COL4A3基因新突变致常染色体隐性遗传Alport综合征一家系

目的探讨Alport综合征COL4A3基因突变谱。方法采用目的基因富集高通量测序技术,检测1例Alport综合征患儿、父母及2个妹妹的COL4A3基因Exon27、Exon48,对发现的变异基因位点进一步以PCR扩增直接正反向测序验证。结果检测COL4A3基因发现2个新的剪接位点改变,c.1928-2A>T杂合变异;Exon48:c.4280G>T(p.G1427V)杂合变异,该突变可导致Alport综合征。结论发现Alport综合征Ⅳ型胶原a3链的COL4A3基因的新突变,该发现丰富了引起Alport综合征的COL4A3基因的突变谱。

COL4A3基因新突变导致的常染色体隐性遗传Alport综合征1例伴文献复习

Alport综合征是一种常见的遗传性儿童肾脏疾病,以血尿、蛋白尿及肾功能进行性减退为主要临床表现,伴或不伴高频感音性听力降低、眼部异常等肾外表现[1]。该病发病率约为1/10000~1/5000,其发病机制主要与编码肾小球基底膜的Ⅳ型胶原亚单位的COL4A3、COL4A4、COL4A5基因突变有关。据文献报道,COL4A5基因突变引起的X连锁显性遗传(X-linked dominant inheritance,XL)方式最常见,占80%~85%[2]。COL4A3和(或)COL4A4基因突变引起的常染色体遗传型约占15%,其中以常染色体隐性遗传型(autosomal recessive inheritance,AR)为多,常染色体显性遗传(autosomal dominant inheritance,AD)较为罕见。现报告1例COL4A3基因新突变点所致的常染色体隐性遗传AS。

携带COL4A3或COL4A4基因突变的Ⅳ型胶原相关性肾病6个家系分析

目的分析总结携带COL4A3或COL4A4基因突变的Ⅳ型胶原相关性肾病患者的临床表型和基因突变的特点,以提高对该疾病的认识。方法回顾性分析2013年1月—2017年9月于上海交通大学医学院附属新华医院肾脏科明确诊断携带COL4A3或COL4A4基因突变的6个Ⅳ型胶原相关性肾病家系的临床、病理表型和基因突变。基因检测方法为首先对6个家系的先证者进行全外显子组捕获-二代测序(包括COL4A3、COL4A4、COL4A5基因)并进行生物信息学分析,然后运用Sanger法对候选突变位点进行家系内验证。结果在6个家系中共发现19例患者携带COL4A3或COL4A4基因杂合突变,其中5例携带COL4A3基因杂合突变,14例携带COL4A4基因杂合突变(有2例同时携带2个COL4A4基因杂合突变)。共发现7种COL4A3或COL4A4基因突变且均为错义突变(6种为甘氨酸突变为其他氨基酸),其中6种突变之前未见报道。19例患者中,7例出现肾功能下降,其中4例进展至终末期肾脏病(ESRD)并有1例死亡,发生肾功能下降和ESRD的年龄分别为(42.6±10.3)和(53.0±6.9)岁;18例患者有肾性血尿;13例患者有不同程度蛋白尿(其中4例患者尿蛋白水平>3.0g/24h)。无患者合并耳聋和眼部病变。7例患者行肾活组织检查,光学显微镜下5例患者表现为局灶节段性肾小球硬化(FSGS),2例患者表现为系膜增生性改变(其中1例免疫荧光表现为IgA肾病)。电子显微镜下发现3例患者局部肾小球基底膜(GBM)变薄,无患者出现GBM致密层撕裂、分层等Alport综合征改变。7例患者α3、α5免疫荧光染色均未见异常。结论携带COL4A3或COL4A4基因突变的Ⅳ型胶原相关性肾病患者中发生肾功能损害和ESRD的并不少见,光学显微镜下多表现为FSGS,易被误诊为其他肾小球疾病。建议对疑似Ⅳ型胶原相关性肾病的患者进行COL4A3、COL4A4、COL4A5基因检测,进一步确诊,予早期干预治疗。

