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COX-2 mRNA在膝骨关节炎病变过程中的作用研究 被引量:8
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作者 王培 楚天舒 +3 位作者 阎磊 刘冰 朱清 邵凤民 《临床医学工程》 2019年第4期477-478,共2页
目的探讨COX-2 mRNA在膝骨关节炎(KOA)病变过程中的作用。方法 76例膝骨关节炎患者(研究组)根据病变进展分为初期、中期、晚期三组,选取15例非膝骨关节炎患者为对照组,比较各组的COX-2 m RNA以及COX-2蛋白表达水平。结果研究组、初期组... 目的探讨COX-2 mRNA在膝骨关节炎(KOA)病变过程中的作用。方法 76例膝骨关节炎患者(研究组)根据病变进展分为初期、中期、晚期三组,选取15例非膝骨关节炎患者为对照组,比较各组的COX-2 m RNA以及COX-2蛋白表达水平。结果研究组、初期组、中期组、晚期组的成纤维样滑膜细胞中COX-2 mRNA及蛋白表达灰度值显著高于对照组(P<0.05);初期组的成纤维样滑膜细胞中COX-2 mRNA及蛋白表达灰度值显著高于中期组、晚期组(P <0.05)。结论 COX-2mRNA在膝骨关节炎患者病变初期表达水平较高,检测COX-2 m RNA表达水平有助于为膝骨关节炎患者的诊治及预后提供指导。 展开更多
关键词 cox-2 mrna 膝骨关节炎 病变过程 作用
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食管鳞癌中COX-2 mRNA的表达以及NSAID对其的影响 被引量:4
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作者 刘萱 李鹏 +2 位作者 张澍田 贾继东 于中麟 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第11期2527-2530,共4页
目的:检测人类食管鳞癌组织和细胞中COX-2 mRNA的表达及NSAID对其的影响,探讨COX-2与食管鳞癌发病机制之间可能存在的关系. 方法:用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测22例食管鳞癌患者液氮冻存的食管鳞癌组织和癌周正常食管鳞状上皮组... 目的:检测人类食管鳞癌组织和细胞中COX-2 mRNA的表达及NSAID对其的影响,探讨COX-2与食管鳞癌发病机制之间可能存在的关系. 方法:用逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)检测22例食管鳞癌患者液氮冻存的食管鳞癌组织和癌周正常食管鳞状上皮组织标本:COX-2 mRNA的表达.将人类食管鳞癌细胞株与阿司匹林或尼美舒利共同孵育后,用噻唑蓝法定量检测细胞增生情况,用RT-PCR法检测其COX-2 mRNA的表达情况. 结果:在22例食管鳞癌组织标本中有12例(54.5%)COX-2 mRNA表达阳性,但在癌周正常食管鳞状上皮组织标本均未检测到COX-2 mRNA表达.细胞培养结果表明,阿司匹林和尼美舒利对EC-9706细胞株的增生和COX-2 mRNA 表达均有影响;但对EC-109细胞株,仅阿司匹林对细胞的增生和COX-2 mRNA表达有影响. 结论:人类食管鳞癌常表达COX-2 mRNA,提示COX-2 有可能在食管鳞癌的发生机制中起重要作用,而且NSAID 很可能有助于预防和治疗此病. 展开更多
关键词 食管鳞癌 cox-2m rna 表达 NSAID
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siRNA沉默COX-2基因抑制MDA-MB-231细胞增殖 被引量:1
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作者 黄小环 封玉玲 +1 位作者 周铁军 侯良绢 《基础医学与临床》 CSCD 2017年第11期1620-1621,共2页
COX-2是前列腺素合成的关键酶,在正常组织细胞中一般不表达或者低表达,在高侵袭性乳腺癌细胞中高表达COX-2。本研究通过使用siRNA技术靶向沉默COX-2基因,从而抑制COX-2的表达,观察MDA-MB-231细胞增殖能力的变化,进一步探讨COX-2在... COX-2是前列腺素合成的关键酶,在正常组织细胞中一般不表达或者低表达,在高侵袭性乳腺癌细胞中高表达COX-2。本研究通过使用siRNA技术靶向沉默COX-2基因,从而抑制COX-2的表达,观察MDA-MB-231细胞增殖能力的变化,进一步探讨COX-2在肿瘤细胞增殖过程中所起的作用,并为基因沉默COX-2,防治乳腺癌提供实验依据。 展开更多
关键词 mDA-mB-231 cox-2基因 细胞增殖能力 sirna rna沉默 乳腺癌细胞 前列腺素合成 组织细胞
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丙酮酸激酶同工酶M2介导长非编码RNA RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大作用
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作者 李艺 温艺红 +5 位作者 伍华燕 姜佳雪 欧涛 陈凯茵 刘宇鹏 单志新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期544-553,共10页
