检测皮肤成纤维细胞cDNA确定Alport综合征COL4A5基因突变

目的 :检测、分析Alport患者Ⅳ型胶原α5链mRNA及其序列 ,试图建立一种简单、快捷的检测COL4A5基因突变的方法 ,同时明确基因突变对COL4A5基因转录的影响。方法 :取 2 1例X连锁显性遗传型Alport综合征患者和 2例对照的皮肤标本培养后提取成纤维细胞总RNA ,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和直接测序的方法分析Ⅳ型胶原α5链mRNA。对于cDNA序列异常者 ,进而应用PCR和直接测序的方法分析COL4A5基因。结果 :成功进行了原代、传代皮肤成纤维细胞的培养并提取了总RNA ;直接测序揭示对照组Ⅳ型胶原α5链mRNA序列及已检测的 8例患者Ⅳ型胶原α5链 3′端mRNA序列与所发表的序列完全一致 ;通过RT PCR和直接测序发现了 4例新突变 ,并与从基因组DNA样本中检测到的突变相一致。结论 :通过分析皮肤成纤维细胞中Ⅳ型胶原α5链mRNA序列 ,可用以检测Alport综合征患者COL4A5基因突变 ,且本文报道的 4例突变均为新突变 ;

发根DNA检测Alport综合征COL4A5基因突变

目的:通过发根DNA提取分析Alport综合征(Alportsyndrome,AS)一家系中COL4A5基因突变,试图通过该方法简化AS家系的收集工作和推广COL4A5基因检测。方法:通过PCR和直接测序的方法,对先证者外周血DNACOL4A5基因所有51个外显子及其相邻内含子的DNA序列进行检测。发现突变位点后,提取6份该家系成员发根部DNA进行该突变位点检测。结果:①成功地从发根部提取DNA,进行了PCR和直接测序。②在COL4A5基因第50号外显子4944位点发现一错义突变,碱基G被T取代,导致其编码1648位氨基酸由色氨酸变为半胱氨酸(4944G>TW1648C),男性患者为纯合突变,女性患者为杂合突变,正常家系成员和92例对照中均未发现此位点异常,说明W1648C为引起该家系临床病变的突变位点,并非多态性位点。在性连锁Alport综合征中,COL4A5基因此突变位点为首次报道。结论:通过毛发收集、DNA提取,可使家系收集工作更为简便易行,可帮助未开展基因检测的地区进行基因诊断。本研究通过发根DNA提取检测Alport综合征一家系中新的COL4A5基因突变,遗传方式符合性连锁显性遗传。

以COL4A5基因突变为主Alport综合征临床分析

目的对COL4A5基因突变的X连锁遗传的Alport综合征(X-linked Alport syndrome,XLAS)患儿的临床表型及基因突变类型进行分析,探讨XLAS患儿与肾病综合征肾炎型的关系。方法纳入2016年4月至2023年4月期间在医院经二代测序发现COL4A5基因突变最终确诊为Alport综合征的32例患儿,回顾性分析其临床病理特征与基因突变特点。结果XLAS患儿平均起病年龄(3.68±2.07)岁,平均确诊年龄(6.56±2.95)岁,以孤立性血尿起病12例(37.5%),以血尿和蛋白尿起病8例(25%),以肾病综合征肾炎型起病12例(37.5%),患儿家族史阳性有11例(34.4%),眼部病变3例(9.37%),耳部病变6例(18.75%),后期随访发现7例(21.87%)患儿已发展为慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)。21例患儿行肾脏组织穿刺活检,电镜表现为基底膜变薄(弥漫性或节段性)13例(61.9%),基底膜厚薄不均8例(38.09%);光镜:局灶节段肾小球硬化(FSGS)2例(9.52%),系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)11例(52.38%),微小病变(MCD)8例(38.09%)。基因突变类型分为错义突变12例(37.5%)、剪切位点突9例(28.12%)、无义突变6例(18.75%)、缺失突变3例(9.37%)、移码突变2例(6.25%)。遗传突变22例(68.75%);自发突变10例(27.02%)。结论XLAS患儿在疾病早期临床表现和病理特征均不典型,进展缓慢,部分患儿早期易误诊为肾病综合征肾炎型,对于疑似本病尽早完善基因检测,合理药物选择,科学预测预后。