常染色体显性遗传Alport综合征一家系COL4A3及COL4A4的基因突变

目的:对一常染色体显性遗传Alport综合征(AS)家系COL4A3/COL4A4基因突变进行分析,寻找其致病突变位点。方法:采用PCR技术和直接测序法分析该家系先证者COL4A3/COL4A4基因全部外显子序列,并与该家系成员、50名健康个体及GenBank序列进行比较分析,筛选有意义突变。结果:在该家系COL4A3/COL4A4基因中共发现8个突变位点,其中包括1个错义突变、1个内含子突变和6个序列变异。COL4A4基因第44外显子上一个新的错义突变c.4195 A>T导致M1399L,该家系成员中患者均出现了此突变且均表现为杂合子。1个内含子突变为c.4127+11 C>T。其余6个序列变异分别为COL4A3基因上的c.1195 C>T,c.1223 G>A;以及COL4A4基因上的c.3011 C>T,c.4207 T>C,c.4548 A>G,c.4932 C>T。结论:常染色体显性遗传AS COL4A4基因c.4195 A>T和c.4127+11 C>T突变可能与其发病有关。

COL4A3基因2个新无义变异致Alport综合征的临床和遗传分析

目的探讨COL4A3基因突变所引起的常染色体隐性遗传Alport综合征的临床特点和基因变异特点。方法用基因测序和生物信息学分析方法分析1个常染色体隐性遗传Alport综合征患者的临床表型和基因型。结果男性患者,14岁发现水肿、肉眼血尿、蛋白尿、低蛋白血症伴有听力障碍,治疗、随访不规律,20岁进展至终末期肾病。应用全外显子组测序发现COL4A3基因2个新的无义变异,40号外显子上c.3508G>T(p.G1170X)杂合变异,51号外显子上c.4825C>T(p.R1609X)杂合变异,Sanger测序验证患者母亲携带c.3508G>T(p.G1170X)杂合变异,父亲携带c.4825C>T(p.R1609X);患者的哥哥未携带这2个基因变异。这2个无义变异均导致蛋白质表达提前终止,系致病变异。结论COL4A3基因无义变异导致的常染色体隐性Alport综合征在青少年时期进展至终末期肾病;新发现2个COL4A3基因的无义变异;全外显子基因测序是确诊Alport综合征的重要手段。

与人2号染色体上COL4A3/COL4A4基因紧密连锁的微卫星标志PAX3和D2S401的多态性研究

目的 了解与2号染色体上COL4A3/COL4A4基因紧密连锁的微卫星标志PAX3和D2S401的多态性。方法 用聚合酶链反应(PCR)扩增与2号染色体上COL4A3/COL4A4基因紧密连锁的两个微卫星标志PAX3和D2S401,后用10％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR产物。结果 PAX3和D2S401在中国汉族人群中分别观察到5个和6个等位基因,多态信息含量分别为0.66和0.76。结论 PAX3和D2S401在中国汉族人群中高度多态,可用于基因连锁分析和基因诊断。

常染色体隐性遗传Alport综合征一家系COL4A3及COL4A4基因突变分析

目的通过对有近亲婚配史的Alport综合征一家系Ⅳ型胶原α3和α4链的COL4A3/COL4A4基因分析,明确常染色体隐性遗传Alport综合征的基因突变,为该病的基因诊断和家系遗传咨询提供更为全面的理论基础。方法PCR扩增先证者DNA COL4A3/COL4A4基因的共98个外显子,经直接测序,寻找突变位点,对有意义的突变经限制性内切酶AvaⅡ酶切在家系中分析验证。结果在该患者中共发现1个错义突变和10个序列变异。其中在COL4A3基因上发现一个位于42号外显子上的错义突变G3725A,导致蛋白质Gly1242Asp的突变。错义突变在患者中是纯合子,携带者中是杂合子,其他正常家系成员及筛查100条正常人染色体。未发现该突变。10个序列变异为单核苷酸多态性改变。结论报道了一个国内较少见的常染色体隐性遗传Alport综合征家系,同时经基因突变筛查发现Ⅳ型胶原α3链的一个新的致病性的基因突变。