越来越多的证据表明,长非编码RNA(lncRNA)在生物学功能调节中发挥着重要的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)检测显示,与健康器官捐献者(n=23)相比,长非编码RNARP11-879F14.2在心力衰竭(heart failure,HF)患者(n=21)心肌中表达水平显著升高,... 越来越多的证据表明,长非编码RNA(lncRNA)在生物学功能调节中发挥着重要的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)检测显示,与健康器官捐献者(n=23)相比,长非编码RNARP11-879F14.2在心力衰竭(heart failure,HF)患者(n=21)心肌中表达水平显著升高,但其在心肌肥厚调节中可能的作用和机制尚不清楚。利用腺病毒介导在乳小鼠心肌细胞(neonatal mouse ventricular cardiomyocytes,NMVCs)和乳大鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular cardiomyocytes,NRVCs)中过表达RP11-879F14.2,检测对NMVCs中心肌肥厚相关基因,包括肌球蛋白重链(MYH7)、骨骼肌肌动蛋白(Acta1)以及心钠素(NPPA)表达的影响,结果显示,过表达RP11-879F14.2可显著抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达。RT-qPCR和Western印迹结果证实,当过表达RP11-879F14.2时可显著促进NMVCs中丙酮酸激酶同工酶M2(PKM 2)表达。并且,过表达PKM 2和RP11-879F14.2可一致地抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达和去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导NRVCs的表面积增加,而敲降PKM 2可逆转RP11-879F14.2对NMVCs中心肌肥厚相关基因表达的抑制作用。利用Seahorse 96XF细胞能量分析仪检测显示,过表达RP11-879F14.2和PKM 2可一致增加NMVCs中葡萄糖代谢水平,而沉默PKM 2对RP11-879F14.2上调NMVCs中糖酵解、三羧酸(TCA)循环和线粒体电子传递链(ETC)相关基因的表达有显著的抑制作用。因此,PKM 2介导RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多
关键词 心肌肥厚 心肌细胞 长非编码rna 丙酮酸激酶同工酶m2
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RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和糖酵解 被引量:1
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作者 颜秋霞 曾鹏 +9 位作者 黄树强 谭翠钰 周秀琴 乔静 赵晓英 冯玲 朱振杰 张国志 胡鸿 陈彩蓉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期9-16,共8页
目的探讨X连锁RNA结合基序蛋白(RBMX)对膀胱癌细胞(1376细胞和UC-3细胞)的增殖、迁移、侵袭的影响以及其在糖酵解中的作用。方法采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建RBMX过表达和敲低的膀胱癌细胞模型(1376细胞和UC-3细胞)。采... 目的探讨X连锁RNA结合基序蛋白(RBMX)对膀胱癌细胞(1376细胞和UC-3细胞)的增殖、迁移、侵袭的影响以及其在糖酵解中的作用。方法采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建RBMX过表达和敲低的膀胱癌细胞模型(1376细胞和UC-3细胞)。采用RT-qPCR和Westernblotting分别在mRNA水平和蛋白水平上检测细胞模型是否构建成功。通过EdU增殖实验和克隆形成实验检测过表达和敲低RBMX后细胞的生长和集落形成能力,同时通过Transwell实验分析过表达和敲低RBMX后对细胞迁移、侵袭能力的影响;随后,采用Westernblotting检测过表达和敲低RBMX后糖酵解关键蛋白PKM1(M1型丙酮酸激酶)和PKM2(M2型丙酮酸激酶)的表达变化;最后,利用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分析过表达和敲低RBMX对膀胱癌细胞糖酵解的影响。结果RT-qPCR和Westernblotting结果显示,过表达RBMX膀胱癌细胞的mRNA和蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P<0.05),敲低RBMX膀胱癌细胞的mRNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照组(P<0.05)。过表达RBMX明显抑制膀胱癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭,敲低RBMX则作用相反。Westernblotting实验结果显示,过表达RBMX使PKM1表达上升,PKM2表达下降,敲低RBMX则作用相反。葡萄糖消耗及乳酸生成实验表明,过表达RBMX均能抑制膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成(P<0.05),敲低RBMX均能促进膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成(P<0.05)。结论RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌的发生发展和糖酵解能力,有望成为膀胱癌诊断和治疗的潜在分子靶标。 展开更多