COL4A5基因突变致X连锁Alport综合征的1例家系

Alport综合征是最常见的遗传性肾脏病之一。其临床表型除与该病相关的基因变异相关,还同其他基因状况、生活环境等因素密切相关,故即使同一家系中拥有相近基因型的个体也会出现不同的疾病表现。本研究对中国中医科学院广安门医院1例具有复杂家系的慢性肾脏病患者开展调查,收集患者及其家族成员临床资料,采用三代基因测序技术对患者及多位亲属的外周血DNA进行遗传学分析,结果显示家族中多人为COL4A5[c.152G>A(p.Gly51Glu)]基因突变导致的Alport综合征。文章就X连锁Alport综合征的临床特点及预后进行文献复习,结合对该家系多个受累成员发病情况分析,旨在提高临床医生对该病特点及遗传规律的认识。

Alport综合征一家系中新的COL4A5基因突变

目的 了解我国Ｘ伴性显性（ＸＤ）遗传Ａｌｐｏｒｔ综合征（ＡＳ）中ＣＯＬ４ＡＳ基因突变特点。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和直接测序的方法，对来自７个ＸＤ－ＡＳ家系１０个成员和１００个正常人外周血ＤＮＡ标本进行了．ＣＯＬ４Ａ５基因４３号外显子的检测。结果在一个家系中发现４１４２Ｃ→Ｔ（Ｐｒｏ１３１４Ｓｅｒ）的转换突变，先证者与其弟、其母均发现有此异常。结论 表明该突变为一遗传性突变。查阅基因库，未发现相同突变报道。

性连锁Alport综合征COL4A5基因突变检测

目的 检测16个家系20例性连锁Alport综合征患者COL4A5基因突变。方法 采用PCR-变性凝胶梯度电泳(DGGE)-直接测序法检测患者COL4A5基因中30个外显子及其相邻内含子区域(外显子1～25、31、32、41、50、51),另选取100例正常人外周血DNA作为对照。结果 共发现4种突变,包括1种位于1号外显子上的无义突变(266C→T谷氨酰胺22终止密码),1种位于31号外显子上的错义突变(2757G→T甘氨酸852缬氨酸),以及2种分别位于1、25号内含子区域的剪接突变(283+1G→T、2150+1G→T)。结论 COL4A5基因为性连锁Alport综合征的致病基因,突变类型多样,尚未发现热点突变。类似于外显子突变,内含子突变同样具有致病意义,患者临床症状典型。查阅基因库,此4种突变均为首次报道。

局灶节段性肾小球硬化一家系COL4A5基因突变研究

目的分析1个局灶节段性肾小球硬化（focal segmental glomerulosclerosis, FSGS）家系的遗传学特征，探讨Ⅳ型胶原基因突变与FSGS表型的相关性。方法应用高通量测序方法对1例经临床与肾脏病理诊断为FSGS先证者的相关致病基因进行高通量测序，对发现的疑似致病性突变在先证者及其家系进行Sanger测序验证，并按ACMG指南分析突变的致病性。结果家系先证者的COL4A5基因第28外显子存在1个C．2215C〉G（P．Pr0739Ala）半合子错义突变，先证者母亲为c．2215C〉G杂合突变携带者。c．2215C〉G突变为FSGS的可能致病突变。结论COL4A5基因c．2215C〉G（P．Pr0739Ala）错义突变可导致Alport综合征，也可能导致FSGS，提示Ⅳ型胶原基因突变存在肾脏疾病表型异质性。

COL4A5基因新突变致Alport综合征1例

Alport综合征(alport syndrome,AS)又称遗传性肾炎是以血尿和进行性肾功能减退为主要临床表现,常伴有神经性耳聋和眼部异常,是由于Ⅳ型胶原不同α链的基因发生不同突变引起的。Alport综合征存在三种遗传方式:X连锁显性遗传在受累患者中约占80%~85%,源于X染色体上的COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致;常染色体隐性遗传约占15%,此外还有非常少见的常染色体显性遗传。本文报道1例由COL4A5基因新突变导致的Alport综合征病例。

