BL/6雄性小鼠随机分成正常对照组、Apocynin对照组、MF模型组和Apocynin干预组(n=10)。连续4周,每周一次腹腔注射LPS(10 mg/kg)的方法建立心肌纤维化模型。Apocynin干预组则于LPS(10 mg/kg)处理前0.5 h连续4周每周一次腹腔注射Apocynin(10 mg/kg)。各组小鼠于4周末颈椎脱臼处死后,心肌组织天狼星红染色检测心肌纤维化程度,采用免疫组织化学法检测各组小鼠心肌组织中TGF-β1,Smad2/3,p-Smad 2/3蛋白相对表达量;采用蛋白印记法检测小鼠心肌组织中ColⅠa1、ColⅢa1蛋白的表达量。结果 Apocynin对照组较正常对照组心肌组织胶原面积分数以及TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达量和纤维化因子ColⅠa1、ColⅢa1表达量差异无统计学意义(P>0.05);MF模型组较正常对照组心肌组织胶原面积分数以及TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达量和纤维化因子ColⅠa1、ColⅢa1表达量增加(P<0.01);Apocynin干预组较MF模型组心肌组织胶原面积分数以及TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达量和纤维化因子ColⅠa1、ColⅢa1表达量降低(P<0.01)。结论 Apocynin通过TGF-β1/Smad信号通路介导了纤维化因子ColⅠa1、ColⅢa1蛋白的下调,从而减轻了LPS诱导的小鼠心肌纤维化。

益气化瘀补肾方对脊髓型颈椎病患者退变椎间盘细胞ColⅠ与ColⅡ mRNA表达的影响

目的:观察益气化瘀补肾方含药血清对脊髓型颈椎病患者退变椎间盘细胞ColⅠ、ColⅡmRNA表达的影响。方法:选择脊髓型颈椎病患者经手术摘除的椎间盘组织,采用组织块法培养原代细胞;以SPF级雄性SD大鼠制备药物血清。将传代第1代的退变椎间盘细胞接种于96孔酶标板中,分为6组,分别予低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度的益气化瘀补肾方含药血清及相应浓度生理盐水血清DMEM培养液培养。通过实时荧光定量PCR检测ColⅠ、ColⅡmRNA的表达。结果:不同浓度的益气化瘀补肾方血清对椎间盘细胞增殖有明显的促进作用;与生理盐水组比较,益气化瘀补肾方不同浓度含药血清干预后椎间盘细胞ColⅡmRNA表达水平上调、ColⅠmRNA表达水平下调,尤以中浓度更为明显(P<0.01)。结论:益气化瘀补肾方可能通过影响椎间盘组织胶原的变化而发挥防治脊髓型颈椎病椎间盘退变的作用。

芦丁对心肌纤维化大鼠ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1的调控作用

目的研究芦丁对心肌纤维化大鼠ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1的调控作用及其机制的变化。方法出生1 d Wistar大鼠6只,将大鼠分别贴上序号1~6,1、2号大鼠为模型组(用含有血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)(9~5 mol/L)培养液来培养细胞);3、4号大鼠为芦丁组(在模型组的培养条件下加入芦丁,配成含量是5 mg/L培养细胞液);5、6号大鼠为正常对照组(用含有16%胎牛血清DMEM的培养液培养)。用ELISA法检测培养上清中ColⅠ和ColⅢ的含量和Western blotting法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达。结果 ELISA检测显示,AngⅡ作用心肌纤维细胞24 h后,模型组细胞培养的上清液内ColⅢ和ColⅠ的含量较对照组明显上升(P<0.01);经芦丁治疗后,ColⅢ和ColⅠ的含量较模型组均明显下降(P<0.01)。Western blotting结果显示,使用AngⅡ激发心肌纤维细胞24 h以后,模型组的TGF-β1蛋白表达较对照组显著上升(P<0.01),经芦丁培养后,TGF-β1蛋白较模型组显著下降(P<0.01)。结论芦丁可以调控ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1的蛋白表达,从而控制大鼠心肌纤维化。

