气虚血瘀型Corti器毛细胞损伤动物模型的建立

背景:随着中医药对耳鸣耳聋的疗效越来越受到重视,但对其机制尚缺乏系统深入的研究,利用动物模型进行中医药治疗耳鸣耳聋的机制探索是非常有意义的研究方向。目的:建立一种气虚血瘀证型的Corti器毛细胞损伤动物(豚鼠)模型并评价其效果。方法:12只成年豚鼠按随机数字表法分为正常对照组和造模组。造模组首先采用改良耗气破气加饥饱失常法处理15 d进行气虚造模,之后以光化学反应法复制血瘀Corti器毛细胞损伤模型;正常对照组不干预。造模后检测两组豚鼠血清的D-木糖浓度,行耳声发射DPOAE测试,并观察光镜下耳蜗组织形态。结果与结论:(1)与正常对照组相比,造模组血清D-木糖浓度较低(P<0.01);(2)耳声发射DPOAE测试结果显示,造模组1 560,3 125 Hz DPOAE幅值较正常对照组及造模前降低(P<0.01);(3)造模组耳蜗组织形态发生变化:螺旋韧带、基底膜微血管及蜗轴毛细血管内有血管扩张、微血栓形成,血管纹水肿变性;Corti器内毛细胞变性、坏死或缺失;(4)提示:模型成功模拟了豚鼠气虚血瘀型Corti器毛细胞损伤的过程,未来可应用于中医药治疗耳鸣耳聋特别是突发性耳聋的机制研究。

Corti器动力学行为的二维有限元分析

通过豚鼠耳蜗底转Corti器的组织切片图像提供的结构原型,在对其形态结构做了必要、合理的简化和假设后,再现其组织结构及相互关系,采用通用有限元计算软件ABAQUS建立可以进行可视化数值模拟的二维有限元力学模型,对淋巴液波动所引起Corti器的动力响应进行了初步的数值模拟。本研究有助于进一步认识生理状态下Corti器的动力学行为,为内耳感音机理的研究提供理论基础。

强次声波对豚鼠Corti器超微结构的损伤

目的观察强次声波对豚鼠Corti器超微结构的损伤情况。方法将豚鼠置于频率8 Hz、强度为135 dB SPL的次声声场中连续暴露90 min。应用扫描电镜分别观测强次声波暴露后即刻(2 h内)、2天和7天时动物 Corti器超微结构的变化,计算各组耳蜗的受损率,与对照组进行比较。结果扫描电镜下见各实验组动物Corti器感觉毛细胞纤毛缺失、散乱、倒伏,表皮板等结构均有不同程度的损伤。在存活较长时期后,还可见到纤毛融合,部分细胞的表皮板破裂,以及支持细胞分离,细胞溶解,形成空洞。耳蜗受损率分别为70％-80％。结论强次声波可引起豚鼠Corti器超微结构不同程度的损伤。

顺铂作用下沙鼠耳蜗螺旋神经节神经元和Corti器细胞的凋亡

目的 探讨顺铂是否可引起沙鼠耳蜗螺旋神经节 (spiralganglion ,SG)神经元和Corti器细胞的凋亡。方法 对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,每日 4mg kg体重 ,分别于健康对照组及给药 4、5、6、7d各处死沙鼠 12只 ,取左侧耳蜗 ,每组动物取 10只耳蜗做平行蜗轴的石蜡切片 ,另 2只耳蜗做底回蜗轴及基底膜超薄切片。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术 (terminaldeoxynucleotidyltransferase mediateddUTPnickendlabelingmethod ,TUNEL)及透射电镜检测连续用药不同时间后底回SG及Corti器的细胞凋亡情况。结果 连续应用顺铂 5～ 7d ,在透射电镜下可以观察到底回SG神经元及外毛细胞中出现凋亡特征性病理改变 ,TUNEL标记的石蜡切片中可见给药 5d后SG和Corti器出现的阳性细胞明显高于健康对照组 ,给药 6～ 7d阳性细胞进一步增加。