1例携带COL4A1基因突变的孕妇产前诊断及胎儿期宫内表型的推测

先证者为孕妇,有先天性智力障碍、双眼内聚、双足肌张力异常。既往孕一胎,磁共振提示胎儿颅内囊性病灶并终止妊娠。此次提取先证者外周血DNA行全外显子组测序初步确定候选致病基因,并行羊水穿刺提取胎儿DNA,行基因型与表型的相关性分析,提示先证者存在COL4A1:c.4745C>T杂合错义突变,是该家系中先天智力障碍、双眼内聚、双足肌张力异常以及胎儿期颅内囊性病变的遗传学原因,胎儿期颅内囊性病变为基底膜破裂出血所致,成年期表现为智力障碍。该点位突变为首次报道,本研究为该家系的遗传咨询和产前诊断提供了理论依据。

儿童Alport综合征COL4A5基因4种新突变分析

目的分析4例儿童Alport综合征的基因型和临床表型特点。方法总结4例患儿的临床特点,采用外显子捕获-第二代测序技术对4例诊断为Alport综合征患儿的COL4A5、COL4A4和COL4A3基因进行突变检测。结果 4例均为男性,年龄6～8岁,首发症状均为血尿,均伴有不同程度的蛋白尿。1例表现为高频听力区受损,1例右侧视网膜脱色素改变。4例肾功能均正常。肾穿刺活检电镜检查均显示典型Alport综合征基底膜病变。在4个家系中发现4种COL4A5基因突变,分别为Gly132Glu、Gly1238Arg、Gly267Arg和Gly1033Ser,均为未报道的新突变。经家系验证Gly132Glu和Gly1033Ser为新生突变。用SIFT和PolyPhen软件进行蛋白功能预测均显示4种突变为有害突变。结论本研究采用外显子捕获-第二代测序技术共检测到4种COL4A5基因新突变,其中2种为新生突变。为人类Alport综合征基因突变数据库增添了4个新成员,对进一步研究中国人群Alport综合征的发病机制以及遗传咨询和产前诊断有重大意义。

儿童Alport综合征1例COL4A5基因新发突变分析

目的分析儿童Alport综合征的基因型和临床特点。方法回顾分析1例Alport综合征患儿的临床资料及基因检测结果。结果患儿男性,11岁,7岁出现不明原因的血尿、蛋白尿,肾功能轻度异常,因治疗依从性差而进展至慢性肾脏病尿毒症期。肾穿刺活检病理显示,慢性硬化性肾小球病变,弥漫性肾小管萎缩(萎缩面积超80%);免疫荧光染色α3、α5(IV)基底膜染色阳性。基因检测显示,COL4A5基因存在的一处半合子突变c.2631dupA(插入突变),导致氨基酸改变p.G 878 Rfs*20(移码突变20位后蛋白翻译提前终止);家系验证其为新发突变,父母均未携带。依据ACMG指南,该突变变异类型为致病性突变。查阅HGMDpro数据库未见报道。结论基因检测有助于确诊Alport综合征,新发现COL4A5基因半合子突变。

3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮诱导人胚胎肝细胞ras基因突变

背景与目的:研究饮水氯化消毒副产物3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮(3-chloro-4-(dichloromethyl)-5-hydroxy-2[5H]-furanone,MX)对体外培养的人胚胎肝细胞(L-02细胞)ras基因突变的诱导。材料与方法:MX染毒剂量为300μmol/L,以二甲基亚砜(DMSO)做溶剂对照,将L-02细胞连续染毒培养12d后,收获细胞提取基因组DNA,应用PCR-克隆测序法检测ras基因(K-ras、H-ras、N-ras)12、13、61密码子是否存在突变。结果:MX染毒组H-ras基因57密码子的GAT置换成GGT,未检测到K-ras、N-ras及H-ras12、13、61密码子突变,DMSO溶剂对照组相应的ras基因目的片段均未检测到突变。结论:MX可能诱导L-02细胞ras基因突变。

COL4A3基因新突变导致的Alport综合征1例并文献复习

Alport综合征(AS)是COL4An基因突变所导致的家族遗传性肾脏病,目前尚缺乏针对性的根治性疗法,且该病临床表现与遗传方式相关,极大阻碍了该病的临床诊断。现报道1例由COL4A3基因新突变位点所致AS患者的病历资料,从该患者的临床表现出发,回顾性分析该患者的诊疗经过,并对近几年疾病相关文献进行复习,提高临床对此病的认识,为该病的早期诊断及治疗提供帮助。