关键词 X连锁rna结合基序蛋白 m2型丙酮酸激酶 膀胱癌 PKm2 糖酵解
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鸡枞菌多糖对急性酒精肝损伤小鼠超微病理结构及ADH2、ALDH2 mRNA表达的影响 被引量:15
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作者 赵云霞 陶明煊 +2 位作者 程光宇 邢佳 陆文娟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第5期195-199,共5页
目的:从小鼠肝脏超微病理结构及酒精代谢相关酶乙醇脱氢酶2(alcohol dehydrogenase 2,ADH2)、乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)的m RNA表达方面研究鸡枞菌多糖(refined polysaccharides from Termitomyces albuminosus,RPTA... 目的:从小鼠肝脏超微病理结构及酒精代谢相关酶乙醇脱氢酶2(alcohol dehydrogenase 2,ADH2)、乙醛脱氢酶2(aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)的m RNA表达方面研究鸡枞菌多糖(refined polysaccharides from Termitomyces albuminosus,RPTA)对酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:小鼠被随机分为空白对照组、模型对照组、药物对照组(联苯双酯组,150 mg/(kg·d))、RPTA各剂量组(1 00、200、400 mg/(kg·d)),连续灌胃30 d,空白对照组灌胃等量生理盐水。第31天,给予50%乙醇(12 m L/kg)建立动物急性肝损伤模型。12 h后处死,取小鼠肝脏分别观察肝组织超微结构变化,并采用荧光实时定量聚合酶链式反应(real time polymerase chain reaction,real time-PCR)法检测肝脏ADH2和ALDH2的m RNA表达。结果:超微结构观察结果表明,模型对照组小鼠肝脏细胞内可见大量脂滴,细胞核呈不规则形态,局部核膜凹陷严重,线粒体严重变形,线粒体嵴模糊,内质网严重肿胀,核糖体脱落;而RPTA小鼠肝细胞内上述病变有所改善,尤以高剂量组最佳。Real time-PCR结果表明,与空白对照组相比,模型对照组ADH2和ALDH2的m RNA表达量降低,而RPTA组随着剂量的增加ADH2和ALDH2 m RNA的表达逐渐升高。结论:RPTA可以上调ADH2和ALDH2 m RNA的表达,具有改善小鼠酒精性肝损伤状况的作用。 展开更多
关键词 鸡枞菌多糖 酒精性肝损伤 超微病理结构 乙醇脱氢酶2 乙醛脱氢酶2 m rna
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腺病毒介导的cox-2反义RNA对食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响 被引量:7
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作者 李胜保 吴清明 +2 位作者 王强 王小虎 谢国建 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第5期517-521,共5页
目的:构建表达人cox-2反义RNA的腺病毒载体,研究其对人食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响.方法:把人cox-2的cDNA片段反向克隆于穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下,获得pAd-AShcox-2,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码... 目的:构建表达人cox-2反义RNA的腺病毒载体,研究其对人食管癌细胞株DNA和蛋白质合成的影响.方法:把人cox-2的cDNA片段反向克隆于穿梭质粒pHCMVSP1A的CMV启动子之下,获得pAd-AShcox-2,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码cox-2反义RNA的重组腺病毒--Ad-AShcox-2.经PCR的方法鉴定为阳性克隆并大量扩增、纯化,转染食管癌细胞EC9706,采用生长细胞计数,免疫细胞化学、3H-TdR、3H-Leucine掺入法,研究对食管癌细胞生长、DNA及蛋白质合成的影响.结果:成功构建并扩增、纯化得到编码cox-2反义RNA的重组腺病毒Ad-AShcox-2,滴度达0.86×1012PFU/ml;Ad-AShcox-2感染肿瘤细胞后,cox-2表达水平明显降低,3H-TdR、3H-Leucine掺入量明显减少,与对照组在48h、72h、96h比较有显著性差异(q48h=16.36及16.36,q72h=39.07及19.90,q96h=54.80及30.33;P<0.001);同时发现食管癌细胞的生长明显受抑制.结论:表达cox-2反义RNA重组腺病毒感染人食管癌细胞后可降低cox-2表达水平,使DNA合成降低、蛋白质合成减少,且抑制食管癌细胞生长、增生,提示抑制cox-2的表达可能是治疗食管癌的一种新途经. 展开更多
关键词 腺病毒 cox-2 反义rna 食管癌 DNA合成 蛋白质合成