新生大鼠耳蜗Corti器体外培养及其转基因表达

目的建立新生大鼠耳蜗Corti器体外培养模型及观察外源基因表达。方法采用出生后1～3天龄大鼠，分离出的耳蜗Corti器组织置入表面覆盖有胶原凝胶的培养皿中，在含有10％DMEM液体培养基中培养．加入携带报告基因的腺病毒悬液，观察外源基因的表达。结果耳蜗Corti器体外培养8小时后，培养组织生长良好，形态结构清晰可辨，在该实验条件下，Corti器形态结构可以维持5天以上，最长达7天，随着培养时间的延长，由于周围组织生长的蔓延，Corti器的结构分界不清楚。腺病毒加入Corti器后12小时即有基因表达，24小时达到高峰，表达时间可持续1周。结论新生大鼠离体内耳组织转基因培养法是内耳Corti器体外培养实验研究的一种可行方法。

基于电镜图像的Corti器三维建模

目的探讨建立 Corti 器的三维可视化模型的方法,为进一步建立其力学模型打下基础。方法制备豚鼠 Corti 器标本并行扫描电镜和透射电镜观察。以 Corti 器电镜图像为参照标准,在三维建模软件3DStudio MAX 的支持下,结合多种高级建模方法,创建 Corti 器的三维数字模型。结果成功建立了 Corti 器三维可视化模型,该模型正确展示了 Corti 器三维组成结构及各结构之间的空间位置关系。结论本实验应用电镜图像建立 Corti 器的三维模型的方法是可行的,Corti 器三维模型为研究耳蜗机械力学提供了重要基础。(中国眼耳鼻喉科杂志,2007,7:144-146)

豚鼠耳蜗Corti器外隧道的结构

目的观察豚鼠耳蜗Corti器外隧道的解剖特征。方法健康杂色豚鼠11只,共22耳,借助火棉胶切片(5只10耳)和扫描电镜(6只12耳)观察和分析豚鼠耳蜗Corti器外隧道的解剖。结果豚鼠耳蜗Corti器外隧道的内侧壁在耳蜗基底回和第一回由第三排外毛细胞和Deiter细胞的指状突起构成,外侧壁和顶壁由Hensen细胞构成。自耳蜗基底回逐渐向顶回,Deiter细胞的指状突起逐渐移向外侧,形成外隧道的外侧壁和顶壁。外隧道的内侧壁由第三排外毛细胞构成,Deiter细胞指突移向Hensen细胞构成外隧道的外侧壁和顶壁,外隧道腔隙逐渐缩小。第三、四回的外隧道完全被Deiter细胞所充填,Deiter细胞指突和Hensen细胞密切接触。结论豚鼠耳蜗Corti器外隧道的这种结构特征在研究Corti器的微细结构方面增加了新的认识。

模拟失重和噪声对大鼠听功能及耳蜗Corti器损伤的协同作用

目的探讨模拟失重和噪声对大鼠听功能及耳蜗Corti器损伤的协同作用。方法 48只大鼠随机分为空白组、失重组、噪声组和失重+噪声组,每组12只。失重组以Morey-Holton法模拟失重环境,噪声组暴露的噪声环境为模拟航天载人飞船内复合噪声,包括72±2dB SPL的持续稳态噪声和160dB SPL的脉冲噪声,失重+噪声组则同时暴露于上述失重及噪声环境中,空白组常规饲养,不做任何处理。分别于暴露1周和2周后,每组随机选出6只大鼠行ABR阈值检测后取材行HE染色、免疫荧光(DAPI)染色及扫描电镜观察耳蜗的形态学变化。结果暴露2周后大鼠ABR阈值较暴露1周时升高,失重+噪声组ABR阈值最高(P<0.01),其次为噪声组。HE染色示暴露1周和2周后除空白组外各组大鼠耳蜗Corti器均有不同程度的损伤,失重+噪声组最严重。免疫荧光染色示暴露1周后大鼠耳蜗毛细胞死亡方式以肿胀坏死为主,失重+噪声组最严重(肿胀率10%),其次为噪声组(肿胀率3.33%);暴露2周后大鼠耳蜗外毛细胞以核缺失为主,失重+噪声组缺失率最高(缺失率13.6%),其次为噪声组(缺失率12.7%),失重组毛细胞缺失以内毛细胞为主。扫描电镜示,失重+噪声组毛细胞静纤毛损伤最严重,其次为噪声组,再次为失重组。结论模拟失重和噪声环境对大鼠听功能的影响有协同作用,且这种协同作用对耳蜗Corti器有显著的损伤作用。

