基于COS Marker分析柑橘属及其近缘、远缘属植物的遗传与进化

【目的】研究柑橘属及其近缘、远缘属种质资源的遗传多样性及亲缘关系,为柑橘类果树的遗传和进化关系提供新的视点,也为遗传育种以及种质资源深入的收集、保护及评价利用提供新工具和参考。【方法】下载Phytozome网站公布的全部克里迈丁Conserved ortholog sequences,并在NCBI中与测序甜橙序列比对,获得具有Gap的序列,从中设计60对COS引物,筛选并利用多态性标记对柑橘属及其近缘、远缘属植物进行扩增检测,通过Structure、Power Marker和Gen Al Ex等软件进行数据分析。【结果】从设计引物中筛选出谱带清晰、稳定性好、具有多态性且分布在柑橘不同连锁群的引物25对,对45份柑橘属及其近缘、远缘属种质资源进行扩增检测,共得到584条谱带,平均每对引物约为23.36条;基因多样性为0.26—0.88,平均0.49;PIC为0.26—0.87,平均0.48。群体遗传结构分析显示,在K=9时,群体结构图清晰地揭示了柑橘属及其近、远缘属植物间的遗传组成关系,可区分为宽皮柑橘类群、柚类群、枸橼类群、大翼橙类群、金柑类群、枳及澳沙檬澳圆檬类群、花椒类群、黄皮酒饼簕九里香类群以及印度野橘和莽山野柑杂合类群,类群关系与聚类分析结果总体比较一致。UPGMA聚类分析显示,COS Marker能够明确地区分柑橘属及其近缘、远缘属种质资源,柑橘属在较高分类层次与金柑属、枳属、澳沙檬属、澳圆檬属、花椒属以及黄皮、酒饼簕、九里香等近、远缘植物分离;在柑橘属内,枸橼和大翼橙类首先聚类,然后与宽皮柑橘、柚类等其他柑橘属植物聚类;宽皮柑橘类群里,道县野橘、岑溪酸橘等半野生宽皮柑橘与椪柑等栽培宽皮柑橘可以明确区分,而莽山野柑和印度野橘不在本类群。【结论】根据甜橙和克里迈丁基因测序信息设计的COS引物,在柑橘近缘、远缘属植物中均能获得有效扩增,能够有效区分柑橘属及其近缘、远缘属种质资源;莽山野柑和印度野橘的遗传组成表现杂合,聚类分析中与宽皮柑橘距离比较远,可能并非宽皮橘类群最原始类型。

基于μCOS-Ⅱ的嵌入式系统以太网通信功能的实现

μCOS-Ⅱ是一种适用于嵌入式系统的源码开放的占先式实时多任务操作系统。讨论了基于μCOS-Ⅱ嵌入式系统的以太网通信功能的实现,主要包括轻型TCP/IP协议栈的引入和对网络设备软件驱动的实现,以及软件系统的调试。

μCOSⅡ在基于Cortex-M3核的ARM处理器上的移植

介绍了源代码公开的实时操作系统μCOSⅡ在ARM处理器STM32F103VBT6上的移植过程。首先简要介绍了ARM核Cortex-M3的一些基本概念,然后结合其基本概念用C语言和汇编语言修改了移植过程中需要修改的所有源代码文件且给出了其详细解释。最后给出了一个基于μCOSII嵌入式操作系统的简单应用,讨论了基于嵌入式操作系统的应用程序开发方法与传统应用程序开发方法的区别,说明前者方法的优越性并验证了移植的成功。

基于μcOSⅡ操作系统的嵌入式网络服务器的设计与实现

Inernet的应用日趋广泛,一方面它向功能更加复杂多样的面向PC的网络应用,另一方面它逐渐渗透到智能仪表,网络家电,网络测控等嵌入式系统领域,并成为了嵌入式系统的一种新的发展方向。在本文中我们设计了一个基于cOSⅡ实时操作系统的嵌入式网络服务器,并给出了一些关键的实现细节。

μCOSⅡ在基于S3C44B0实验开发板上移植设计与实现

在分析了μCOSⅡ内核的体系结构和移植要点的基础上,介绍了bootloader的编写修改以及如何将μCOSⅡ嵌入式实时操作系统移植到基于S3C44B0的实验开发板的设计与实现。文章最后还介绍了该系统的应用验证测试。

基于μCOSⅡ实时操作系统的电子画板的设计

基于UCOS-II实时操作系统完成了触摸屏传感器的程序驱动设计、触摸屏与LCD坐标的校准等工作,设计了一款嵌入式系统电子画板.实现人机交互菜单式的用户界面设计,电子菜单选择绘图背景,印花图案,画笔颜色、粗细、形状等参数,RG B调色按钮定义用户需要的画笔颜色,在绘图区域绘出用户需要的图案,书写文字.经过实验调试,电子画板功能完整,用户界面友好,操作简便.