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shRNA沉默COX-2基因表达对人肝癌细胞生物学特性的影响 被引量:3
8
作者 徐可树 王华枫 +1 位作者 钱伟 汪步海 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期32-37,共6页
背景与目的:环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在肝癌组织中呈高表达,参与肝癌的发生发展。本研究探讨COX-2短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对人肝癌细胞株HepG2中COX-2表达及细胞粘附侵袭力的影响。方法:以人COX-2mRNA编码区中... 背景与目的:环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在肝癌组织中呈高表达,参与肝癌的发生发展。本研究探讨COX-2短发夹状RNA(shorthairpinRNA,shRNA)对人肝癌细胞株HepG2中COX-2表达及细胞粘附侵袭力的影响。方法:以人COX-2mRNA编码区中两条不同序列作为RNA干扰靶点,分别构建两个以绿色荧光蛋白GFP为报告基因的shRNA真核表达载体质粒WBH1和WBH2,应用阳离子脂质体转染HepG2细胞,分别观察转染后24h、48h、72h和96hCOX-2mRNA和蛋白表达的变化,检测抑制效果。MTT法观察HepG2细胞与Matrigel胶粘附性的变化。Transwell小室实验以穿过人工基底膜的细胞数量评估HepG2细胞体外侵袭力的变化。结果:质粒在HepG2细胞的转染率约为60%。质粒WBH1导入细胞24h、48h、72h和96h后,COX-2mRNA表达抑制率分别为18.5%、88.6%、52.8%和42.4%(P<0.01),蛋白表达抑制率分别为10.3%、80.5%、45.3%和39.0%(P<0.01)。转染WBH2质粒的HepG2细胞COX-2表达无明显变化(P>0.05)。转染后48h,转染WBH1质粒的HepG2细胞与Matrigel胶的粘附率为(6.0±0.4)%,与空白对照组(11.4±0.2)%相比明显下降(P<0.01),抑制率为47.4%。转染WBH1质粒的细胞穿膜数为(8.2±1.5),与空白对照组(22.8±1.7)相比有显著性差异(P<0.01),抑制率为63.7%。转染WBH2质粒的HepG2细胞粘附率和穿膜细胞数均无明显变化(P>0.05)。结论:shRNA真核表达载体明显干扰HepG2细胞的COX-2表达,能有效抑制HepG2细胞的体外粘附侵袭力。 展开更多
关键词 短发夹状rna cox-2 肝肿瘤 粘附 侵袭
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siRNA沉默PKM2抑制人胃腺癌SGC-7901细胞增殖能力和糖酵解水平 被引量:8
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作者 朱珠 陈敏 +4 位作者 张晓琦 张斌 丁希伟 杨燕 邹晓平 《胃肠病学》 2014年第8期458-463,共6页
背景:M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈特异性高表达,与肿瘤的生长和糖酵解水平密切相关,是潜在的治疗靶点。目的:探讨siRNA沉默PKM2对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及糖酵解水平的影响。方法:选择未转染SGC-7901细胞、... 背景:M2型丙酮酸激酶(PKM2)在肿瘤组织中呈特异性高表达,与肿瘤的生长和糖酵解水平密切相关,是潜在的治疗靶点。目的:探讨siRNA沉默PKM2对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭以及糖酵解水平的影响。方法:选择未转染SGC-7901细胞、转染空质粒pU6 SGC-7901细胞以及转染PKM2 siRNA的SGC-7901细胞,采用蛋白质印迹法和Real-time PCR检测PKM2 mRNA和蛋白表达;免疫荧光法检测PKM2在细胞内的表达和分布;CCK-8法、流式细胞分析、细胞迁移和细胞侵袭实验检测细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭能力;蛋白质印迹法、分光光度法分别检测葡萄糖转运蛋白-1(Glut-1)、乳酸脱氢酶A(LDHA)蛋白表达以及葡萄糖、乳酸浓度、乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果:与其余两组相比,PKM2 siRNA转染组细胞PKM2 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05),胞内表达明显减弱,细胞增殖、迁移和侵袭能力明显下降,细胞凋亡明显增加(P<0.05),Glut-1、LDHA蛋白表达明显下降(P<0.05),葡萄糖摄取率、乳酸产量、LDH活性明显减低(P<0.05)。结论:RNA干扰能抑制胃癌SGC-7901细胞PKM2mRNA和蛋白表达,进而抑制胃癌细胞的增殖能力和糖酵解水平。 展开更多
关键词 胃肿瘤 细胞增殖 有氧糖酵解 rna干扰 m2型丙酮酸激酶
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靶向COX-2基因的RNA干扰治疗裸鼠胃癌的实验研究 被引量:2
10
作者 谯敏 向廷秀 +1 位作者 赵蕾 王丕龙 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第4期552-555,565,共5页