心钠素免疫反应物质在豚鼠耳蜗Corti器中的分布

目的 为了解豚鼠耳蜗Corti器组织中心钠素免疫反应 (Atrialnatriureticpeptidesimmunoreaction ,ANP -IR)物质的分布及形态学特征。方法 对耳蜗切片组织采用免疫组织化学ABC法进行研究。结果 Corti器中内侧第一、二排外毛细胞、Boettcher细胞和靠近螺旋韧带嵴的基底膜ANP -IR为阴性 ,其余的组织细胞均为阳性反应。结论 ANP在Corti器功能方面可能担负着重要的作用 ,三排外毛细胞中ANP -IR含量不同 ,其在功能上是否存在有差异 。

正常豚鼠耳蜗Corti器钙调素的分布

正常豚鼠耳蜗Ｃｏｒｔｉ器钙调素的分布高下，王锦玲，刘乾初钙调素（Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ，ＣａＭ）是一种多功能耐热小分子酸性钙结合蛋白，进化上十分保守，抗原性较弱，广泛存在于多种真核细胞中，并以Ｃａ￣（２＋）受体形式参与细胞中多种酶和许多钙依赖性生理过程...

耳蜗Corti器内部结构病变对听力的影响

目的从微观层面探究耳蜗病灶导致的Corti器内部结构病变对耳听觉功能的影响。方法基于Corti器内部结构的实验数据和几何关系建立Corti器有限元数值模型,通过变化耳蜗各结构的生物材料参数,模拟分析病变对内耳感音功能的影响。经过与实验测量数值的套图对比,验证了模型的正确性。结果耳蜗的宏观结构基底膜和微观结构静纤毛、外毛细胞病变都将导致听力响应曲线向高频移动,同时也都将导致基底膜的振幅减少。

一种快速简便的Corti器扫描电镜样品制备法

一种快速简便的Ｃｏｒｔｉ器扫描电镜样品制备法李向党１林顺长２（西安第四军医大学电镜室１，西京医院耳鼻喉科２，西安７１００３２）有时我们必须用扫描电镜来观察新生小鼠Ｃｏｒｔｉ器的形态。由于新生小鼠的Ｃｏｒｔｉ器非常小，必须在光镜下定位取材。我们通常采用...

耳蜗Corti器及微血管肾上腺素能神经纤维的分布特点

目的 探讨耳蜗 Corti器及微血管肾上腺素能纤维的分布特点 .方法 采用免疫组化 ABC技术及针对肾上腺素能合成过程中不同酶的多克隆抗体 ,包括酪氨酸羟化酶(TH ) ,多巴胺β-羟化酶 (DBH)及苯乙醇胺 - N -甲基转移酶(PNMT) ,研究耳蜗 Corti器和蜗轴螺旋动脉及耳蜗微血管不同类型肾上腺素能神经的分布 .结果 蜗轴螺旋动脉及其放射状小动脉含有丰富的 TH免疫反应阳性的神经纤维 ,动脉近端 TH阳性纤维成致密的神经网 ,一些纵行的神经纤维聚集成神经束沿血管的长轴走行 ,但血管阳性纤维的数量及密度明显不同 .DBH阳性纤维的数量很少 ,未见 PNMT阳性纤维 .在耳蜗 Corti器 ,TH阳性的纤维分成两类 ,一类阳性纤维定位于内螺旋束 ,隧道螺旋束及隧道横贯纤维组成类似“铁轨样”结构 .在外毛细胞区偶可见 TH阳性的终末 ;另一类纤维沿耳蜗 Corti器的微血管走行 ,包绕血管形成致密的神经网 .Corti器微血管较少见到 DBH阳性的纤维 ,未见 PNMT阳性纤维 .结论 耳蜗微血管的肾上腺素能神经支配主要是多巴胺 ,而肾上腺素、去甲肾上腺素的作用甚微 .

新生SD大鼠G418耳蜗Corti器离体损伤模型的建立

目的:建立毒性蛋白G418损坏新生大鼠耳蜗毛细胞的离体培养试验模型。方法:应用耳蜗基底膜分离取材技术,耳蜗器官离体培养技术和毛细胞免疫组化染色技术定量观察了G418对新生SD小鼠耳蜗毛细胞的损害。结果:G418对耳蜗毛细胞的有明显的损害,200μg/ml的终浓度,内外毛细胞均有不同程度损害,以外毛细胞为著。结论:G418可用于建立耳蜗Corti器离体损伤模型。