甘草附子汤对去卵巢大鼠骨组织中Ⅰ型胶原代谢及组织蛋白酶K表达的影响

目的研究甘草附子汤对绝经后骨质疏松的防治作用。方法 3月龄雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、甘草附子汤高、低剂量组和雌激素组。造模成功后,假手术组和模型组给予等量水灌胃,甘草附子汤组给予甘草附子汤灌胃,雌激素组给予苯甲酸雌二醇肌注。3月后,测定大鼠Ⅰ型胶原(ColⅠ)、组织蛋白酶K(Cath K)、Ⅰ型前胶原羧基末端前肽(PICP)、Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ICTP)及骨小梁的变化。结果甘草附子汤组与雌激素组能显著增加大鼠的骨小梁的数量(P<0.05),降低Cath K的表达,且甘草附子汤高剂量组与雌激素组无明显差异(P>0.05),低剂量组不如高剂量组明显。结论甘草附子汤能够下调破骨细胞Cath K的表达来抑制骨基质中ColⅠ的分解,对骨质疏松症起到一定的治疗作用。

口腔鳞癌中Ⅰ、Ⅳ型胶原及基质金属蛋白酶-1、2的表达及意义

目的探讨Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、基质金属蛋白酶(MMP)-1、2在口腔鳞癌中的表达及与肿瘤的生物学行为的关系。方法采用免疫组化通用型两步法检测80例口腔鳞癌患者的癌旁正常组织和癌组织中ColⅠ、ColⅣ、MMP-1、MMP-2的表达。结果口腔鳞癌中ColⅠ、ColⅣ的表达降低(P<0.05),MMP-1、MMP-2的表达升高(P<0.05)。随着分化程度的降低,ColⅠ、ColⅣ的表达下降,MMP-1、MMP-2的表达增强,但是高分化与中、低分化鳞癌中MMP-2的表达水平基本一致(P>0.05)。ColⅠ、ColⅣ表达与口腔鳞癌的临床分期、淋巴结状况呈负相关;MMP-1、MMP-2的表达与口腔鳞癌的临床分期、淋巴结状况呈正相关;MMP-1、MMP-2的表达与ColⅠ、ColⅣ的表达呈负相关。结论ColⅠ、ColⅣ、MMP-1、MMP-2的表达与口腔鳞癌的侵袭、转移关系密切。

止消通脉宁对转化生长因子-β_1诱导的人肾小管上皮细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤连蛋白mRNA表达的影响

目的探讨止消通脉宁含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)mRNA表达的影响。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养,分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁含药血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁含药血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁含药血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达。结果 HK-2细胞经TGF-β1诱导后,ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达显著上升,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经止消通脉宁含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。空白血清无此作用。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化作用。

温肾固疏方对去势大鼠骨组织中Ⅰ型胶原及组织蛋白酶K表达的影响

目的研究温肾固疏方对绝经后骨质疏松症的防治作用。方法通过切除大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型。造模后,SD大鼠随机分为模型组、雌激素组、温肾固疏方高、中、低剂量组,每组8只。假手术组仅切除卵巢旁脂肪组织。干预2个月后,通过HE染色观察骨组织、肾组织形态;ELISA法测定血清PICP、ICTP、CTX、NTX的含量;免疫组化法测定Col I、Cath K表达率的变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清ICTP、NTX、CTX含量均明显升高(P<0.01),骨组织形态改变与骨质疏松症一致,肾组织出现炎性改变,骨组织中Cath K含量明显增高(P<0.01),Col I蛋白含量显著降低(P<0.01);与模型组相比,血清ICTP、NTX、CTX含量显著降低(P<0.05),且温肾固疏方高剂量组比中、低剂量组表达明显。温肾固疏方中、高剂量组血清PICP含量显著增高(P<0.01)。各治疗组骨组织形态改善,肾组织炎性改变减轻。各治疗组骨组织Cath K蛋白的表达均降低(P<0.01),Col I蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论温肾固疏方能够通过下调破骨细胞Cath K的表达来抑制骨基质中Col I的分解,起到治疗绝经后骨质疏松症的作用。