目的:利用RNA干扰技术在裸鼠体内抑制COX-2基因表达,探讨RNA干扰对胃癌治疗的特异性和相关机制。方法:设计靶向COX-2基因的siRNA,构建重组表达质粒pTZU6+1-siRNA-COX-2并导入裸鼠皮下移植瘤,在体外诱导RNA干扰,采用RT-PCR法、免疫组化... 目的:利用RNA干扰技术在裸鼠体内抑制COX-2基因表达,探讨RNA干扰对胃癌治疗的特异性和相关机制。方法:设计靶向COX-2基因的siRNA,构建重组表达质粒pTZU6+1-siRNA-COX-2并导入裸鼠皮下移植瘤,在体外诱导RNA干扰,采用RT-PCR法、免疫组化法同时检测处理组和对照组COX-2基因表达,Western blotting检测了与细胞增殖相关信号分子p53、PCNA及Ki67蛋白表达。结果:pTZU6+1-siRNA-COX-2导入裸鼠皮下移植瘤后14天,肿瘤体积明显变小。COX-2的mRNA表达由98.36%下调到43.44%,COX-2蛋白表达由86.24%下调至47.59%。PCNA及Ki67蛋白表达均明显下调。对照组各指标均无明显变化。结论:siRNA明显抑制了COX-2表达,并抑制肿瘤生长,这可能与上调p53蛋白和下调PCNA及Ki67蛋白表达有关。 展开更多
关键词 rna干扰 胃癌 cox-2 PCNA KI67
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RNA干扰VEGF-C基因下调COX-2、Bcl-2表达对乳腺癌细胞凋亡的影响 被引量:3
11
作者 顾斐 邹强 倪泉兴 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期168-171,共4页
目的利用人血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)小RNA干扰(siRNA)表达载体——重组质粒pSilencer3.0-VEGF-C/siRNA,研究VEGF-C基因下调抑制COX-2、Bcl-2表达及对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435的体外作用。方法... 目的利用人血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)小RNA干扰(siRNA)表达载体——重组质粒pSilencer3.0-VEGF-C/siRNA,研究VEGF-C基因下调抑制COX-2、Bcl-2表达及对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435的体外作用。方法pSilencer3.0-VEGF-C/siRNA表达质粒和阴性对照质粒稳定转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435,RT-PCR和Western blot检测转染前后VEGF-C、COX-2基因和VEGF-C、COX-2、Bcl-2蛋白的表达;MTT法和流式细胞仪检测VEGF-CRNA干扰对细胞的作用。结果pSilencer3.0-VEGF-C/siRNA转染乳腺癌细胞MDA-MB-435,VEGF-C基因和蛋白水平表达量明显降低,COX-2和Bcl-2表达下调,细胞体外活性下降,72h后凋亡率达60%。结论针对人VEGF-C基因的siRNA表达载体抑制VEGF-C表达的同时下调COX-2和Bcl-2的表达,促进乳腺癌细胞MDA-MB-435的凋亡。 展开更多
关键词 乳腺癌 血管内皮生长因子-C rna干扰 cox-2 BCL-2
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COX-2特异性的siRNA诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡 被引量:1
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作者 谯敏 向廷秀 王丕龙 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第20期2707-2709,共3页
目的利用RNA干扰(RNAi)技术在体外抑制COX-2基因表达,探讨RNAi诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的可能途径。方法设计靶向COX-2基因的小干扰RNA(si RNA),构建重组表达质粒pTZU6+1-si RNA-COX-2,并导入SGC-7901细胞,在体外诱导RNAi,用RT-PCR、... 目的利用RNA干扰(RNAi)技术在体外抑制COX-2基因表达,探讨RNAi诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的可能途径。方法设计靶向COX-2基因的小干扰RNA(si RNA),构建重组表达质粒pTZU6+1-si RNA-COX-2,并导入SGC-7901细胞,在体外诱导RNAi,用RT-PCR、免疫细胞化学、末端标记细胞凋亡检测法(TUNEL)和Western Blot检测COX-2基因表达、细胞凋亡和凋亡相关基因的表达。结果重组质粒pTZU6+1-si RNA-COX-2导入SGC-7901细胞株后,COX-2表达明显下调,细胞出现凋亡(P<0.05),Caspase-9和Caspase-3表达明显上调。结论 RNA干扰明显抑制了靶基因COX-2的表达,并可能通过激活Caspase途径诱导SGC-7901细胞凋亡。 展开更多
关键词 rna干扰 cox-2 胃癌 细胞凋亡
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靶向呼吸道合胞病毒M2基因pshRNA载体质粒的构建及意义 被引量:2
