雄芍汤含药血清对人肝星状细胞增殖和活化的影响

目的:观察雄芍汤对肝星状细胞增殖和活化的影响。方法:实验设4组:空白组、空白血清组、扶正化瘀胶囊血清组、雄芍汤血清组。采用MTT比色法测定雄芍汤含药血清对体外培养的人肝星状细胞LX-2增殖的影响;免疫组织化学染色法检测LX-2中α-SMA、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量。结果:20%和10%扶正组和雄芍组对LX-2抑制率均高于相应浓度的空白血清组(P<0.01),5%扶正组、雄芍组和空白血清组差异不显著;雄芍各个浓度组对LX-2抑制率显著高于相应浓度的扶正组(P<0.05或P<0.01)。雄芍各组中,20%组和10%组对LX-2的抑制率差异不显著,但均显著高于5%组(P<0.01)。雄芍组和扶正组LX-2中α-SMA的含量显著低于空白血清组(P<0.01),扶正组α-SMA含量显著低于雄芍组(P<0.05)。雄芍血清组和扶正血清组LX-2中I型胶原、Ⅲ型胶原含量显著低于空白血清组(P<0.01),雄芍血清组和扶正血清组I型胶原差别不显著,扶正血清组Ⅲ型胶原含量显著低于雄芍血清组(P<0.05)。结论:雄芍汤能够抑制HSC的增殖和活化以及HSC中I型胶原和Ⅲ型胶原的分泌。

骨髓间充质干细胞条件培养液对瘢痕成纤维细胞生物活性的影响

背景:间充质干细胞移植可通过多种调节机制促进皮肤创伤修复,抑制瘢痕形成,目前多数学者认为间充质干细胞分泌的生物活性因子起主要作用。目的:观察骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力及胶原合成的影响。方法:分离培养人骨髓间充质干细胞和增生性瘢痕成纤维细胞,制备骨髓间充质干细胞条件培养液。将12,24,48 h收集的条件培养液孵育体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞24 h,并与空白对照组比较,采用CCK-8实验检测增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性,Real-time PCR检测增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。结果与结论:与空白对照组相比较,在24 h和48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用(P<0.01),对其胶原的合成也具有显著的抑制作用(P<0.01)。结果表明骨髓间充质干细胞条件培养液可通过分泌抗纤维化的生物活性因子抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原产生,为细胞疗法策略减轻瘢痕提供了新的理论支持。

“热敷药”对硬皮病小鼠模型COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白含量的影响

目的观察"热敷药"对硬皮病小鼠模型Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原(COL-Ⅰ、COL-Ⅲ)含量的影响。方法 60只BALB/c小鼠按照随机原则分为空白组、模型组、西药组、小浓度组、中浓度组、大浓度组各10只,采用博莱霉素皮下注射形成硬皮病模型,造模完成后,根据分组分别给予10%、20%、40%"热敷药"药糊及肝素钠软膏外用,1次/d,连续1个月,空白组及模型组不用药。完成后观察各组皮肤组织病理变化,免疫组化检测皮损COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白含量。结果与模型组相比较,高、中浓度组硬皮病小鼠模型COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白含量明显降低,差异较显著(P<0.05);结论"热敷药"具有改善硬皮病小鼠模型皮肤硬化,降低COL-Ⅰ、COL-Ⅲ的作用。

早期动脉瘤模型大鼠形成过程中血管壁基质结构蛋白的表达

背景:基质蛋白是构成血管壁的必不可少的重要成分,为血管壁的完整性和血管壁细胞发挥生理功能提供了必要的框架,并参与对细胞和平滑肌的调控。目的:构建早期动脉瘤模型大鼠评价基质结构蛋白在形成过程中的表达差异性。方法:将28只健康雄性SD大鼠随机分为2组:对照组(n=8)和模型组(n=20)。模型组大鼠以结扎左侧颈总动脉和右侧肾肾动脉致高血压方法建立脑动脉瘤模型;对照组大鼠仅暴露左侧颈动脉分叉和双侧颈动脉。模型组大鼠分别于造模后15,30 d处死,取大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分组织进行免疫组化染色,分析纤维连接蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果与结论:与对照组相比,造模后30 d时模型组大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分中纤维连接蛋白表达水平差异无显著性意义(P>0.05),而Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白表达明显减少(P<0.05)。提示大鼠早期脑动脉瘤形成过程中的结构蛋白表达存在差异性并发生动态变化,血管壁基质结构蛋白降解是动脉瘤形成主要机制之一。

柔肝抑纤饮对肝纤维化大鼠肝功能及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原水平的影响

目的:观察复方柔肝抑纤饮抗肝纤维化的疗效,并探讨其机制。方法:制备大鼠实验性肝纤维化模型,进行相应分组给予不同的处理,考察血清肝功能和肝纤维化指标,并对肝脏组织行免疫组化染色、Masson染色,结合图像定量分析等技术分析Ⅰ型胶原(col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(col-Ⅲ)水平。结果:柔肝抑纤饮可明显改善大鼠肝纤维化,并使血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)等指标降低,降低col-Ⅰ、col-Ⅲ水平,经统计分析有显著性差异。结论:柔肝抑纤饮具有抗脂质过氧化作用,降低了col-Ⅰ、col-Ⅲ的抑制表达,可明显减轻大鼠肝脏内胶原纤维增生沉积,减少纤维化组织面积,减少了肝脏细胞外基质的产生和沉积,从而达到抗肝纤维化的作用。

灵芪蠲肝胶囊含药血清对活化大鼠肝星状细胞TIMP-1、MMP2及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响

目的:检测灵芪蠲肝胶囊含药血清对PDGF诱导活化的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)T6的TIMP-1、MMP2和Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法 :30只SD大鼠随机分为3组,每组10只,用生理盐水(A组,10 m L/kg)、复方鳖甲软肝片药液(B组,1.5 g/kg)、灵芪蠲肝胶囊药液(C组,4.25 g/kg),灌胃7 d,腹主动脉采血。以PDGF 10 ng/m L活化HSC-T6,分别再用各组含药血清200 m L/L作用HSC-T6。24 h时采用ELISA和RT-PCR方法,检测各组上清液TIMP-1、MMP2和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果:与A组比较,B、C组TIMP-1、Ⅰ、Ⅲ型胶原均下降,MMP2明显增高,差异具有统计学意义(P<0.01);B、C组间TIMP-1、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达差异无统计学意义(P>0.05);C组MMP2表达量与B组比较,差异也无统计学意义(P>0.05)。结论:灵芪蠲肝胶囊调节TIMP1及MMP2及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,减少细胞外基质分泌及增强降解,发挥其抗肝纤维化作用。

辛伐他汀对大鼠肝纤维化的影响及其作用机制

观察辛伐他汀对大鼠肝纤维化的影响并探讨其机制。60只健康的睡眠剥夺(Sleep Deprivation,SD)大鼠随机分为对照组、模型组和药物组。模型组和药物组,大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4)油溶液造模,药物组造模同时给予辛伐他汀灌胃(5mg.kg-1.d-1)至实验结束;对照组给予等量的橄榄油皮下注射。8周后处死所有动物,全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)活性,苏木精-伊红染色观察肝组织病理学改变,免疫组织化学法检测各组肝组织中I、III型胶原及转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果表明,与模型组相比,药物组大鼠肝脏炎症反应和纤维化较轻,I、III型胶原及TGF-β1的表达显著减少(P<0.05),血清ALT、AST水平降低(P<0.05)。由此得出,辛伐他汀可以减轻肝纤维化程度,其机制可能与抑制TGF-β1和I、III型胶原表达有关。