Ⅰ型胶原修饰微球对骨髓间充质干细胞粘附增殖及成骨行为的影响

目的研究不同浓度Ⅰ型胶原(COLⅠ)修饰的聚己内酯(Polycaprolactone,PCL)微球的结构性能及细胞学行为的差异,以指导制备出更利于骨组织再生的支架材料。方法以PCL制备微球,作为对照组;并用不同浓度(0.1%、0.5%、2.0%)COLⅠ对其进行表面修饰,作为实验组。通过场发射扫描电镜观察微球表面形貌;干湿质量法检测材料的吸水率;CCK-8法检测大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖情况;激光共聚焦显微镜评价细胞在材料表面的粘附情况;检测第3、7天细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性。结果扫描电镜观察到胶原修饰组胶原交叉排列呈网状覆盖于微球表面;胶原修饰组的吸水率高于对照组(P<0.05);CCK-8结果显示四组微球上的BMSCs细胞在第1、3、5、7天均持续增殖,0.1%COLⅠ胶原修饰组较其他组细胞增殖能力高(P<0.05);激光共聚焦显微镜观察到0.1%COLⅠ和0.5%COLⅠ组细胞在粘附6 h后的铺展形态较另外两组好;ALP活性检测显示0.1%COLⅠ胶原修饰组的ALP活性高于其他组(P<0.05)。结论本实验制备的0.1%COLⅠ修饰的微球能促进BMSCs细胞在体外的粘附增殖及早期成骨分化。

大鼠成骨细胞膜片的体外构建及成骨潜力评估

目的体外构建大鼠成骨细胞膜片,并评估其成骨潜力。方法原代培养大鼠成骨细胞鉴定后,高密度连续培养,在维生素C诱导下形成细胞膜片。用扫描电镜观察膜片形貌特征及细胞形态;行碱性磷酸酶(ALP)活性检测;实时荧光定量PCR检测其成骨相关基因I型胶原(COLⅠ)、骨钙素(OC)的表达情况。结果维生素C诱导高密度连续培养成骨细胞5d能获得可机械刮起的成骨细胞膜片。电镜下,由多层细胞组成膜片,细胞层之间有间隙。ALP含量实验组高于对照组,第2周低于第1周。实验组I型胶原mRNA表达情况,第1周与对照组无差异,第2周与第3周高于对照组;实验组内,第1周与第2周无差异,第3周下调。骨钙素mRNA表达,实验组高于对照组;实验组内,表达量随培养时间延长而上调。结论维生素C促进连续培养的成骨细胞形成膜片,机械刮取法能够完整获得。形成的细胞膜片2周内可能生存力较强,可能具备一定成骨潜能。

复方鳖甲软肝片方对TGF-β_1诱导的肾间质成纤维细胞增殖及分泌细胞外基质的影响

目的:观察中药"复方鳖甲软肝片方"对TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞(NRK-49F)增殖及分泌细胞外基质的影响。方法:以2 ng/ml hTGF-β1诱导NRK-49F细胞,并以软肝片方大、中、小剂量(分别以7g/kg、3.5 g/kg、1.75 g/kg)药物血清进行干预,分别应用MTT法、ELISA、免疫细胞化学方法,观察肾间质成纤维细胞增殖、细胞上清FN浓度及ColⅠ、ColⅢ的表达。结果:软肝方含药血清对hTGF-β1诱导的细胞增殖无影响;但大、中剂量软肝方能不同程度地降低FN的分泌及ColⅠ、ColⅢ的表达,软肝方大剂量组作用最强(P<0.01)。结论:复方鳖甲软肝片方在一定程度上抑制TGF-β1诱导的肾间质成纤维细胞ColⅠ或ColⅢ的表达,大剂量软肝方作用最强。

回回甘松饮含药血清对高糖诱导的肾小管上皮细胞的影响及相关机制

目的 研究回回甘松饮（HGY）对高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖、细胞周期以及Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法 采用中药血清药理学方法制备含药血清。实验共分为6组：5%空白血清组（NG）、高糖＋5%空白血清组（HG）、高糖＋5%福辛普利钠含药血清组（3 mg/kg）、高糖＋5%HGY含药血清组（20,10,5 g/kg）。细胞以4×10~4个/ml接种于96孔细胞培养板上,分别于药物处理后24,48,72 h时,采用CCK-8法检测NRK-52E增殖情况;细胞以4×10~4个/ml接种于25 cm2细胞培养瓶中,于药物干预48 h时收集细胞,分别采用流式细胞术检测细胞周期变化,免疫酶联吸附法检测ColⅠ和FN蛋白的表达。结果 与NG组比较,高糖（30 mmol/L）能够诱导NRK-52E增殖（P〈0.01）,并能使G_0/G_1期细胞比例减少（P〈0.01）,S期比例增加（P〈0.01）,能够使NRK-52E中ColⅠ和FN蛋白表达量明显升高（P〈0.01）。在上述含药血清干预的24,48,72 h,各含药血清组NRK-52E均受到一定程度抑制,发生G_1/S期阻滞,并可降低高糖条件下NRK-52E中ColⅠ及FN蛋白表达量,与HG组比较有显著差异（P〈0.01或P〈0.05）。结论 HGY含药血清可抑制NRK-52E细胞在高糖环境下的细胞增殖,调控细胞周期,其机制可能与调控ColⅠ和FN蛋白表达有关。