双基因突变型X连锁Alport综合征女性患者临床与遗传学特征分析

目的X连锁Alport综合征(X-linked Alport syndrome,XLAS)女性患者存在较强的临床异质性。本研究旨在通过分析并总结COL4A3、COL4A4、COL4A5双基因突变型XLAS女性患者的临床表型和基因突变的特征,以提高对此类多基因遗传XLAS女性患者疾病特点的认识。方法回顾性分析2019年1月—2020年12月于上海交通大学医学院附属新华医院肾脏科经全外显子组测序明确诊断为COL4A3、COL4A4、COL4A5双基因突变型XLAS的3例女性患者的临床和基因突变特点。通过家系内调查和Sanger测序明确上述患者的家系内患病成员及其所携带COL4A3、COL4A4、COL4A5基因突变情况,并比较携带COL4A3、COL4A4、COL4A5双基因突变与单基因突变患者的临床表型及其肾脏预后。搜索数据库,整理和归纳总结10例COL4A3、COL4A4、COL4A5双基因或三基因突变型XLAS女性患者的临床和基因突变特点。结果3例COL4A3、COL4A4、COL4A5双基因突变型XLAS女性患者中,1例同时携带COL4A3和COL4A5基因杂合突变,2例同时携带COL4A4和COL4A5基因杂合突变。总共发现6种COL4A3、COL4A4、COL4A5基因突变,均为错义突变。3例患者均有血尿和不同程度的蛋白尿,其中1例于40岁时进展至终末期肾病。1例行肾脏活组织检查,但未见肾小球基底膜明显异常,Ⅳ型胶原α3、α5染色呈阳性。3例患者均无肾外表现。家系内调查发现9例家系内患病成员,其中7例经Sanger测序验证为携带COL4A3、COL4A4、COL4A5单基因突变。与家系内仅携带COL4A5突变的XLAS女性患病成员相比,COL4A3、COL4A4、COL4A5双基因突变型XLAS女性患者发病早,易合并蛋白尿和肾功能受损。10例经检索数据库获得的女性患者中,6例患者携带COL4A3和COL4A5双基因杂合突变,3例患者携带COL4A4和COL4A5双基因杂合突变,1例患者同时携带COL4A3、COL4A4和COL4A5三基因杂合突变;2例患者分别于40、44岁进展至终末期肾病;3例患者合并肾外表现。结论多基因遗传是影响XLAS女性患者临床异质性的重要因素。对发病较早、临床表现较严重的XLAS女性患者,需考虑存在COL4A3、COL4A4、COL4A5多基因遗传可能,并运用二代测序技术予以明确。

高通量测序技术对常染色体隐性Alport综合征两个家系遗传特征的实验诊断研究

目的探讨高通量测序(NGS)技术对常染色体隐性Alport综合征(AS)家系不同临床表型个体的实验诊断作用。方法应用靶序列捕获联合高通量测序的方法对2个AS两家系的先证者进行致病基因突变分析,并通过Sanger测序法对先证者及家系其他成员进行验证,综合分析家系成员临床表现、肾脏病理组织学检查与基因检测结果。结果 2例先证者分别检测到COL4A3c.3769G>A和COL4A4c.1715G>C纯合突变。先证者父母及同胞均为相应突变的杂合子。先证者均表现为典型的AS;除了家系2的1名成员外,其他杂合子成员均表现为良性家族血尿。结论研究明确了2个AS家系致病机理,发现COL4A3,COL4A4基因突变杂合携带者往往表现为良性家族血尿,NGS技术可在常染色体隐性遗传AS家系不同遗传特征的病因诊断中发挥重要作用,对进一步探索疾病发病机制及规范化诊疗有重要意义。