突变型COL4A5基因编码蛋白片段的表达及圆二色谱结构分析

目的 :通过分析COL4A5基因点突变后蛋白结构 ,探讨基因突变对编码蛋白的基本结构及可能的二级结构的影响。方法 :以已确诊的X连锁显性遗传型Alport综合征 (Alportsyndrome ,AS)病人的α5 (Ⅳ )链为研究对象 ,其COL4A5的点突变 g .32 4 6G >T使编码蛋白的一个甘氨酸被缬氨酸替代 p .G1 0 1 5V。用E .coli 分别表达该病人α5 (Ⅳ )链的含有突变位点的结构域及对照α5 (Ⅳ )链的同一结构域 ,圆二色谱检测并比较它们二级结构的差异。结果 :病人的圆二色谱最低峰所在的波长由对照的 2 0 0nm左右 ,变为 2 2 0nm左右 ,而且峰度降低。二级结构分析显示 ,来自对照的融合蛋白主要以 β折叠和无规卷曲为主 ,无α螺旋结构 ,而来自病人的融合蛋白中出现了约占1 /8的α螺旋结构。结论 :AS时胶原区中的一个甘氨酸被缬氨酸替代后 ,不仅使发生替代处局部的二级结构发生变化 ,而且使整个α5 (Ⅳ )链的折叠动力学发生改变。异常折叠的肽链会影响链间的相互作用 ,或者使得三螺旋分子不能正常形成 ,或者使形成的三螺旋分子结构松散而易被蛋白酶降解破坏 ,最终使肾小球基底膜出现特征性的病理改变。

儿童COL4A5基因新突变致Alport综合征1例

回顾分析1例以镜下血尿为主要临床表现的Alport综合征患儿的临床资料以及患儿及其父母、哥哥的COL4A5基因检测结果。患儿男性,7岁起病,表现为镜下血尿,尿红细胞形态分析持续可见芽孢红细胞等变形红细胞,支持肾小球源性血尿,无明显蛋白尿及肾功能异常,母亲与患儿症状相似;患儿肾活检病理提示肾小球病变轻微,未见免疫复合物介导的肾小球肾炎,免疫荧光染色提示IV型胶原免疫荧光染色α3、α5未见异常表达,基因检测示COL4A5基因的1个变异:chrX:107802295,c.143(exon3)G>A,导致氨基酸改变p.G48E(p.Gly48Glu)(NM_033380),为半合子,突变来自母亲(杂合子)。该突变位点为首次报道。

一性连锁Alport综合征中国家系COL4A5基因新突变位点的检测

通过PCR和直接测序的方法 ,对一性连锁Alport综合征家系 17个受检个体的COL4A5基因所有 5 1个外显子及其相邻内含子的DNA序列进行检测。结果发现 ,在第 2 6外显子 2 2 4 0位点 ,男患者存在C碱基缺失(2 2 4 0delC) ,女患者存在杂合缺失 ,同时对女患者相应的PCR产物进行克隆和测序以验证PCR测序结果的可靠性 ,而在正常家系成员和 80例对照中均未发现此位点异常 ,说明 2 2 4 0delC为引起该家系临床病变的突变位点 ,不是多态性位点。在性连锁Alport综合征中 。

对海南省210例散发性先天性单纯性心脏病患者NKX2-5、GATA4、ZIC3基因突变的筛选研究

目的:心脏发育异常可导致先天性心脏病(congenital heart disease,CHD),是国内外最常见的先天性畸形,已知NKX2-5、GATA4和ZIC3基因突变可引起CHD。本实验探讨了海南省NKX2-5、GATA4、ZIC3基因突变和散发性先天性单纯性心脏病之间的关系。方法:收集210例散发性CHD患者,提取患者血液DNA,扩增目的基因片段,利用高分辨熔解曲线(high-resolution melting,HRM)技术和DNA测序技术,分析NKX2-5、GATA4和ZIC3基因的序列。结果:对210例CHD患者NKX2-5、GATA4、ZIC3基因测序,发现7个基因突变,包括1个NKX2-5杂合错义突变(c.178G>T),GATA4的3个杂合突变(c.677C>T,c.928A>G,c.1123G>A),ZIC3的3个杂合突变(c.19G>C,c.1255C>G,c.1348C>T)。其中NKX2-5(c.178G>T)、GATA4(c.1123G>A)、ZIC3(c.19G>C,c.1255C>G,c.1348C>T)为新突变位点。通过生物信息学软件预测这些基因突变为致病性突变。结论:在210例患者中发现了7个基因突变,首次报道海南省NKX2-5、GATA4和ZIC3的基因突变与CHD发病相关。