阿魏酸哌嗪对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用

目的观察阿魏酸哌嗪(Piperazine ferulate,PF)对单侧输尿管梗阻(Unilateral ureteral obstruction,UUO)模型大鼠肾小管间质的转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和I型胶原(Collagen I,ColI)表达水平的影响,初步探讨其对小管间质纤维化的作用机制。方法将24只大鼠分为假手术(Sham-operated rats,SOR)组、UUO组、氯沙坦(Angiotensin Ⅱreceptor blocker,ARB)组和PF组。运用免疫组化技术半定量分析实验第14天各组大鼠肾组织中TGF-β1、a-SMA和ColI的表达水平。结果免疫组化结果表明SOR组TGF-β1、a-SMA和ColI均为少量表达,UUO组大鼠上述表达明显增加;ARB组和PF组TGF-β1、a-SMA和ColI的表达均低于UUO组,但高于SOR组,两治疗组之间差异无统计学意义。结论阿魏酸哌嗪可以降低肾小管间质TGF-β1、a-SMA和ColI的表达水平,延缓肾小管间质纤维化的进程。

回回甘松饮含药血清对高糖诱导的肾小球系膜细胞外基质堆积的影响

目的探讨回回甘松饮(Hui-hui Gan-song Yin,HGY)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)外基质堆积的影响。方法健康雄性SD大鼠40只随机分为正常对照组(蒸馏水)、格列喹酮组(10 mg/kg)、HGY(5、10 g/kg)组,每组各10只,每天给药2次,连续3 d后制备含药血清用于体外培养大鼠MCs,分为正常对照组(10%正常对照组大鼠血清)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖+10%正常大鼠血清)、格列喹酮组(30 mmol/L葡萄糖+10%格列喹酮组大鼠血清)、HGY高剂量组(30 mmol/L葡萄糖+10%HCY高剂量组大鼠血清)、HGY低剂量组(30 mmol/L葡萄糖+10%HCY低剂量组大鼠血清)。细胞培养结束后,采用Western blot方法检测纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)及Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)含量。结果与空白对照组比较,高糖组FN、ColⅠ及ColⅣ表达量上调(P<0.01);HGY含药血清可降低在高糖诱导的MCs中FN、ColⅠ及ColⅣ表达量(P<0.05)。结论 HGY含药血清可降低MCs在高糖环境下的FN、ColⅠ及ColⅣ蛋白表达水平,从而减少了ECM堆积,保护肾小球,延缓糖尿病肾病进程。

DNA甲基化转移酶3A调控心肌成纤维细胞活化过程中胶原的表达

目的目前关于甲基化对心肌纤维化形成的作用机制仍不明确。文章旨在探讨DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对心肌成纤维细胞活化过程中胶原表达变化的调控。方法选取50只乳鼠,提取培养SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs),进行细胞转染,根据CFs转染的试剂分为5组:DNMT3A组(CFs转染重组的DNMT3A基因过表达质粒)、空载体组(CFs转染p EGFP-C3空载体质粒)、DNMT3A siRNA组(CFs转染小干扰DNMT3A siRNA)、DNMT3A siRNA NC组(CFs转染DNMT3A siRNA NC空载体质粒)、空白对照组(CFs不作转染处理)。ELISA检测空白对照组、DNMT3A组、DNMT3A siRNA组细胞上清液胶原变化。qRT-PCR检测5组相关mRNA的表达,Western blot法检测除DNMT3A siRNA NC组外其余4组CFs中ColⅠ、ColⅢ和DNMT3a蛋白的表达及CCK8法检测4组细胞的增殖活性。结果 DNMT3A组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原明显高于空白对照组(P<0.05),DNMT3A siRNA组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量明显低于空白对照组(P<0.05)。DNMT3A组的ColⅠ、ColⅢ及DNMT3A表达量较空白对照组、空载体组明显升高(P<0.05),而DNMT3A siRNA组明显低于空白对照组及空载体组(P<0.05)。DNMT3A组细胞活力(2.087±0.317)明显高于空载体组(1.063±0.223)、空白对照组(1.082±0.207),差异有统计学意义(P<0.05); DNMT3A siRNA组(0.463±0.087)明显低于空载体组、空白对照组(P<0.05)。结论 DNMT3A可以促进CFs的活化增殖,并且能够增加胶原的表达,从而对心肌纤维化产生促进作用。