μCOS Ⅱ在单片机MSP430F5438上的应用

随着各种便携及手持设备在人们日常生活中的日益涌现,任务的实时性及设备的功耗成为人们关注的首要因素。介绍了一种实时性的信号采集设计方案:采用TI的超低功耗单片机MSP430F5438与μCOSII操作系统相结合,既保证了设备在工作模式下各个任务的实时响应,又能使设备在空闲时转入休眠模式,降低设备的功耗,延长设备的使用时间。

基于μcos Ⅱ的贮运温湿度监测系统设计与研究

针对贮运温湿度监测过程中,监测设备体积大、功耗高、布线繁杂的难点,提出了一种基于μcos Ⅱ的嵌入式低功耗贮运温湿度监测系统。系统采用嵌入式设计,提出低功耗策略将系统最低功耗降至200μA以下。系统以STM32F407作为中央处理器,以大容量SD卡作为存储介质,将系统体积降至60×80×20(mm^3)以下,并运用ANSYS对其结构可靠性进行了分析。以红外通信方式作为数据读取方式,解决了设备布线繁杂的难点。现场试验表明,系统具有监测精确、布设灵活、数据读取便捷的特点。

血清学标志物甲胎蛋白、PIVKA-Ⅱ和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3联合诊断肝癌的meta分析

目的:探讨血清生物标志物甲胎蛋白(AFP)、维生素K缺失或拮抗剂Ⅱ诱导的蛋白质(PIVKA-Ⅱ)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)单独或联合用于肝细胞癌(以下简称肝癌)诊断的价值。方法:检索PubMed、Web of Science、Embase三个数据库,收集2002年以来发表的AFP、PIVKA-Ⅱ和GPC-3单独或联合用于诊断肝癌的文献。根据纳入和排除标准筛选文献并提取相关数据。利用诊断准确性研究的质量评价(QUADAS)检查表对纳入的文献进行质量评价,并采用Meta DiSc软件、Review Manager 5.4软件和Stata 15.1软件对AFP、PIVKA-Ⅱ和GPC-3单用和联合使用诊断肝癌的受试者工作特征曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度等指标进行数据分析。结果:共纳入32篇文献。Meta分析结果显示,单个标志物用于诊断肝癌时,PIVKA-Ⅱ的AUC值最高,为0.88(95%CI:0.85~0.91),其次是GPC-3和AFP;多个标志物联合用于诊断肝癌的AUC均高于单个标志物,其中PIVKA-Ⅱ联合GPC-3诊断的AUC值最高,为0.90(95%CI:0.87~0.92)。单个标志物用于诊断肝癌时,PIVKA-Ⅱ和GPC-3的敏感度相对较高(分别为0.75和0.76),但GPC-3的特异度不如PIVKA-Ⅱ和AFP(AFP、PIVKA-Ⅱ和GPC-3分别为0.87、0.88和0.81);多个标志物联合用于诊断肝癌的敏感度较单个标志物诊断时有所提高,但特异度无明显提高。单个标志物用于诊断肝癌时,PIVKA-Ⅱ的诊断比值比(DOR)最高,为22(95%CI:13~36),其次是GPC-3和AFP;两个标志物联合用于诊断肝癌的DOR均高于单个标志物,其中AFP联合GPC-3诊断的DOR最高,为25(95%CI:9~67);三个标志物联合用于诊断肝癌时的DOR明显降低,为10(95%CI:7~45)。结论:单个标志物用于肝癌诊断时,PIVKA-Ⅱ的诊断价值更高。两种标志物联合能显著提高肝癌诊断的敏感度,三种标志物联合未能进一步提高诊断价值。结合临床实际,推荐AFP联合PIVKA-Ⅱ用于肝癌的诊断。