一例女性Fabry病并发薄基底膜肾病及其家系调查

目的 了解具有两种遗传性疾病,即Fabry病并发薄基底膜肾病（TBMN）的临床病理和基因突变特点以及家系患病情况.方法 总结分析本院收治的1例41岁女性Fabrv病并发TBMN患者的临床病理特征和基因突变情况,同时对家系成员进行调查及相关检测.结果 先证者呈现典型的Fabry病的肾外临床表现,包括皮疹、神经痛、眩晕、耳鸣、肥厚型心肌病等,同时亦有蛋白尿、镜下血尿及高血压等肾脏受累表现;肾活检光镜下病理改变为局灶性节段性肾小球硬化（FSGS）,部分足细胞空泡变性;电镜下肾小球脏层上皮细胞胞质内多数髓磷脂小体形成,肾小球基底膜（GBM）弥漫性变薄,厚度为（216±31）nm.家系调查及基因突变检测显示先证者女儿除有典型Fabry病肾外表现外,亦有以血尿为主的肾脏症状.先证者的1个妹妹仅表现为镜下血尿.先证者及其女儿α-半乳糖苷酶A（α-Gal A）活性分别为33和75活性单位（正常参考值为100～500活性单位）,且2人均携带新发现的GLA基因突变--1208ins21 bp及COL4A3基因多态性--c：3627 G＞A（p：M1209I）.仅表现为镜下血尿的先证者的妹妹仅携带COL4A3基因的c：3627 G＞A（p：M1209I）多态性,α-Gal A活性正常,无GLA基因突变.结论 对于Fabry肾病患者呈现血尿,尤其是表现为家族性血尿时,应考虑并认真排除并发TBMN的可能.

良性家族性血尿研究进展

良性家族性血尿又称薄基底膜肾病，由COL4A3或COL4A4基因单杂合突变所致。在儿童期，良性家族性血尿患者预后良好，仅表现为血尿，不伴蛋白尿，肾功能正常；在成年期，部分良性家族性血尿患者可出现蛋白尿、高血压、慢性肾衰竭、终末期肾脏病，表现为＂非良性＂预后。对于良性家族性血尿患者需长期随访，每1～2年评估1次是否存在高血压、蛋白尿和肾功能损害，并视病情应用血管紧张素转换酶抑制剂，以延缓肾衰竭的发生。

二代测序诊断散发性Alport综合征1例及文献复习

目的探讨应用靶序列捕获和二代测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因诊断散发性Alport综合征的可行性。方法收集1例无家族性血尿和慢性肾衰竭家族史、拟诊Alport综合征的9岁男童的临床资料，采集患儿及其父母外周静脉血3 mL，提取基因组DNA，应用靶序列捕获和二代测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因及Sanger测序验证，并进行基因突变分析和文献复习。结果患儿1岁起病，表现为血尿、蛋白尿，间歇性肉眼血尿，逐渐进展至肾病水平蛋白尿；8岁7个月发现双耳感音神经性聋，临床拟诊为Alport综合征。在患儿COL4A4基因上发现3578-1G〉A及3967 C〉T（Q1323X）复合杂合致病突变，3578-1G〉A突变来自父亲，3967 C〉T突变来自母亲。该患儿确诊为常染色体隐性遗传型Alport综合征。结论对于临床拟诊的散发性Alport综合征，可应用靶序列捕获和二代测序检测COL4A3、COL4A4和COL4A5基因进行明确诊断。

单亲二倍体致1例常染色体隐性遗传型Alport综合征

分析2016年2月联勤保障部队第九〇〇医院收治1例由单亲二倍体引起的常染色体隐性遗传型Alport综合征的诊断过程。先证者,女,4岁5个月,持续性血尿、蛋白尿2年4个月,血清肌酐、眼耳检查未见异常;其父亲及弟弟持续性血尿,母亲尿检正常;父母系非近亲结婚。基因检测示先证者携带COL4A3基因纯合变异1496G>A(p.G499E);其父亲及弟弟携带相同的杂合变异,母亲未携带该变异。生物信息学分析示COL4A3基因1496G>A为致病变异。免疫荧光定量PCR和染色体微阵列分析证实先证者在染色体2p25.3-2q37.3为单亲二倍体,该片段包含COL4A3基因。先证者诊断为单亲二倍体引起的常染色体隐性遗传型Alport综合征,提示在父母为非近亲结婚的家族性血尿患者中检测出COL4A3基因纯合致病变异时应考虑单亲二倍体。