镰形棘豆总黄酮对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞分泌细胞外基质成分的影响

目的:探讨镰形棘豆总黄酮含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)分泌细胞外基质成分:Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)mRNA表达的影响。方法:将HK-2细胞用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为4组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110 pg/L)、空白血清对照组(TGF-β110 pg/L+体积分数10%空白血清)、干预组(TGF-β110 pg/L+体积分数10%镰形棘豆总黄酮含药血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达上升,与空白对照组对比,差别有统计学意义(P<0.05);经镰形棘豆总黄酮含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组对比,差别有统计学意义(P<0.05),而空白血清无此作用。结论:镰形棘豆总黄酮在一定程度上能够抑制TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞ColⅠ、ColⅢ和FN的mRNA表达,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。

左归丸含药血清通过ERK/Smads信号通路干预MC3T3-E1细胞的功能基因表达

目的研究ERK1/2信号通路在左归丸含药血清调控MC3T3-E1细胞基因表达中的作用。方法以倍美力为阳性对照药,对SD♀大鼠灌服高、中、低剂量的左归丸混悬液,d7腹主动脉取血分离含药血清。采用MTT法检测左归丸含药血清和PD98059对MC3T3-E1细胞增殖作用的影响,采用Western blot法检测ERK1/2蛋白的磷酸化水平及TGF-β1、Smad4蛋白表达,采用Real Time RT-PCR法检测Cbfα1、COLⅠmRNA表达。结果左归丸含药血清和倍美力能促进MC3T3-E1细胞增殖,诱导ERK1/2蛋白的磷酸化,促进TGF-β1、Smad4蛋白分泌,上调其Cbfα1、COLⅠmRNA表达;加入PD98059后MC3T3-E1细胞增殖下降、ERK1/2蛋白的磷酸化水平降低、TGF-β1蛋白表达进一步升高、Smad4蛋白表达降低、Cbfα1、COLⅠmRNA表达下调。结论左归丸能有效促进成骨细胞增殖和分化;左归丸可能是通过发挥雌激素样作用调控了ERK/Smads信号通路,从而达到防治骨质疏松的目的。

间充质干细胞移植后抑制肝星状细胞活化减轻肝纤维化

目的 :研究间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)移植后对肝纤维化及肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化的抑制作用。方法:Ficoll-Hypaque梯度密度离心法及细胞贴壁培养法分离纯化4周龄SD大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BM-MSC)。取18只SD大鼠,通过腹腔小剂量注射四氯化碳(CCl4)8周,进行肝纤维化造模,在造模4周时,取其中9只作为治疗组,每周经尾静脉移植给予该组每只大鼠6×106个MSC;另外9只作为模型对照组,经尾静脉给予不含MSCs的等量生理盐水;另取9只大鼠,作为正常对照组,仅给予尾静脉等量生理盐水注射,持续4周。自实验开始,每周用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、白蛋白(ALB)水平,至结束共测定8次。实验终点时通过免疫组化对α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,COLⅠ)在肝组织中的定位和表达进行研究;原位灌注和梯度密度离心法分离HSC,326 nm紫外光激发和α-SMA免疫荧光染色法鉴定HSC;q RT-PCR和Western blot检测HSC中α-SMA、TGF-β1基因和蛋白的表达水平。结果:与模型组相比,治疗组经MSC移植后,血清ALT、AST、TBIL水平,肝组织纤维化和炎症程度,肝组织α-SMA、TGF-β1和COLⅠ表达水平,HSC中α-SMA、TGF-β1基因和蛋白表达水平均明显降低。结论:肝纤维化SD大鼠经BM-MSC尾静脉移植治疗后肝功能显著改善、肝纤维化程度减轻,可能与抑制HSC活化有关。

止消通脉宁干预转化生长因子-β_1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究

目的观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量。结果正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。