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作者 崔玉霞 王萍玲 +1 位作者 周娟 杨锡强 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期1-4,54,共5页
目的:构建针对呼吸道合胞病毒(RSV)M2基因m RNA的短发卡结构状RNA(shRNA)重组载体质粒,为利用RNA干扰技术抗RSV感染的深入研究奠定基础;方法:按shRNA设计原则,选择RSV-M 2基因作为靶基因,设计19bp长的能产生短发卡结构的两段DNA反向重... 目的:构建针对呼吸道合胞病毒(RSV)M2基因m RNA的短发卡结构状RNA(shRNA)重组载体质粒,为利用RNA干扰技术抗RSV感染的深入研究奠定基础;方法:按shRNA设计原则,选择RSV-M 2基因作为靶基因,设计19bp长的能产生短发卡结构的两段DNA反向重复序列,中间以9bp序列间隔,经退火形成互补双链,克隆至转录载体pgenesil-1上,重组质粒经酶切和测序鉴定,然后将构建成功的重组质粒转染H EP2细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光细胞发生率以评估转染效率。结果:将设计合成的DNA片段成功克隆至载体上,经酶切及序列鉴定为目的序列,并且荧光显微镜下观察细胞有较多的绿色荧光蛋白表达。结论:成功构建了针对RSV M 2基因m RNA的shRNA重组载体质粒,可利用重组质粒进一步研究其对RSV感染的抑制,从而为抑制RSV感染寻找新的基因治疗手段。 展开更多
关键词 呼吸道合胞病毒 m2基因 短发卡结构状rna 重组质粒
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反转录病毒介导靶向瞬时感受器电位M7基因siRNA抑制RBL-2H3细胞的活化 被引量:1
14
作者 吕志强 吴毅梅 +2 位作者 江山平 张蔚 黄林洁 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期1199-1204,共6页
背景:钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用。瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道。目的:构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗... 背景:钙离子在肥大细胞活化后的脱颗粒反应起重要作用。瞬时感受器电位M7(transient receptor potential melastatin7,TRPM7)是肥大细胞重要的候选通道。目的:构建携带大鼠靶向TRPM7-siRNA的反转录病毒载体并检测其对大鼠RBL-2H3细胞抗原活化的影响。方法:实验设计3个TRPM7-siRNA序列和1个无关对照序列,克隆到酶切的pSuper-retro-neo-GFP反转录病毒载体,用重组质粒pSuper-retro-neo-GFP-shTRPM7-(1,2,3)采用脂质体Lipofectamine 2000转染RBL-2H3细胞,采用Western blot检测干扰效率。筛选出最有效的pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7与包装质粒共转染293FT细胞生成反转录病毒并感染RBL-2H3细胞,荧光实时定量PCR及Western blot检测TRPM7-siRNA的沉默效果。检测β-氨基已糖苷酶活性探讨RBL-2H3细胞抗原活化程度的改变。结果与结论:转染后的各组细胞中siTRPM7-3转染组的沉默效率最高(P<0.05)。pSuper-retro-neo-GFP-siTRMP7-3干扰组的TRPM7基因的mRNA水平和蛋白水平显著下调,致敏后其β-氨基已糖苷酶活性明显降低(P<0.05)。结果提示,降低TRPM7基因的表达可抑制RBL-2H3细胞的抗原活化。 展开更多
关键词 反转录病毒 rna干扰 RBL-2H3细胞 瞬时感受器电位m7通道 心脏 组织工程
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Pkm2-shRNA真核表达载体的构建和对急性早幼粒细胞白血病耐药细胞株的作用研究 被引量:1
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作者 孙明莉 王冠军 +5 位作者 李江 崔久嵬 张爱丽 王中南 李晓萌 李薇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期85-89,共5页
本研究旨在构建M2型丙酮酸激酶(M2-pyruvate kinase;PKM2)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体,研究特异性沉默pkm2基因对急性早幼粒细胞白血病(APL)耐药性的影响。设计pkm2基因的3个特异shRNA序列,利用基因重组技术将其克隆到含有U6... 本研究旨在构建M2型丙酮酸激酶(M2-pyruvate kinase;PKM2)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体,研究特异性沉默pkm2基因对急性早幼粒细胞白血病(APL)耐药性的影响。设计pkm2基因的3个特异shRNA序列,利用基因重组技术将其克隆到含有U6启动子的PBSU6载体上,通过酶切和测序等方法鉴定重组质粒的正确性。利用Western blot方法检测了pkm2-shRNA对急性早幼粒细胞白血病耐药细胞株NB4R2细胞内源性M2-PK蛋白表达的影响,通过NBT还原实验检测了pkm2基因沉默后NB4R2细胞分化情况。结果表明:成功构建了3个有效特异的pkm2-shRNA,在蛋白水平上证明了其对NB4R2细胞M2-PK基因沉默的有效性。发现干涉M2-PK基因后,可显著地促进耐药细胞NB4R2细胞的分化。结论:DNA载体途径的pkm2-shRNA能促进早幼粒细胞白血病细胞的分化,具有基因靶向药物开发前景。 展开更多