μCOSⅡ嵌入式数据采集系统设计

针对以往的数据采集系统实时性差数据传输率低的问题,设计利用操作系统μCOSⅡ高实时性和USB数据传输高效性,构建了基于μCOSⅡ和USB2.0的数据采集系统。系统由信号预处理单元、AD转换单元、数据传输单元、LCD显示单元等组成。通过输入特定的模拟信号,得出了系统的性能参数。经过多次实验,数据表明:该数据采集系统可实现最大工作频率为110KHZ采样频率转换精度为0.08v的现场模拟信号的采集。

基于转录组学及表观遗传组学筛选与血管紧张素-Ⅱ相关的胸主动脉瘤/夹层诊断标志物

目的探讨基于转录组学及表观遗传组学筛选与血管紧张素-Ⅱ(Ang-Ⅱ)作用相关的胸主动脉瘤/夹层(Thoracic aortic aneurysms/dissection,TAAD)诊断标志物。方法利用数据集GSE35627筛选Ang-Ⅱ作用于大鼠原代主动脉平滑肌细胞的差异表达基因(DEGs)。取与Ang-Ⅱ相关数据集DEGs的交集,使用GeneMANIA数据库对交集基因进行功能分析和DO分析。使用R软件ChAMP包分析正常人和主动脉夹层(AD)患者升主动脉组织的表观基因组数据集GSE84274的差异甲基化水平,分析关键DEGs甲基化水平。使用人胸主动脉瘤(TAA)外周血样本全基因组基因表达谱数据集GSE9106 testing组绘制受试者工作特征曲线(ROC),预测诊断的有效性。结果在细胞水平、动物模型和TAAD临床病例的基础上,从GSE35627、GSE64613和GSE52093数据集得到6个交集基因:SLC7A8、WISP1、IL1R1、BCAT1、NID2及ATOH8。表观遗传组学分析发现,WISP1和NID2分别有5个和3个差异甲基化位点(DMPs)的甲基化水平存在明显差异。ROC曲线验证结果显示,WISP1的AUC为0.7,其特异度和敏感度较强,具有较高的准确性。结论通过转录组学及表观遗传组学分析可知,Ang-Ⅱ相关基因WISP1和NID2有助于TAAD的早期诊断。

硝酸异山梨酯氯化钠注射液联合酒石酸美托洛尔缓释片(Ⅱ)治疗缺血性心肌病的临床效果

目的观察硝酸异山梨酯氯化钠注射液联合酒石酸美托洛尔缓释片(Ⅱ)治疗缺血性心肌病的临床效果。方法选取2023年4—12月黔东南州人民医院收治的缺血性心肌病患者540例,按照入院顺序分为观察组和对照组各270例。在常规治疗基础上,对照组应用酒石酸美托洛尔缓释片(Ⅱ)治疗,观察组在对照组基础上加用硝酸异山梨酯氯化钠注射液治疗,2组疗程均为1个月。比较2组治疗前后心功能指标[左室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)]、心肌标志物[脑钠肽(BNP)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、肌钙蛋白T(cTnT)],不良反应及不良心血管事件。结果观察组治疗总有效率为98.52%,高于对照组的92.59%(χ^(2)=11.163,P=0.001)。治疗1个月后,2组LVEF、CO高于治疗前,LVEDD、LVESD短于治疗前,且观察组高/短于对照组(P<0.01);2组BNP、cTnT水平低于治疗前,IGF-1水平高于治疗前,且观察组低/高于对照组(P<0.01)。观察组与对照组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(1.85%vs.3.33%,χ^(2)=1.173,P=0.279)。观察组不良心血管事件总发生率为2.96%,低于对照组的7.78%(χ^(2)=6.158,P=0.013)。结论硝酸异山梨酯氯化钠注射液联合酒石酸美托洛尔缓释片(Ⅱ)治疗缺血性心肌病效果显著,可明显改善患者心功能及实验室指标,安全性高,且可降低不良心血管事件发生风险。