重组杆状病毒载体介导新生大鼠耳蜗Corti器体外模型基因转染研究

目的建立新生大鼠耳蜗Corti器体外培养模型,探讨重组杆状病毒作为内耳基因转染载体的可行性及其转染特点。方法应用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统制备重组杆状病毒Bac-GFP,建立新生大鼠耳蜗Corti器体外模型,加入携带报告基因的病毒悬液,观察外源基因表达情况。结果耳蜗Corti器体外培养48小时后,培养组织生长良好。Bac-GFP联合丁酸钠可以高效转染毛细胞和螺旋神经节细胞,同时并没有改变Corti器的正常结构。结论新生大鼠离体内耳组织转基因培养法是内耳基因治疗实验研究的一种可行方法。杆状病毒可以在体外高效、安全、快速的转染毛细胞和螺旋神经节细胞,有希望成为内耳基因治疗的新型载体。

重组腺病毒构建及转染培养耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞的实验研究

目的构建携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒,观察GFP基因在体外培养的新生大鼠耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞的表达。方法通过细菌内同源重组方法构建携带有绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒(Ad-GFP),观察重组腺病毒转染培养的新生大鼠耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞后,不同时间内绿色荧光蛋白基因的表达情况、表达部位及病毒对培养耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞的影响。结果构建的重组腺病毒经酶切电泳鉴定正确;荧光显微镜下观察腺病毒转染体外培养的新生大鼠耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞后,12 h即开始表达绿色荧光蛋白基因,24 h达到高峰,表达时间可持续1周;倒置显微镜观察转染后的Corti器和螺旋神经节细胞形态结构及生长无明显改变。结论本实验成功构建了携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺病毒,通过该方法构建的腺病毒可以介导绿色荧光蛋白(GFP)基因在体外培养的新生大鼠耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞中表达,但腺病毒本身对体外培养的耳蜗Corti器和螺旋神经节细胞生长无明显影响,为通过腺病毒进行内耳基因治疗提供了理论依据。

SD大鼠损伤Corti器中毛细胞样细胞的演变

目的 研究氨基糖甙类抗生素引起哺乳类动物Corti器损伤及损伤后的修复情况。方法 用新霉素皮下注射致新生SD大鼠Corti器损伤 ,然后用扫描电镜观察停药后不同时期的Corti器毛细胞的损伤及修复表现。结果 在外毛细胞损伤区有细胞表面长有微绒毛簇的毛细胞样细胞出现 ,且其在损伤Croti器中有发生 -发展 -退化的变化过程。

豚鼠中耳感染致Corti器P物质受体阳性细胞的表达

目的 应用P物质受体 (substancePreceptor,SPR)的多克隆抗体观察豚鼠中耳急性感染后内耳Corti器SPR阳性细胞的表达。方法 豚鼠一侧耳经鼓膜注射 1× 10 8个 /L金黄色葡萄球菌液 ,制备急性化脓性中耳炎模型 ,3d后灌注固定 ,取耳蜗基底膜铺片 ,行SPR免疫组织化学染色。结果 光镜下发现中耳急性感染后豚鼠耳蜗基底膜表达一种非正常耳蜗组织细胞本身的SPR阳性细胞 ,这些细胞与内、外毛细胞 ,支持细胞 ,血管内皮细胞 ,螺旋神经节细胞等在形态部位上存在明显的差异。阳性细胞呈散在分布 ,主要集中在基底膜的游离缘 ,体积较大 ,约为红细胞的 6～ 12倍 ,每个细胞均有多个突起 ,形成类神经元状。细胞呈SPR强阳性。在阳性细胞的胞质内可见空泡或颗粒状的结构。结论 中耳急性感染可诱发豚鼠Corti器表达非正常基底膜所有的SPR阳性的非特异性反应细胞 。

新生小鼠耳蜗Corti器的体外培养与观察

目的建立新生昆明小鼠耳蜗Corti器体外培养的简便方法并观察耳蜗毛细胞的组织学形态。方法取生后3～5 d昆明小鼠耳蜗基底膜,平铺在胶原凝胶表面,然后在含有1%牛血清白蛋白的DMEM/F12培养基中进行培养。采用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光染色方法观察耳蜗毛细胞的生长情况。结果耳蜗基底膜经24、48 h和72 h培养后,内、外毛细胞均生长良好,其结构完整,纤毛束排列有序,无任何缺失。结论本培养方法简便有效,可用于耳蜗Corti器体外培养实验研究。