关键词 m2型丙酮酸激酶 小发夹结构rna NB4R2细胞 急性早幼粒细胞白血病
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siRNA下调RRM2抑制人乳腺癌细胞增殖与迁移及其裸鼠皮下移植瘤的生长 被引量:1
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作者 郭绍文 林韵 李泽民 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1001-1005,共5页
目的:探讨siRNA下调核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase M2,RRM2)基因对人乳腺癌细胞MCF-7体外增殖、迁移和体内成瘤的影响。方法:实时定量荧光PCR(real-time PCR)及Western blotting技术检测人乳腺癌细胞MCF-7和人正常乳腺... 目的:探讨siRNA下调核糖核苷酸还原酶M2(ribonucleotide reductase M2,RRM2)基因对人乳腺癌细胞MCF-7体外增殖、迁移和体内成瘤的影响。方法:实时定量荧光PCR(real-time PCR)及Western blotting技术检测人乳腺癌细胞MCF-7和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A中RRM2 mRNA及蛋白的表达;用合成的siR-NA-RRM2不同时点和不同剂量转染MCF-7细胞,用real-time PCR检测对RRM2基因的沉默效率;用CCK-8方法检测细胞增殖;用Transwell细胞迁移系统检测siRNA-RRM2对MCF-7细胞迁移能力的影响;裸鼠移植瘤实验检测siRNA-RRM2沉默MCF-7细胞的RRM2基因后对肿瘤生长的影响。结果:MCF-7细胞RRM2 mRNA和蛋白比MCF-10A细胞高表达;用siRNA-RRM2转染MCF-7乳腺癌细胞能时间及剂量依赖性下调RRM2基因表达;CCK-8方法结果显示下调RRM2基因会时间及剂量依赖性抑制MCF-7细胞增殖,而人正常乳腺上皮细胞增殖没有显著变化;Transwell细胞迁移系统检测显示下调RRM2基因显著抑制了MCF-7细胞的迁移能力;转染siRNA-RRM2下调RRM2基因能显著抑制裸鼠移植瘤的生长。结论:RRM2的过表达与人乳腺癌细胞的高增殖和迁移能力有关,抑制RRM2的功能是治疗乳腺癌的一个潜在的治疗策略。 展开更多
关键词 核糖核苷酸还原酶m2 rna干扰 乳腺肿瘤
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RNA干扰沉默食管癌COX-2基因的实验研究 被引量:1
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作者 赵晖 王树成 《山东大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第3期256-259,共4页
目的:观察人食管鳞癌细胞(Eca-109)在RNAi抑制其环氧合酶2(COX-2)基因表达后生物学行为的变化。方法:采用DNA栽体细胞内表达siRNA技术,以含RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的质粒pSUPER,针对人COX-2mRNA分别构建重组质粒peiRNA-C1、psiRNA... 目的:观察人食管鳞癌细胞(Eca-109)在RNAi抑制其环氧合酶2(COX-2)基因表达后生物学行为的变化。方法:采用DNA栽体细胞内表达siRNA技术,以含RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的质粒pSUPER,针对人COX-2mRNA分别构建重组质粒peiRNA-C1、psiRNA-C2,转染Eca-109细胞,对照组采用空白质粒pSUPER。ELISA测定培养液上清PGE2浓度,Real Time PCR检测细胞COX-2mRNA水平,流式细胞术分析细胞凋亡与周期分布,绘制细胞生长曲线。结果:在psiRNA-C1、psiRNA-C2转染Eta-109细胞24h后,细胞COX-2mRNA水平分别下降了17.9%、56.1%,培养液上清PGE2浓度分别下降了10.8%、54.9%;psiRNA-C2组细胞生长明显减缓,G0-G1期细胞比例增加(P〈0.01),G2-M期细胞减少(P〈0.05)、细胞凋亡率增加(P〈0.01)。结论:RNAi技术可显著抑制人食管鳞癌细胞COX-2基因表达,从而导致肿瘤细胞增殖减缓、凋亡增加。 展开更多
关键词 rna干扰 基因 cox-2 食管肿瘤
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针对Cox-2基因siRNA载体构建和沉默效应 被引量:2
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作者 赵国新 徐慧丹 +3 位作者 赵新合 冯龙 卫艳萍 胡军 《河南科技大学学报(医学版)》 2007年第1期1-4,共4页