骨松Ⅱ号治疗绝经后骨质疏松症临床生化指标观察

目的：评估骨松Ⅱ号治疗绝经后骨质疏松症的疗效，并试图揭示其机理。方法：以３５例年龄４９～６２岁、绝经时间５．６年的绝经后骨质疏松症妇女为治疗对象，于治疗后６～９个月、１～２年分期随访。疗程６个月～２年１个月不等，平均疗程为１年２个月。治疗前后作血雌二醇（Ｅ２）、睾酮（Ｔ）、晨尿Ｃａ／Ｃｒ、２４ｈ尿Ｃａ／Ｃｒ、２４ｈ尿Ｅ２、２４ｈ尿羟脯氨酸（ＨＯＰ）等生化指标的测定。结果：治疗６～９个月及治疗１～２年后，血及２４ｈ尿Ｅ２显著升高，治疗１～２年后血Ｔ与尿Ｃａ／Ｃｒ显著下降。血Ｅ２、２４ｈ尿Ｅ２分别与晨尿Ｃａ／Ｃｒ、血Ｔ、２４ｈ尿Ｃａ／Ｃｒ、２４ｈ尿ＨＯＰ治疗前后变化值呈显著相关。结论：骨松Ⅱ号具有提高绝经后妇女血Ｅ２水平、降低尿Ｃａ／Ｃｒ及２４ｈ尿ＨＯＰ、抑制骨吸收的作用；其升高血Ｅ２水平的作用，可能与促进Ｔ向Ｅ２的转化有关。

膜联蛋白Ⅱ在肺癌组织、肺泡灌洗液和胸腔积液中的表达水平及在肺癌诊断中的价值研究

目的探讨膜联蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)在支气管肺癌组织、肺泡灌洗液(BALF)和胸腔积液中的表达水平及在肺癌诊断中的价值。方法收集2010年10月—2011年10月兰州大学第一医院呼吸内科收治的肺癌伴胸腔积液患者60例(试验组)以及结核性渗出性胸腔积液患者60例(对照组)。对肺癌组织蜡块标本保留完整的48例患者的肺癌组织进行免疫组化染色,并收集该院病理科提供的18例正常肺组织蜡块标本,检测AnnexinⅡ在肺癌组织及正常肺组织中的阳性表达情况;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测试验组及对照组患者的BALF、胸腔积液中AnnexinⅡ的表达水平。结果肺癌组织中AnnexinⅡ的阳性表达率(62.5%,30/48)高于正常肺组织(16.6%,3/18),差异有统计学意义(P<0.05)。AnnexinⅡ在肺癌组织中的表达与患者的性别、吸烟与否、癌细胞分化程度及病理分型无关(P>0.05);与病理分期以及淋巴结转移有关(P<0.05)。试验组患者BALF、胸腔积液中AnnexinⅡ的表达水平高于对照组(P<0.05)。两组BALF中AnnexinⅡ的表达水平分别高于各自组内胸腔积液中AnnexinⅡ的表达水平(P<0.05)。结论 AnnexinⅡ在肺癌组织中的阳性表达率及在肺癌患者BALF、胸腔积液中的表达水平均较高,故AnnexinⅡ可作为肺癌诊断的良好标记物。

骨关节炎早期的Ⅱ型胶原代谢产物

骨关节炎是以关节软骨渐进性破坏为特点的、普遍的致残性疾病。临床上需要一些早期即可以测量的、敏感的、特异性的标志物来诊断疾病。软骨的主要组成是Ⅱ型胶原,所以其合成和降解所产生的生物学标志物已成为研究重点。对关节滑液、血清、尿中的生物学标志物的检测可以早期诊断疾病、监测疾病的发展、了解机体对治疗药物的反应。Ⅱ型胶原合成的产物包括:Ⅱ型胶原C前肽、ⅡA型胶原N前肽。Ⅱ型胶原降解产物包括:Ⅱ型胶原C端肽、Ⅱ型胶原新抗原表位、Ⅱ型螺旋、单克隆抗体C2C结合肽段、可氰溴化的9.7肽段、Ⅱ型胶原-1和硝化的Ⅱ型胶原-1。本文仅对Ⅱ型胶原合成、降解所产生的生物学标志物与早期骨关节炎之间的关系加以阐述。