COL4A5基因新发突变致ALPORT综合征1例并文献复习

目的报道1例COL4A5基因新发突变致ALPORT综合征患者,探讨该病的临床表现及遗传学特征。方法收集患者的临床资料,提取外周血DNA,通过全外显子组测序技术检测患儿及直系亲属COL4A5基因突变情况,并结合HGMD数据库中相关文献进行复习。结果患者长期反复血尿、蛋白尿,糖皮质激素治疗无效;肾脏穿刺活检,光镜下检查显示肾小球节段系膜轻度增生性病变;电镜检查显示肾小球基底膜厚薄不一,基底膜致密层增厚,部分呈撕裂状和蛛网状;基因检测显示患者COL4A5基因第38号外显子编码区第3393~3419位碱基缺失(c.3393_3419del),导致第1128~1136号氨基酸缺失(p.G1128_S1136del);家系验证其为新发突变,且该突变位点在HGMD等数据库中均未见报道。入院后继续给予福辛普利钠治疗,以减少尿蛋白分泌、延缓肾脏病变。随访半年余,患儿无听力及眼部异常改变,肾功能无异常。结论COL4A5基因c.3393_3419del突变可能导致ALPORT综合征。早期的肾脏病理检查及基因检测对于明确ALPORT综合征的诊断、治疗方案的制定以及预后的评估具有重要意义。

1例COL4A4基因5号外显子c.274G>T:p.G92*无义突变的薄基底膜肾病患者家系遗传分析

目的分析COL4A4基因5号外显子c.274G>T:p.G92*无义突变致薄基底膜肾病患者家系遗传特点,为相关肾脏疾病的诊断和家系遗传咨询提供理论依据。方法对先证者临床资料、基因检测信息及其家系成员的基因检测信息进行回顾性分析。结果先证者64岁,女性,具有尿血和尿蛋白阳性病史,已进展至终末期肾病,其肾穿刺结果提示基底膜弥漫菲薄,符合薄基底膜肾病的诊断。先证者全外显子组测序检出一个未报道的COL4A4基因无义突变c.274G>T(p.G92*),该突变在1000genomes、gnomAD和dbSNP数据库中频率极低,极有可能为致病变异。家系中携带该变异的其他成员(女儿、儿子、孙子、孙女、外甥女)均有不同程度血尿或镜下血尿表现,而未携带者的尿检结果未见明显异常。结论COL4A4基因5号外显子c.274G>T:p.G92*无义突变致薄基底膜肾病临床表现为血尿,病理表现为基底膜变薄,晚期可能会发展为终末期肾病;该突变引起的遗传模式为常染色体显性遗传。

COL4A5基因c.3667G>C(p.G1223R)突变致X连锁Alport综合征家系的分子生物学实验诊断研究

目的探讨外显子捕获高通量测序技术对X连锁Alport综合征(X-linked Alport syndrome,XLAS)的分子生物学实验诊断作用。方法应用外显子捕获高通量测序技术对家系先证者进行基因检测,然后对检测到的变异进行生物信息学分析及家系验证,并综合分析患者临床特征和患者肾脏病理资料。结果此家系先证者(III-1)和舅舅(II-3)携带COL4A5 c.3667G>C(p.G1223R)基因突变,先证者母亲(II-2)为此基因突变的杂合子。生物信息学分析结果显示此突变是致病的且在家系中呈共分离。结论此研究明确了XLAS家系的致病机理并发现一新突变COL4A5 c.3667G>C(p.G1223R),扩大了非典型AS患者COL4A5基因突变谱,对患者的诊疗选择和临床管理具有重要意义。