目的构建针对人Cox-2基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰对肺癌细胞Cox-2基因表达的沉默作用。方法设计Cox-2靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSINsi-hU6载体,转化扩增后进行序列测定。用脂... 目的构建针对人Cox-2基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察RNA干扰对肺癌细胞Cox-2基因表达的沉默作用。方法设计Cox-2靶向的发夹状siRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSINsi-hU6载体,转化扩增后进行序列测定。用脂质体包裹转染人肺癌细胞NCI-H446,采用RT-PCR检测Cox-2基因mRNA表达的变化。结果把针对Cox-2基因的siRNA的双链寡核苷酸片段克隆入pSINsi-hU6载体,经过酶切鉴定与测序,结果正确;RT-PCR检测显示,Cox-2基因的表达水平明显降低。结论成功构建出显著沉默细胞Cox-2基因表达的siRNA载体。 展开更多
关键词 rna干扰 cox-2 RT-PCR
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针对PKM2多位点RNAi质粒载体的构建和筛选 被引量:1
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作者 王润秀 钟悦 +2 位作者 刘金英 吴小云 谢富华 《赣南医学院学报》 2014年第3期325-328,353,共5页
目的:构建针对M2型丙酮酸激酶(PKM2)基因3个可干扰序列设计小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)载体,为下一步探索Ad-PKM2介导PKM2 RNAi对乳腺癌细胞作用及机制建立基础。方法:根据RNAi设计软件设计并合成3对shRNA模板序列,依次将它们... 目的:构建针对M2型丙酮酸激酶(PKM2)基因3个可干扰序列设计小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)载体,为下一步探索Ad-PKM2介导PKM2 RNAi对乳腺癌细胞作用及机制建立基础。方法:根据RNAi设计软件设计并合成3对shRNA模板序列,依次将它们克隆至pGenesil载体中构建重组质粒,通过MTT检测筛选出对乳腺癌细胞株MCF-7增殖效应影响最强的RNAi序列。结果:酶切鉴定和测序结果证实RNAi载体构建成功,均能高效感染MCF-7并抑制MCF-7细胞的增殖,pGenesil-PKM2-(1+2+3)的抑制能力最强。结论:针对PKM2多靶点RNAi载体成功构建,为下一步研究PKM2被沉默后细胞生物学行为的变化打下基础。 展开更多
关键词 m2型丙酮酸激酶 rna干扰 小发夹rna 乳腺癌
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T790 M及COX-2在晚期非小细胞肺癌EGFR-TKI耐药中的临床研究 被引量:2
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作者 徐丹 王于理 +3 位作者 李晶 巩平 李瑞阳 袁野 《广州医药》 2019年第4期57-61,共5页
目的探讨晚期非小细胞肺癌患者外周血T790 M及COX-2表达与EGFR-TKI耐药及预后之间的相关性。方法收集60例晚期非小细胞肺癌患者血清,运用ARMS、ELISA法分别对晚期NSCLC患者进行T790 M、COX-2检测,同时收集治疗前后的临床资料。依据RECIS... 目的探讨晚期非小细胞肺癌患者外周血T790 M及COX-2表达与EGFR-TKI耐药及预后之间的相关性。方法收集60例晚期非小细胞肺癌患者血清,运用ARMS、ELISA法分别对晚期NSCLC患者进行T790 M、COX-2检测,同时收集治疗前后的临床资料。依据RECIST1.1实体瘤评价标准,分为有效组(CR、PR、SD之和)和耐药组(PD),分析两组患者外周血T790 M及COX-2表达与EGFR-TKI耐药及预后之间的差异性。结果60例患者中有58例完成实验,失访1例,DNA提取失败1例。58例完成实验的患者经过EGFR-TKI靶向治疗后,总有效率为25.9%;两组患者治疗前T790 M基因阳性突变均较低,差异无统计学意义(P=0.345),EGFR-TKI靶向治疗后,两组患者T790 M基因阳性突变均提高(χ^2=35.153,P<0.001),耐药组治疗前后T790 M基因阳性突变升高,比较差异有统计学意义;靶向治疗前有效组患者血清COX-2基线水平高于耐药组患者(t=44.159,P<0.001),靶向治疗后的血清COX-2水平与治疗前相比,有效组患者降低(t=36.180,P<0.001),耐药组患者升高(t=-17.852,P<0.001)。Spearman等级相关分析示,EGFR-TKI治疗后晚期非小细胞肺癌患者中T790 M基因状态分析与COX-2表达呈正相关(r=0.747,P<0.001);COX多因素分析显示,T790 M基因突变状态(HR=0.168,95%CI为0.056~0.509,P=0.002)和COX-2水平(HR=0.245,95%CI为0.066~0.911,P=0.036)是影响PFS的独立因素。结论血清COX-2水平与T790 M基因突变之间可能存在相关性,而且通过二者的检测可有助于判断晚期NSCLC患者治疗的疗效及作为预测EGFR-TKI药物预后,为临床治疗NSCLC提供新的思路。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 EGFR-TKI T790m cox-2
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