骨代谢标志物TRACP-5b与CTX-Ⅱ在进展型股骨头坏死患者中的表达及意义

目的探讨骨代谢标志物抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)与Ⅱ型胶原C-末端肽(CTX-Ⅱ)在进展型股骨头坏死患者中的表达及意义。方法选择2015年1月至2016年10月接诊的180例股骨头坏死患者,其中普通股骨头坏死组45例,骨质疏松组45例,进展型股骨头坏死组45例,对照组(普通外伤)45例。以酶联免疫法对4组患者血清中TRACP-5b、CTX-Ⅱ的含量进行测定。结果在进展型股骨头坏死组患者中,TRACP-5b水平明显高于普通股骨头坏死组、对照组[(53.48±3.72)U/L vs.(47.85±1.84)U/L,(53.48±3.72)U/L vs.(45.12±0.65)U/L](P<0.05);骨质疏松患者血清TRACP-5b表达明显高于普通股骨头坏死组、对照组[(51.83±2.05)U/L vs.(47.85±1.84)U/L,(51.83±2.05)U/L vs.(45.12±0.65)U/L](P<0.05);进展型股骨头坏死组患者血清CTX-Ⅱ表达明显高于普通股骨头坏死组、骨质疏松组、对照组[(221.96±8.32)ng/L vs.(181.03±6.35)ng/L,(221.96±8.32)ng/L vs.(179.86±6.51)ng/L,(221.96±8.32)ng/L vs.(177.94±6.60)ng/L](P<0.05)。结论在进展型股骨头坏死患者中,血清TRACP-5b、CTX-Ⅱ水平的表达较高,可通过对其含量的检测预测股骨头坏死的病情进展,以选择合适的治疗方案。

鸡Igλ轻链基因克隆、序列分析及其在COS7细胞膜上的定位表达

为了研究鸡B细胞膜免疫球蛋白(mIg)的功能,深入了解鸡免疫系统抗体基因的特点,从鸡法氏囊B细胞cDNA中扩增出Igλ轻链基因,对其核苷酸序列和氨基酸序列进行了分析和比较。该基因cDNA全长873bp,编码含226个氨基酸的Igλ轻链,N-端21个氨基酸构成轻链信号肽,随后是2个Ig样结构域。运用融合PCR的方法将该基因与牛IgG Fc受体γRⅡ跨膜区序列嵌合形成重组跨膜分子,构建真核表达载体pcDNA-λR2T,转染COS7细胞,荧光抗体染色及流式细胞术检测到重组鸡Igλ轻链在细胞膜上的表达。所扩增的鸡Igλ轻链基因以及构建表达于细胞膜上的重组鸡Igλ轻链跨膜分子,为研究鸡免疫系统中的抗体轻链基因,探索Igλ轻链和B细胞膜免疫球蛋白的功能奠定技术基础。

人FcγRⅡ真核表达质粒的构建及稳定转染细胞系的建立

目的:建立稳定表达人FcγRⅡ(human Fc gamma receptor Ⅱ,huFcγRⅡ)的真核细胞系,为后续研究奠定基础。方法:采用RT-PCR方法从人外周血白细胞合成FcγRⅡcDNA,构建huFcγRⅡ表达质粒pcDNA3-huFcγRⅡ,经酶切和PCR鉴定后,将pcDNA3-huFcγRⅡ质粒通过脂质体转染法转染COS7细胞,并经G418筛选获得稳定表达huFcγRⅡ的细胞克隆。采用免疫荧光法和玫瑰花环试验检测huFcγRⅡ的表达。结果:构建的pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒经酶切鉴定与预期一致,稳定转入COS7细胞后,经免疫荧光染色,约90%的转染细胞可见荧光,而未转染的COS7对照细胞未见荧光。结论:成功构建pcDNA3-huFcγRⅡ真核表达质粒,建立了稳定表达huFcγRⅡ的细胞系,为进一步研究奠定了基础。

鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白融合分子在COS7细胞膜的表达

将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igλ轻链基因中,并将鸡Igλ轻链信号肽与Pegfp-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp-C1-SP。鸡Igλ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点,构建了带有信号肽的鸡Igλ轻链/GFP融合蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后,荧光显微镜观察,重组鸡Igλ轻链/GFP蛋白在COS7细胞膜及膜周围有明显表达,而载体pEGFP-C1转染的COS7细胞GFP则分布在细胞及细胞核。结果表明,牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区能介导融合蛋白在细胞膜上的表达。

血管紧张素受体Ⅱ拮抗剂抗肝纤维化的近期疗效观察

目的研究血管紧张素受体Ⅱ拮抗剂(代文)治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的治疗作用。方法35例慢性乙型肝炎患者随机分为代文组及复方鳖甲软肝片组,疗程为6个月,测治疗前后血清HA、HPCⅢ、LN及TGF-β1水平。结果两组治疗前后HA、HPCⅢ、LN及TGF-β1均降低(P<0.05),两组治疗后相比较血清肝纤维化指标无显著差异(P>0.05),但TGF-β1有统计学意义(P<0.05)。结论血管紧张素受体Ⅱ拮抗剂具有较好的抗乙型肝炎肝纤维化的作用。